海 南 师 范 大 学
本 科 生 毕 业 论 文
题目：海南热带兰花的抗氧化活性研究
系 别： 化学系 学 院： 化学与化工学院
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指 导 教 师 签 名： 日期：
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目 录
1 引言 ....................................................................................................... 1 2 实验部分 ............................................................................................... 2 2.1 主要仪器、试剂和材料 .................................................................. 2 2.2 实验方法 .......................................................................................... 3 2.2.1 实验原理 .................................................................................. 3 2.2.2 羟自由基检测 .......................................................................... 3 2.2.3 羟自由基清除率的测定.......................................................... 3 3 结果与分析 ........................................................................................... 4 3.1荧光光谱 ............................................................................................ 4 3.2实验原理验证 .................................................................................... 4 3.3实验条件的研究 ................................................................................ 6 3.3.1 反应时间的影响 ...................................................................... 6 3.3.2 H2O2溶液用量的影响 ............................................................... 7 3.3.3 FeSO4溶液用量的影响 .......................................................... 8 3.4 正交实验确定最佳实验条件 .......................................................... 9 3.5 方法精密度测定 ............................................................................ 10 3.6 方法准确度测定 ............................................................................ 10 3.7 热带兰花水提物对羟基自由基的清除作用 ................................ 11 3.8石斛兰玉玲珑水提物的抗氧化活性及最佳的提取工艺研究 ..... 12 3.8.1浸泡时间的影响 ....................................................................... 12 3.8.2花瓣质量的影响 ....................................................................... 13 3.8.3超声时间的影响 ....................................................................... 14 3.8.4浸泡温度的影响 ....................................................................... 15 3.8.5正交试验确定最佳提取条件 ................................................... 16 3.8.6热带兰花各个部位的抗氧化性 ............................................... 17 4 结论 .................................................................................................... 18 致谢 .......................................................................................................... 18 参考文献 .................................................................................................. 18
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海南热带兰花的抗氧化活性研究
摘 要: 目的：考察几种海南热带兰花的抗氧化活性。方法：采用罗丹明-6G为荧光探针,分别测定几种海南热带兰花的的水提物对Fenton反应生成的羟基自由基的清除率，优化了体系的测量条件，筛选出了对羟基自由基具有较好清除率的兰花的最好提取工艺条件。实验结果表明，体系的最佳测量条件：罗丹明-6G与H2O2用量的摩尔比为1：60，与FeSO4用量的摩尔比为1：20，反应时间40min。最佳的提取条件为: m(石斛兰玉玲珑)：v(水)= 2.5：50（g/mL），提取温度50 ℃，浸泡3 h，超声提取60 min，对羟自由基率的清除率可达88.35%，海南热带兰花对羟自由基有清除作用，其中石斛兰玉玲珑的清除效果最好。
关键词: 罗丹明-6G； Fenton反应；羟自由基；热带兰花
Tropical orchids of antioxidant activity
Abstract:To investigate antioxidant activity of several Hainan tropical orchids. Methods: Rhodamine-6G as the fluorescent probe, to measure hydroxyl radical scavenging rate in Fenton reaction of water extract of several Tropical orchids, optimize the system of measurement conditions, and selected the best orchid extraction process on hydroxyl radical good clearance. The results showed that the best measuringcondition: the amount of rhodamine-6G and H2O2 molar ratio of 1:60, and the amount of the molar ratio of FeSO4 1:20, reaction time:40min. The best extraction conditions: m (Dendrobium exquisite jade): v (water) = 2.5:50 (g / mL), extraction temperature 50 ℃, soaked 3 h, ultrasonic extraction of 60 min, the clearance rate of hydroxyl radical rate was 88.35%, Tropical Orchid has Scavenging Action of hydroxyl radicals, Dendrobium jade exquisite have best removal effection. Key words: Rhodamine-6G; Fenton reaction; hydroxyl radical ；tropical orchid
1 引言
热带兰花为兰科草本植物，热带兰花品种繁多，可分为石斛兰、文心兰、莫氏兰等。石斛兰有很好的药用价值，据《神农本草经》中记载石斛兰有滋养胃阴,生津止渴，兼能清胃热。主治热病伤津，烦渴、舌干苔黑。现代研究表明，石斛兰中含石斛碱等生物碱，粘液质、淀粉等。有一定解热镇痛作用；能促进胃液分泌，助消化；有增强新陈代谢、抗衰老等作用[1]。
科学表明，人类的许多疾病是由于体内存在过剩的羟基自由基·OH而引起的。常见的有心脑血管疾病，肿瘤、老年性痴呆、白内障、糖尿病、肝病以及过早衰老等。传统的一些人工合成抗氧化剂如丁基羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸甲酯(PG)等，由于有较大的毒副作用，许多国家已经停止或严格限制它们的使用，从植物原料中提取天然抗氧化剂是生物医药和食品的发展方向之一。兰花中含有大量的黄酮和多糖，这些天然的有机分子均有可能被羟基自由基氧化，从而具有清除羟基
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自由基的作用。
目前，常用的抗自由基活性检测方法主要有： 化学发光法[2]、比色法[3]、电子自旋共振法[4]、荧光光谱法[5,6]等。本实验采用Fenton反应生成·OH，在稀硫酸介质中Fe2+-H2O2体系产生的羟自由基可以氧化罗丹明-6G使其荧光猝灭，体系的荧光强度降低。抗氧化剂（热带兰花水提物）与体系中的罗丹明-6G争夺羟自由基从而使体系荧光强度减弱程度减小，据此原理建立了一种测定抗氧化剂对羟自由基清除作用的新方法。本方法灵敏度高、操作简便迅速，适用范围广泛，是测定羟基自由基和筛选天然抗氧化食品的有效方法之一。
海南拥有得天独厚的自然环境优势，是我国热带兰花生产最佳区域。目前海南热带兰花产业化发展程度较低，主要集中为种植及鲜花销售上[7-10]，如文心兰、莫氏兰、石斛兰等热带兰花的种植栽培[11-13]。而一些高附加值的兰花深加工产品，如兰花茶、兰花保健品、兰花化妆品等市场目前尚未开发。本文将对海南热带兰花的抗氧化活性进行研究，为综合开发利用海南热带兰花提供理论依据和新的发展方向。
2 实验部分
2.1 材料、试剂和仪器
材料：石斛兰：彩虹、迷人蕉、约定、玉玲珑、花蝴蝶、绿意、艾玛、畅想、玉 观音; 莫氏兰：小淘气、小斑吉、金色阳光、午后阳光、丹顶鹤、黛安娜; 蜻蜓兰：红宝石、梦妮、贝莎、美洲豹、紫气东来;文心兰：黄金3号 试剂：罗丹明-6G（New Jersey USA,分析纯）；FeSO4（天津市化学试剂一厂，分析纯）；H2O2（30%，广州市番禺力强化工厂，分析纯）；抗坏血酸（广东光华化学厂有限公司，分析纯）；H2SO4溶液（98%，广州市东红化工厂，分析纯）；
仪器：RF-5301PC荧光分光光度计（日本岛津）；BS124S电子天平（德国赛多利斯股份有限公司）；SK2200H 超声波发生器（上海科导超声仪器有限公司）；DF-101S集热式磁力搅拌器（金坛市金南仪器制造有限公司）
2.2 实验方法
2.2.1 实验原理
依据文献[14-15]，在稀硫酸介质中，Fenton反应是以H2O2为氧化剂，以Fe2+为催化体系的氧化法。其反应机理如下：
Fe2+ + H2O2 → Fe3+ + OH- + ·OH Fe + H2O2 → Fe + ·O2 + 2H
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