F2502001501005001:41:81:121:161:201:241:28罗丹明6G与FeSO4的摩尔比
图5 FeSO4溶液用量的影响
3.4正交实验确定最佳实验条件
综合考虑，选择罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比(A), 罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比(B)，反应时间C(min)三个影响因素，设计三因素三水平的正交实验来确定最佳实验条件，因素水平设计见表5。实验结果如表6所示。
表5 因素水平表
因素 1 2 3
A 1：16 1：18 1：20
B 1：50 1：60 1：70
C 30 35 40
表6 正交实验的结果与分析
样品 1 2 3 4
A 1:16 1:16 1:16 1:18
B 1:50 1:60 1:70 1:50
C 30 35 40 35
荧光强度F 42.31 28.95 30.45 37.66
△F 383.1 396.4 394.9 387.7
- 8 -
5 1:18 1:60 40 6 1:18 1:70 30 7 1:20 1:50 40 8 1:20 1:60 30 9 1:20 1:70 35 K1 1174 1171 1186 K2 1184 1198 1184 K3 1204 1193 1192 k1 391.5 390.3 395.4 k2 394.5 399.4 394.5 k3 401.4 397.7 397.5 极差R 9.9 9.1 2.9 主次顺序 A＞B＞C 优水平 A3 B2 C3 优组合 A3B2C3
28.19 26.78 25.19 20.85 25.95
397.2 398.6 400.2 404.5 399.5
由表6正交实验分析可知，测定体系荧光强度的实验条件最优组合为：A3 B2 C3，
即罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比为1：60；罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比为1：20；反应时间为40min；也即：0.01mmol/L罗丹明-6G溶液用量为1mL，0.1mol/L H2SO4溶液用量为0.18mL，1mmol/L的H2O2溶液用量为0.6mL，0.1mmol/L的FeSO4溶液用量为2mL，反应时间为40min。
由表6极差分析结果显示，因素影响主次顺序为A＞B>C，即：罗丹明-6G与FeSO4溶液的摩尔比为主要因素，罗丹明-6G与H2O2溶液的摩尔比为次要因素，反应时间为不重要因素。
3.5方法精密度测定
在3.4所得最佳的实验条件下，按照2.2.3所述方法进行精密度实验。即：在10mL比色管中依次加入1.0mL 0.01mmol/L罗丹明-6G溶液，0.18mL 0.1mol/L H2SO4-溶液， 0.6mL 1mmol/L的H2O2溶液，同时加入1.0mL 1mmol/L VC溶液，然后加入2.0mL 0.1mmol/L的FeSO4溶液，反应时间是40min，平行测定荧光强度6次，相对标准偏差的计算公式如下，实验结果如表7所示。 标准偏差计算公式: 标准差 S =
?(x?x)n?12 (3-1)
相对标准偏差计算公式：RSD =
(3-2)
表7 方法的精密度实验
- 9 -
样品 1 2 3 4 5 6 平均值 RSD（%） F样 205.9 208.8 211.6 211.6 216. 4 206.4 210.1 ------- F样-F 193.3 196.2 199.0 199.1 203.8 193.8 197.5 ------- ·OH清除率/﹪
46.82 47.53 48.20 48.21 49.36 46.94 47.84 1.98
其中Fo =425.4 F=12.59 △F=Fo-F=412.8
本实验的相对标准偏差为1.98﹪，这表明本方法具有较好的稳定性和重现性。
3.6方法准确度测定
在选定的最佳实验条件下进行工作曲线的绘制，分别加入1mmol/L抗坏血酸（VC）溶液0.20mL、0.60mL、1.00mL，按方法2.2.3测定体系的荧光强度。得到线性回归方程为Y= 70.90375 X+58.05008，相关系数R=0.9993。另取2支比色管，在实验最佳条件下，分别加入1mmol/L抗坏血酸（VC）溶液0.30mL、0.90mL，采用同样的方法测定体系的荧光强度。结果如表8和图6所示。
表8 方法准确度的测定
样品 1 2 3 4 5
R6G/ml 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00
H2SO4/ml 0.18 0.18 0.18 0.18 0.18
H2O2/ml 0.60 0.60 0.60 0.60 0.60
FeSO4/ml 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00
VC 0.20 0.60 1.00 0.30 0.90
F 72.84 99.37 129.6 79.92 121.2
- 10 -
F130120?1101009080?700.20.40.60.81.0VC的体积/mL图6 方法准确度的测定
由公式3-3计算得到，当体系加入VC体积为0.3mL和0.9mL时，相对误差分别为0.76% 和-0.51%，说明该实验所采用的方法系统误差较小，准确度较高。
3.7海南热带兰花水提物对羟自由基的清除作用
将兰花花瓣称取1g，放在50ml锥形瓶中，加水50.00ml，在室温下（25 ℃左右），浸泡3h，超声60min，取水提物1.00ml，在本实验选定的体系最优条件下，即0.01mmol/L罗丹明-6G溶液用量为1mL，0.1mol/L H2SO4溶液用量为0.18mL，1mmol/L的H2O2溶液用量为0.6mL，0.1mmol/L的FeSO4溶液用量为2.0mL，反应时间为40min，测定几种热带兰花水提物对羟基自由基的清除率。结果见表9。结果表明，石斛兰中玉玲珑的水提物对羟基自由基的清除很好。
表9热带兰花的花瓣水提物对羟基自由基的清除作用
名称 石斛兰彩虹 石斛兰迷人蕉 石斛兰约定 石斛兰玉玲珑
拉丁文名
Den. Chaopraya Gem×Burana
jabe-compactum
Den. Woon Leng×Compactum
- 11 -
F
314.9 283.1 235.5 356.2
·OH清除率/﹪
61.06
54.20 43.92 69.98
石斛兰绿意 Den. Burana Green 石斛兰艾玛 Den. Emma White 石斛兰畅想 Den. Emma White 石斛兰玉观音 Den. Burana jabe×Compactum 文心兰黄金3号 Onc. Gower Ramsey 'Gold 3' 莫氏兰小淘气 Mokara Choapraya Boy 莫氏兰小斑吉 Mokara Chittl Orange Spot 莫氏兰金色阳光 Mokara Sunshine Yellow 莫氏兰午后阳光 Mokara Kitiya 莫氏兰丹顶鹤 Mokara Top Red 莫氏兰黛安娜 Mokara Dianah Shore 蜻蜓兰红宝石 Aranda Ruby Makense 蜻蜓兰梦妮 Arathera Anne Block 蜻蜓兰贝莎 Arathera Beatrics NG 蜻蜓兰美洲豹 Aranda Bertha Brega 蜻蜓兰紫气东来 Aranda Chark Kuan \
F0 = 495.300 , F = 32.080
334.4 323.9 298.4 293.1 264.4 236.3 286.5 266. 0 216.0 261.4 268.3 236.5 271.2 298.7 215.3 271.1 65.27 63.00 57.49 56.36 50.16 44.10 54.93 50.49 39.71 49.51 51.01 44.14 51.63 57.56 39.56 51.60
3.8石斛兰玉玲珑水提物的抗氧化活性及最佳的提取工艺研究
3.8.1花的浸泡时间的影响
在最佳实验条件下，分别称取玉玲珑花瓣1g，加入50mL蒸馏水，在室温条件下，超声 60min，浸泡时间分别为1h，2h，3h，4h，5h，6h，7h。测量其荧光强度，结果表明，浸泡时间对花瓣的水提物的抗氧化活性影响不大。实验数据见表10和图7。
表10 浸泡时间的影响
样品 1 2 3 4 5 6 7
浸泡时间/h
1 2 3 4 5 6 7
花的质量/g 1.0016 1.0021 1.0009 1.0041 1.0023 0.9999 1.0001
F 193.8 210. 2 230.8 233.8 231.4 232.5 230.9
·OH清除率/﹪
40.15
43.86 48.59 49.26 48.73 48.96 48.61
- 12 -