松材线虫病防治技术方案(修订版)(3)

2019-04-21 17:34

2、微波处理:将疫木制成板材或方料,利用特定的疫木微波除害处理设施设备,根据疫木的含水率、厚度和温度安排微波处理时间,直至达到处理要求。具体方法见附录7、8。

3、集中熏蒸处理:疫木熏蒸常用熏蒸剂有溴甲烷(CH3Br)、硫酰氟(SO2F2)、磷化铝(AlP)。在远离居民区、公共场所、人口稠密的地方,选取地势平坦、土壤紧密、向阳、通风良好、交通方便的地方作为熏蒸场所,对疫木进行熏蒸处理,直至达到处理要求。具体方法见附录9。

4、制板处理:在松褐天牛非羽化期,将疫木按照胶合板、刨花板、中密度纤维板生产工序,加工制作成胶合板、刨花板、中密度纤维板,并在加工制作过程中,将松材线虫及其媒介昆虫杀死,达到除害处理的目的。疫木处理过程中枝桠和废料应在同期全部烧毁。

5、烧炭处理:将疫木置于炭窑中燃烧2-5小时后,封闭点火孔。

6、造纸处理:利用疫木进行造纸,在造纸生产的制浆工序中将媒介昆虫和松材线虫杀死,达到疫木除害处理的目的。

7、烧毁处理:选取远离居民区、建筑物且交通方便的地点进行烧毁。可使用易燃物引火焚烧疫木。

8、林间就地用作培育茯苓的材料:将感病松木伐倒后,截成长度为60厘米的木段,集中在林地内晾晒10天后,当木段含水量约在25%-28%时,接茯苓菌种。接种后将木段放入80厘米×50厘米×35厘米规格的坑内,坑内及段木上撒杀虫剂,再掩土填埋、压实,覆土厚度高出木段15厘米。

9、林间就地套袋熏蒸:将砍伐的树干及直径1厘米以上的树枝截成长度100厘米-150厘米的木段,在林间空地装入0.8厘米以上厚度的塑料农膜袋里,投放56%磷化铝药片进行熏蒸,用量每立方米体积20克,密封10天-15天。熏蒸袋上有警示标志(注明:处理单位、处理时间、药剂名称)。使用磷化铝熏蒸处理应在室外最低温度10℃以上时进行。

(二)疫木安全利用

疫木安全利用是指将疫木在指定的厂家通过热处理、微波处理后进行利用,或在指定的厂家将疫木制作胶合板、刨花板、中密度纤维板、造纸,或将疫木就地用作培育茯苓的材料。有条件的地方应开展疫木安全利用,以减少损失。

六、检疫封锁措施

(一)松材线虫病发生省份要按照《森林法》、《植物检疫条例》和《国务院办公厅关于进一步加强松材线虫病预防和除治工作的通知》要求,划定松材线虫病疫

区,并在疫区周围设定4公里隔离区。

(二)严格按照国家林业局有关规定,做好对辖区内生产、使用、经营松木及其制品的单位和个人进行全面登记工作,建立国家、省、市、县四级《生产使用经营松木单位和个人档案》,并建立厂家报告制度。

(三)要经常性地对辖区内松苗繁育基地、加工、使用、经营松木的单位进行检疫检查,严厉查处非法加工、利用、经营疫情发生区松材及其制品的行为。实施检疫检查的抽样比例,苗木按一批货物总件数的5%进行抽样、木材按总件数的10%进行抽样。所抽样品的取样分离鉴定方法按本文“疫情监测”中的“取样、分离”和“鉴定”栏规定进行。发现带疫材料就地实施除害处理(处理方法参见本文“疫木除害处理”),切实防止松材线虫病传播。对有组织实施疫木安全利用的,有关森检部门要指定专人全过程监督。

(四)以县级行政区为单位,需要调入松木包装材料的,调入单位或个人应向当地有关植物检疫机构申报,经审查后,视情况提出检疫管理意见,同时向调出方森防检疫机构提出《检疫要求书》。

(五)发生区要在主要通道设立森林植物检疫检查站(或木材检查站),配备必要的专职或兼职检疫人员,对运出发生区的松木及制品进行检查,发现非法调运疫木及其制品必须就地进行除害处理。

运输松材线虫病发生区松木包装材料车辆途经的有关植物检疫检查站要查验有关运输单证、标志等。如发现途经货物的松木包装材料未达到标准要求的,应当依法予以扣留,并通知所在有关植物检疫机构处理。可采用的处理措施有:除害处理、改变用途、退运处理、销毁等。处理费用及其损失由责任人承担。

七、预防措施

(一)黄山、张家界等重点预防区要采取人工清除松林内衰弱松木、施放天敌等综合措施防治松褐天牛,降低疫情发生风险;要结合造林项目,有计划地对现有纯松林进行改造;对有特殊意义的松树,应采用保护剂进行重点保护。

(二)其他未发现松材线虫病疫情的适生区要加强疫情监测普查,做到及时发现及时根除。对松褐天牛虫口密度较大的林分,要采取人工、化学等措施降低虫口密度。要加强对纯松林的改造,增加阔叶林比例,提高林分的抗病能力。

(三)加强复检工作,松木包装材料调入地的有关植物检疫机构复检发现有松材线虫或松褐天牛活体存在的迹象,应采取紧急措施,如除害处理、焚烧或作人造板、造纸原料或拒绝入境等,并将有关情况及时通知调出地有关植物检疫机构。

(四)由于全球气候变暖可能造成松材线虫病适生区北移,北京、天津、河北、

山西、甘肃等省份要按照上述要求加强松材线虫病预防工作,防止疫情入侵。

附录:1、线虫检测管检测松材线虫技术

2、松材线虫实时PCR检测技术 3、噻虫啉防治松褐天牛成虫技术方法 4、名松古树打孔注药保护技术

5、松材线虫病疫木热处理技术(热风烘干箱处理) 6、松材线虫病疫木热处理技术(热风干燥窑处理) 7、松材线虫病疫木微波处理技术(辊轴式) 8、松材线虫病疫木微波处理技术(隧道式) 9、松材线虫病疫木熏蒸处理技术

附录1

线虫检测管检测松材线虫技术

1 适用范围

松属Pinus植物的活体及木材、木制品等。 2 分散型松材线虫取样

2.1 引诱剂配制和引诱管制备 2.1.1 将α-蒎烯(Acros Organics,98%),β-蒎烯(Fluka Chemie AG,80%)和长叶烯(Acros Organics,99%),按照比例1∶2.7∶1.1配制后用 40μl n-hexane溶解 (Fisher Chemicals,99%)成浓度为7mg/40μl的引诱剂备用。

2.1.2 取样管由一个2ml离心管制成 (北京Zohonice 科技有限发展公司,北京),内装引诱剂载体橡胶头(通州顺义塑料厂,北京),将0.8%琼脂凝固在载体上方周围。取样管封口储藏在4?C待用。在试验前,将40 μl引诱剂滴入到橡胶头,待溶剂被挥发后,进行取样。 2.2 取样方法

2.2.1 11月—来年的4月,林间松木中松材线虫属于分散型松材线虫,并聚集在松墨天牛蛹室周围。取样时,用电钻垂直打入松墨天牛椭圆形取食孔(2cm深,1cm直径),并使之与天然蛹室相通, 引诱管插入取样孔,2-24小时后拔出。

2.2.2 对非当年病害原木进行调查,如果找到椭圆形松墨天牛侵入孔,即电钻垂直打入取食孔(2cm深,1cm直径),并使之与天然蛹室相通,引诱管插入取样孔,2-24小时后拔出。 3 繁殖型松材线虫取样 3.1 引诱剂配制

将α-蒎烯(Acros Organics,98%),β-蒎烯(Fluka Chemie AG,80%)和长叶烯(Acros Organics,99%),按照比例1∶0.1∶0.01配制后用40μl n-hexane溶解(Fisher Chemicals,99%)成浓度为130mg/40μl的引诱剂备用。 3.2 取样孔横截面部位选择

取样孔选择在树体南面进行打孔,深度为2-3cm。 3.3 取样高度选择

3.3.1 对于初步表现症状的松树:叶失绿80%,无刻槽,枝条有天牛取食痕迹,无腐生线虫,无小蠹、白蚁危害;取样部位选择树干上部分杈侧枝处,有天牛取食痕迹部位附近。

3.3.2 当症状表现为叶失绿99%,针叶红褐色,无刻槽,无小蠹、白蚁危害:取样部位为树干2m附近。

3.3.3 当症状表现为下部针叶黄褐色,上部针叶红褐色。天牛刻槽多,有天牛蛀屑,有小蠹、白蚁等次生害虫危害:取样部位为树干1-1.5m处。

3.3.4 当症状表现为枯萎死亡,刻槽多,小蠹、白蚁等次生害虫危害严重,线虫量很少,选择树干基部1m处。 4 镜检

室内用水将引诱管中琼脂冲出,倒入3.5cm直径培养皿中,放置片刻,在显微镜下观察线虫形态,对松材线虫加以鉴定。根据种的特征、与近缘种的区别鉴定是否为松材线虫。

附录2

松材线虫实时PCR检测技术

1 检测程序

松材线虫分离→基因组DNA提取→实时PCR扩增→数据分析→结果判定。 2 检测试剂

2.1 DNA提取试剂:线虫裂解液

2.2 实时PCR扩增试剂:探针(TaqMan-11)、引物对(F11/R11)、TaqMan Universal PCR Master Mix

3 操作步骤

3.1 线虫基因组DNA的提取

3.1.1 吸取2-3ul线虫混合液于Eppendorf管中; 3.1.2 加入18 ul F11液;

3.1.3 加入2 ul预冷R11液体; 3.1.4 加入17 ul的双蒸水(C液);

3.1.5 在PCR仪上,于65-70℃条件下保温处理35分钟;在95℃条件下保温处理10分钟;

3.1.6 12000rpm离心5min,上清液(X液)用于扩增。 3.2 准备实时PCR扩增反应板

在Eppendorf管中依次加入下列成分: 3.2.1 PCR Master MIX (K液)5 ul;

3.2.2 10 umol/L TaqMan 探针(L液)0.5 ul;

3.2.3 10 umol/L正向引物与负向引物(M)共0.5 ul; 3.2.4 上述步骤1所提取的DNA模版(X液)0.5 ul; 3.2.5 灭菌双蒸水(C液)3.5 ul。 3.3 创建反应板文件

3.3.1 点击file下拉菜单中的new(新建文件)。

3.3.2 在plate Nme 栏编辑文件名,如 2006-09-16,单击Next。 3.3.3 选择要添加到反应板文件的探针。

a. 单击选择一个探针(本实验中,taqMan探针选fam,TaqMan-Mgb探针选stdl); b 单击add键。探针即被添加到反应板文件中; c 单击Next键。

3.3.4 为每反应孔指定探针和任务。

a 单击一个反应孔(对于重复,选择一组反应孔),以便选取它(们)。 b单击探针名,为反应孔选定探针。

c 单击task(任务)栏的下边,以指定探针任务。 d 单击ues(使用)。所选反应孔中显示探针任务和颜色。 e 单击Finish(完成)。SDS软件即创建反应板文件。 3.3.5 输入样本名。

a 单击View > well Inspector(反应孔设定)。 b 单击一个反应孔或选中多个重复反应孔。 c 输入样本名。

d 重复a至c,直到所有反应孔均指定好样本名。


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