e 关闭well Inspector。 3.4 设计热循环条件 反应程序
50℃ 2min，95℃ 10min;
35个循环程序为95℃ 15s，60℃ 35s。 3.5 运行反应板 3.6 数据分析 3.7 结果判读
根据CT值或扩增信号均可以判读检测样品中是否含有松材线虫。
3.7.1 CT值：由下表可知，单条松材线虫扩增的CT值小于30，因此，在实际检测过程中，当检测样品的CT值小于35时，即可非常肯定地判断检测样品中含有松材线虫。但当检测样品的CT值大于35或无CT值时，即可判断检测样品中不含有松材线虫。
Sample 1条 2条 3条 4条 5条 6条 7条 8条 29.6178 29.0644 28.4527 28.2937 26.3149 25.2148 24.2696 24.2434 CT 实时PCR扩增图谱
3.7.2 扩增信号
如上图，2号待测样本与4号阳性对照的扩增图谱有阳性扩增信号，则2号待测样本中含有松材线虫，1号、3号待测样本与5号阴性对照没有阳性扩增荧光信号，则1号、3号待测样本中不含有松材线虫。
4 松材线虫实时PCR检测仪器设备
实时PCR基因扩增，离心机，冰箱，漩涡混合气，2.5ul、20 ul、200ul移液器。
附录3
噻虫啉防治松褐天牛成虫技术方法
1 主要剂型
我国林业目前主要使用剂型为2%噻虫啉微胶囊悬浮剂、1%噻虫啉微胶囊粉剂。 2 使用方法
2.1 2%噻虫啉微囊悬浮剂使用方法 2.1.1 飞机低容量喷雾防治
防治适期：在松褐天牛羽化初期和第一次药剂有效期末（约隔30日）各喷一次。 药剂：2%噻虫啉微囊悬浮剂。
方法：以1∶8比例稀释后按500－700ml/亩用量飞机低容量喷雾。 2.1.2 林间用机动喷雾机防治
防治适期：同上。
药剂：2%噻虫啉微囊悬浮剂。
方法：将2%的噻虫啉微胶囊悬浮剂兑水稀释2000倍后以2000ml/亩用量，用机动喷雾机喷雾，将药液喷洒在枝干、树冠和其他天牛成虫喜出没之处，以树皮微湿为宜。
注意事项：忌阴雨天喷雾，若施药6小时内遇雨，药效会大大降低。正常情况下，2%噻虫啉微囊悬浮剂降雨量较少地区的持效期可应达到60天以上，在连续小雨地区，其防效可达30天以上，但在施药后若遇暴雨天气与其他因素影响而造成药剂流失，应考虑补防。
2%噻虫啉微囊悬浮剂还应达到以下技术指标：
a. 有效成分含量应大于2%
b. 游离有效成分释放速度小于5% c. 成囊率大于95% d. 悬浮率大于75% e. 热贮稳定性：合格
f. 微囊平均粒度小于5um
2.2 1%噻虫啉微囊粉剂使用方法 2.2.1 林间用机动喷粉机防治
防治适期：同上。
药剂：1%噻虫啉微胶囊颗粒剂。
方法：以1∶1.5比例将1%噻虫啉微胶囊粉剂与滑石粉或高岭土拌匀后，按500g/亩用量，用机动静电喷粉机进行林间喷粉。
注意事项：在郁闭度较高的林区可适当加大药剂用量。喷粉时要注意风向，以顺风为宜。喷粉选择清晨林间露水较多时为最佳，以便药剂更好地黏附在树枝和树干上。 2.2.2 利用灭虫布撒器防治
防治适期：同上。
药剂：1%噻虫啉微胶囊粉剂。
药剂用量及使用方法：按1∶1.5比例加入滑石粉或高岭土拌匀后，制成椭圆型（长径180±5mm，宽径110±0.5mm）、重约1400g的灭虫药包，使用便携式或车载式布撒器进行作业，每个药包防治面积为6－8亩。
方法：检查灭虫弹标签是否与发射项目一致，核对无误后剪去标签；去掉灭虫弹尾部延期管的保护帽；将延期管头朝下，用送弹器将灭虫弹送入发射器底部；将发射药管装入尾栓高压
室内，拧紧击发装置；拉起击针，将拉火绳置于发射器上，发射人员退至安全距离后进行发射即可。
注意事项：灭虫药包及布撒器安全管理要严格按《国家林业局关于印发<灭虫药包及布撒器安全管理暂行方案>的通知》（林造发[2006]210号）执行。
注：正常情况下，2%噻虫啉微囊悬浮剂降雨量较少地区的持效期可应达到60天以上，在连续小雨地区，其防效可达30天以上；但在施药后若遇暴雨天气与其他因素影响而造成药剂流失，持续效果会明显下降，需要补防。
1%噻虫啉微囊粉剂，还应达到以下技术指标 a. 有效成分含量大于1% b. 微囊平均粒径小于10 um c. 水分含量小于2%
d. 游离有效成分释放速率小于5% e. 热贮稳定性：合格 f. 流动性：合格 3 其他
如用其他剂型，可根据药剂使用说明书，参照上述方法使用。
附录4
名松古树打孔注药保护技术
1 松材线虫免疫注射液
1.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。
1.2 使用方法：用打孔器杆与树干成45°夹角，夹角开口斜向上；移去或剪开注射瓶的瓶尖头部，头部插入注入孔，然后再注射瓶底开出气孔，即可输液；输液结束后需封住伤口。 1.3 剂量：见下表
不同胸径松树免疫注射用药量表 胸径 株株10ml/瓶 50ml/瓶 3 3/m 0.5% 1% 2% 0.5% 1% 2% （cm） /m<9 50 0.02 1支 25 0.04 10－13 1支 1支 10 0.1 14－16 2支 1支 2支 5 0.2 17－21 2支 4支 0.4 22－30 2.5 1支 2支 1 1 31－39 2支 4支 1支 2支 2 40－51 0.5 2支 4支 4 52－69 0.25 4支 8支 5 70－75 0.2 5支 9支 >76 0.1 10 10支 20支
2 3%甲维盐·阿维菌素注干液剂
2.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。
2.2 使用方法：在松树基部斜打一夹角45°、方向斜向上、直径4mm、深5cm的小孔；用刀片斜切注药嘴，用大头针打透气盲孔，再将注药嘴插入打好的小孔中。 2.3 剂量：2ml/cm胸径。（或：树木胸径15cm以下，每株注25ml一瓶；胸径20－30cm，每株注50ml一瓶；胸径30cm以上，每株注50ml两瓶。）
注意：注药嘴以切出注药孔即可，不宜切的过大；透气盲孔扎透即可；注药瓶内药液1－2天时间流完为宜；树皮较厚的松树，用刀刮一小块致韧皮部后再打孔。 3 松线光
3.1 使用时间：当年12月至次年3月10日前，最佳时期为当年12月至次年1月。
3.2 使用方法：在树干距离地面1m左右处用穿孔器打一夹角45°、方向斜向上、直径约6－7mm，深约5－8cm的孔。拆掉容器的注入头部，注意不要漏药液，头部插入注入孔，轻击容器底部，然后用针头在底打通空气流通孔，注入药液。注入完毕后，拔出空容器，然后在注入孔内插入愈合剂或木塞子盖上。
3.3 剂量： 20cm以下胸径的使用3支；胸径20cm以上，每增加5cm，增加使用1支。（每支60ml）
注意：尽量在天气晴朗的白天进行；选择注孔位置，需避免死节、受伤部位及枝桠下部。 4 1.2%阿维菌素微胶囊水悬浮剂 4.1 使用时间：松褐天牛幼虫期。 4.2 使用方法：按松树的胸径计算，胸径10－15cm打一个孔，孔距地面30cm，孔径2.0－2.5cm，与树干呈30°向下倾斜，孔深15－20cm。将药注入孔内并用粘土将孔洞封死。
4.3 剂量：马尾松胸径每厘米用药1ml，黑松胸径每厘米用药1.5ml。 5 保树灵
5.1 使用时间：松褐天牛幼虫期。
5.2 使用方法：呈45°钻孔或刀劈，深5－6cm；旋下小盖，刺破封口，插上插头，旋紧后将插头紧插在口中。
5.3 剂量：一般情况下，胸径8－10cm插一瓶；胸径大于10cm的插2－4瓶，尽量插主枝上部主干和一级主枝分叉下方，或每根主枝上一瓶。 6 16%喹硫磷·丁硫克百威乳剂
6.1 使用时间：松褐天牛羽化初期前3个月。
6.2 使用方法：在树干基部（离地面0.5m处）的3个方向，用10mm钻头的打孔机，打向下与树干纵轴呈45°的斜孔，孔深8－10cm，打孔注入16%喹硫磷·丁硫克百威乳剂1∶1药液，药剂用特制塑料瓶包装，30ml/瓶，将瓶口部分插入孔中注入药剂。完成注射后，拔出空瓶，用木塞封住药孔，注射孔用黏土封口，进行保护和治疗。 6.3 剂量：每年注射一次，注射剂量见下表。
树干打孔注射16％喹硫磷·丁硫克百威乳剂用量参考 胸围（cm） 30－47 48－63 64－78 79－94 95－110 111－125 126－141 142－157 158－172 173－188 188以上
原药（ml） 10 20 30 40 60 100 120 140 160 180 200 1∶1药液（ml） 20 40 60 80 120 200 240 280 320 360 400