A．具有自我复制功能
B．在细胞分裂时恒定地传给子代细胞 C．携带有某些抗性基因 D．环状双链DNA分子 E．分子量小
2．关于限制性内切核酸酶的描述,下列错误的是( ) A．该酶辨认的位点一般为连续的四个或六个碱基 B．经此酶切割的 DNA有两种不同的切口:平端和粘端切口
C．根据该酶的组成、所需因子及裂解 DNA方式的不同,可分为三类
D．两段DNA只有经同一限制性内切核酸酶的水解产生的切口才能连接
3．重组 DNA技术中常用的限制性内切核酸酶为( ) A．Ⅰ类限制性内切核酸酶 B．Ⅱ类限制性内切核酸酶 C．Ⅲ类限制性内切核酸酶 D．Ⅳ类限制性内切核酸酶 E．Ⅴ类限制性内切核酸酶 4．cDNA文库包括该种生物的( ) A．所有基因 B．内含子和调控区 C．所有结构基因
D．某些蛋白质的结构基因 E．所有 mRNA
5．目前在基因工程中获得目的 DNA最常用的方法是( ) A．化学合成法 B．筛选基因组文库 C．筛选 cDNA文库 D．聚合酶链式反应 E．从基因组 DNA中分离
6．某限制性内切核酸酶按 GAC↓CGGTG 方式切割产生的末端突出部分含( )。 A．一个核苷酸 B．两个核苷酸 C．三个核苷酸 D．四个核苷酸 E．六个核苷酸
7．在核酸分子杂交实验中，核酸探针( ) A．是用来检测蛋白质序列的 B．只能用于检测 DNA C．只能用于检测 RNA D．是带有特殊标记的核酸片段
E．不具有特定的序列
8．关于 PCR 技术的描述,下列错误的是( ) A．以 DNA复制为基础而建立起来的技术 B．在数小时内能使目的基因扩增至百万倍以上 C．反应体系需要模板、一对引物、四种 dNTP、耐热 DNA聚合酶和缓冲溶液 D．以变性-退火-延伸为一个周期
E．利用 PCR 技术可完全无误地扩增基因 9．用于鉴定 RNA的技术是( ) A．Southern印迹分析 B．亲和层析 C．Northern印迹分析 D．Western印迹分析 E．免疫印迹技术
10．Southern印迹的 DNA探针可与下列哪种情况杂交?( )
A．可与任何含有互补序列的 DNA片段 B．可与任何含有相同序列的 DNA片段 C．只与完全相同的 DNA片段 D．只与完全相同的 RNA片段
E．可与任何 DNA序列或 RNA序列结合 11．克隆羊多莉的诞生主要采用了下列哪项技术?( ) A．转基因技术 B．核转移技术 C．基因剔除技术 D．核酸序列分析 E．基因沉默技术
12．Sanger 双脱氧终止法中双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)缺少的羟基是（ ） A．1`位羟基和 2`位羟基 B．2`位羟基和3`位羟基 C．3`位羟基和 4`位羟基 D．3`位羟基和5`位羟基 E．3`位羟基
15．下列哪种方法不是基因诊断的常用技术方法?( ) A．核酸分子杂交 B．基因测序 C．细胞培养 D．PCR E．基因芯片技术
16．目前认为最为确切的基因诊断方法是( ) A．核酸分子杂交 B．基因测序 C．细胞培养 D．RFLP 分析 E．聚合酶链反应
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17．下列哪种方法不是目前基因治疗所采用的方法?( ) A．基因调控 B．基因增补 C．基因置换 D．基因修复 E．基因重组
18．利用特定的反义核酸阻断变异基因异常表达的基因治疗方法是( )。 A.基因灭活 B.基因矫正 C.基因置换 D.基因增补
E．“自杀基因”的应用
19．通过目的基因的非定点整合,使其表达产物补偿缺陷基因的功能或加强原有功能的基因 治疗方法是( ) A.基因灭活 B.基因矫正 C.基因增补
D.“自杀基因”的应用 E.基因置换
20．PCR 技术不可用于( ) A．检测微量目的基因 B．某些遗传病的检测 C．基因的体外突变 D．蛋白质结构分析 E．获取目的基因
21．关于转基因技术的描述，错误的是( )。 A．将目的基因整合入受精卵 B．将目的基因整合入胚胎干细胞 C．接受了目的基因的动物能够遗传 D．转基因技术可用于建立动物模型 E．是动物整体克隆的核心技术
22．下列关于 RNAi 技术描述错误的是( ) A．能降解特定的 mRNA B．干扰因子前身为单链 RNA C．是一个依赖 ATP 的过程 D．对目的基因 DNA序列没有影响 E．只作用于外显子
23．下列不是结构基因组学研究内容的是( ) A．构建物理制图 B．构建遗传制图 C．基因组 DNA序列测定
D．探讨基因的表达模式 E．绘制转录图谱
24．下列用于蛋白质组学研究的主要技术有( ) A．双向电泳技术 B．蛋白质信息组学 C．蛋白质芯片技术 D．飞行质谱技术 E．以上都是
25．下列技术中，不属于基因沉默技术的是( )。 A．反义 RNA技术 B．核移植技术 C．三链技术 D．干扰 RNA技术 E．核酶技术 二、 多选题
1．可用作克隆载体的 DNA分子有：（ ） A．质粒 DNA B．噬菌体 DNA C．细菌 DNA D．病毒 DNA
2．关于重组体的筛选,下列哪些方法属于直接选择法?( )
A．抗药性标志选择 B．标志补救 C．分子杂交法 D．免疫学方法
3．以核酸分子杂交为基础的基因诊断方法有( )。 A．限制性核酸内切酶酶谱分析法 B．DNA限制性片段长度多态性分析法 C．等位基因特异寡核苷酸探针杂交法（ASO） D．PCR/单链构象多态性分析(SSCP) 4．基因工程基本过程包括：（ ） A．目的 DNA的获取 B．目的 DNA与载体的连接 C．将重组分子导入受体菌
D．重组DNA分子转化受体菌的筛选 5．参与聚合酶链反应体系组成的是：( ) A．DNA引物 B．DNA模版 C．RNA聚合酶 D．Taq DNA 聚合酶 三、 名词解释 1．基因重组
2．限制性核酸内切酶
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3．核酸分子杂交 4．基因载体 5．聚合酶链式反应 6．人类基因组计划 7．生物芯片技术 8．蛋白质组 9．RNA干扰 10． 基因诊断 四、 问答题
1．简述基因重组主要步骤？ 2．阐述蓝-白斑筛选的基本原理？
3．在基因工程中获取目的基因的途径包括哪几个方面？
4．在基因重组过程中筛选阳性菌株的方法及其原理？
5．举例说明基因诊断的应用？
6．人类基因组计划：是在 1986 年由美国学者提出，其目的是测定总长度约 1.7 米，由近30 亿个核苷酸组成的人基因组DNA全序列，它的实施将会为认识疾病的分子机制以及诊断和治疗提供重要的依据。
7．生物芯片技术：是指将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物的表面，然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量。
8．蛋白质组：是指一个细胞内的全套蛋白质，包含了某一环境条件、某一生命阶段、某一生理或病理状态下，生命体的细胞或组织所表达的蛋白质种类和水平。
9．RNA 干扰技术：是指在特定因子作用下，导入或细胞内生成的双链 RNA（dsRNA）降解生成约 22个核苷酸长度的 siRNA，后者能通过碱基互补配对原则和靶 mRNA结合，诱导靶 mRNA降解，从而导致特定基因沉默，干扰基因表达。 10. 基因诊断：是指利用分子生物学及分子遗传学的技术和原理，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病做出诊断的方法。 四、 问答题
1．基因重组主要步骤包括：
1） 获得目的基因 目的基因指与重组 DNA 工作最终目的相关的基因，包括基因组DNA和逆转录合成的双链 cDNA两大类，常通过人工合成、基因组 DNA分离、cDNA文库筛选及聚合酶链反应等方法获取。
2） 在体外将目的基因与适宜的载体 DNA连接形成重组体，该重组体有自我复制的能力。 3） 通过转化或转染等方法将重组DNA引入宿主细胞。
4） 从中筛选出成功转化带有重组体的阳性细胞克隆。
5） 重组蛋白质在宿主细胞的表达(即目的基因的表达)。
2．蓝-白斑筛选的原理：由 M13噬菌体改造而来的 pUC 系列是常用的基因工程克隆载体，在其基因间隔区插人大肠杆菌一段调节基因和 lacZ（β-半乳糖苷酶）的 N端 146 个氨基酸残基编码基因，其编码产物为 β-半乳糖苷酶的 α 链，突变型 lac - 大肠杆菌可表达该酶的 ω 片段(酶的 C 端
第十四章 基因重组与分子生物学技
术 参考答案
一、 单选题
1．A；2．D；3．B ；4．C；5．D；6．B；7．D；8．E；9．C；10．A；11．B；12．B；
15．C；16．B；17．E；18．A；19．C；20．D；21．E；22．B；23．D；24．E；25．B 二、 多选题
1．ABD；2．ABC；3．ABC；4．ABCD；5．ABD 三、 名词解释
1．基因重组：是指基因在染色体分子内或分子间的重新排布。
2．限制性核酸内切酶： 可以识别 DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA，被称为基因工程的手术刀，广泛使用。
3．核酸分子杂交：异源的DNA分子，或DNA与 RNA在复性过程中，由于单链分子之间存在着一定程度的碱基配对从而形成杂化双链，称为核酸分子杂交。
4．基因载体：能携带外源基因并具有自我复制及表达能力的 DNA 分子称基因载体，它能实现外源基因的无性繁殖或表达。
5．聚合酶链式反应：DNA的体外酶促扩增反应，是指在体外通过DNA聚合酶反应模拟体内 DNA复制来合成 DNA的过程，能快速特异地扩增所希望的目的基因或DNA片段。
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区)。当 pUC 系列作为载体转入宿主细胞 lac - 大肠杆菌时，β-半乳糖苷酶的 α、ω 两个片段能同时表达，形成完整且具有活性的 β-半乳糖苷酶，后者可使人工底物 X-gal 转变为蓝色；如果外源基因插入位点在pUC 载体的 lacZ α 片断的基因内，形成的重组子即使转入 lac - 大肠杆菌也不能形成完整的 β-半乳糖苷酶，表现为重组菌在 含 X-gal 的培养基上生长时成白色菌落。这一现象称α-互补，可用于重组体筛选，又称蓝、白斑实验。 3．基因工程中获取目的基因的途径包括： 1）化学合成法 已知某种基因的核苷酸序列，或根据某种基因产物的氨基酸序列推导出该多肽链编码的核苷酸序列，再利用 DNA 合成仪通过化学合成原理合成目的基因。
2）从基因组 DNA 分离 采用一定的方法，直接从基因组中获取基因。低等生物的基因组 DNA 比较简单，且有不少基因已知其准确定位，可从基因组中直接分离得到目的基因。对高等生物可先建立基因组 DNA 文库，再采用适当的筛选方法可从中 选筛出含有感兴趣基因的菌株，再进行扩增，将重组 DNA 分离、回收、以获得目的基因克隆。 3）从cDNA文库中筛选 用逆转录酶可合成与真核生物mRNA互补的DNA(即cDNA)（相当于只有编码序列的基因组 DNA），然后将得到的双链 cDNA 插入载体中并克隆化。这样得到的一套 DNA 片段的克隆称为 cDNA 文库。该文库包含细胞表达的 各种 mRNA信息。采用标记的目的基因探针，从 cDNA文库中就可直接筛选到连续编码的目的基因，可用于生产某些蛋白质。
4）采用聚合酶链反应扩增目的基因 如果知道待扩增目的基因片段两侧或附近的 DNA序列，据此合成互补引物，可进行目的基因扩增。可以直接从染色体DNA扩增，也可用 RNA为起始模板，称逆转录 PCR(RT-PCR)。应用 PCR 技术可把极微量 生物材料中的 DNA扩增至足够使用量，是目前最常用的目的基因获取方法。
4．基因重组过程中筛选阳性菌株的方法及其原理： （1）直接选择法(direct selection)，其特点是直接测定基因或基因表型。
1） 抗药性标志选择 如果重组质粒携带有某种抗药性标志基因，只有含这种抗药性基因转化的细菌才能在含有该抗生素的培养板上生存并形成菌落，据此可筛选出转化菌。
2）标志补救 转化或转染的外源基因表达产物可弥
补基因缺陷性宿主菌的性状，可以利用营养突变菌株进行筛选，即标志补救。例如α-互补筛选。 3）分子杂交法 用与外源 DNA互补的同位素标记探针与重组子DNA进行杂交筛选。将待测核酸样品结合在硝酸纤维膜上，再与溶液中的标记探针杂交。含有目的基因的重组 DNA 与探针结合，而被同位素标记。利用这种方法可以直接选择并鉴定目的基因。
（2）免疫学方法筛选
利用特异抗体与目的基因的表达产物(作为抗原)之间相互作用进行筛选，而不是直接去鉴定靶基因。免疫学方法又可分为酶免疫检测分析、放射免疫方法等。免疫学方法特异性强、灵敏度高，尤其适宜于筛选无任何选择标志的基因。 5． 举例说明基因诊断的应用：
1）遗传病的产前诊断：采用 PCR 技术，胚胎组织、绒毛组织、羊水细胞都可以作为检查材料，可通过扩增致病基因诊断出有遗传病危险的胎儿，及早结束妊娠，杜绝患儿出生。镰形细胞贫血病、地中海贫血、抗凝血酶Ⅲ缺乏、甲型血友病、假肥大性肌营养不良、囊性纤维病等疾病都可按上述方法作产前诊断。
2）恶性肿瘤的基因诊断：包括癌基因、抑癌基因在内的多基因结构和表达的异常是肿瘤病变的主要因素之一。RFLP 技术、PCR-RFLP 技术和寡核苷酸杂交法等都可以用于肿瘤相关基因诊断。 3）病原体的基因诊断：这些病原体包括病毒、细菌、衣原体等。使用 PCR 技术直接检测这些病原体特异基因的存在，以诊断各种感染性疾病，具有方法简便、结果可靠、快速等优点。
4）基因诊断在判定个体对重大疾病易感性、器官移植组织配型及在免疫学和法医学等多个领域都有着广泛的应用。
第十五章 血液的生物化学
一、选择题
1、血液 NPN 中含量最多的是 A． 甘氨酸 B．色氨酸 C．尿素 D．肌酐 E．尿酸
2、下列哪项不是血浆成分？
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A．糖 B．血小板 C.酶 D．非蛋白氮 E．水
3、下列哪句话正确？
A、血浆蛋白在血液中大多带负电荷 B．血浆成分中，血浆蛋白含量最多 C．临床可随时采血做生化分析 D．尿素和尿酸都是核酸代谢的产物 E. 清蛋白是结合蛋白质
4、属于成熟红细胞具有的代谢途径有 A、氧化磷酸化
B、糖酵解 C、2，3-二磷酸甘油支路 D、磷酸戊糖通路
5. 红细胞中存在磷酸戊糖途径，其主要意义 A．提供能量 B．生成NADH c．生成核糖 D．生成 2，3—DPG
E.为 G-S-S-G 还原提供NADPH
6．在红细胞内能使高铁血红蛋白(MHb)还原的物质是 A. G-SH B．GPT C．GOT D、FAD E. G-S-S-G
7. 血浆蛋白中含量最多的是 A、?1 球蛋白 B、?2 球蛋白 C、?球蛋白 D、?球蛋白 E、清蛋白 8．下列关于红细胞的叙述正确的是 A、含有 DNA聚合酶 B、能进行氧化磷酸化
C、含有葡萄糖—6—磷酸脱氢酶 D、能进行三羧酸循环； E、含有丙酮酸脱氢酶复合体
9．下列哪些物质是血红素合成的基本原料 A、甘氨酸
B、琥珀酰 CoA C、铁离子 D、胆色素
10．下列哪种酶是血浆功能酶? A、 ALA合成酶
B、脂蛋白脂肪酶 C、淀粉
D、谷丙转氨酶酶 E、乳酸脱氢酶
11．2，3-二磷酸甘油支路主要功能是 A、用于葡萄糖的活化 B、维持红细胞膜内外离子平衡 C、用于 G-SH 的合成 D、用于NADPH 的合成 E、调节血红蛋白的运氧功能 12． 关了成熟红细胞的叙述正确的是
A、有线粒体 B、能合成核酸 C、能合成蛋白质 D、靠糖酵解供能 E、能合成血红素 二、名词解释 1．非蛋白氮 2.血浆功能酶 3.细胞酶 4.细胞酶 三、问答题
1．何谓 NPN?临床上测定NPN 有何意义 2．红细胞代谢的主要特点是什么
第十五章 血液的生物化学 参考答案
一、选择题：1C 2B 3A 4BCD 5E 6A 7E 8C 9ABC 10B 11E 12D 二、名词解释
1．血液中不包括蛋白质在内的含氮化合物中所含氮的总称为非蛋白氮(NPN)。它们是蛋白质和核酸等代谢的最终产物。
2．在血浆中发挥重要催化作用的酶，此类酶大部分来自肝。
3．由外分泌腺产生的酶称外分泌酶。它们可有少量进入血液，在血浆中这些酶极少发挥催化作用。 4．细胞海是指体内各种组织细胞内催化各有关代谢的酶，随着细胞的更新或破坏，经常有少量细胞内的酶进入血液。这类酶的活性升高，常反映有关脏器细胞的破坏或细胞膜通透性的改变。对血清中这些酶活性测定有助于对有关脏器病变的诊断，但此类酶在血浆中没有催化作用。 三、问答题
1．非蛋白氮(NPN)是指血液中除蛋白质外的含氮化合物中所含的氮。正常含量为14．3—25．omm01／L。主要包括尿素、尿酸、肌酸、肌酐、氨基酸、
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