A. 根据目测评估
目测评估一般用于非仪器方法，但也可用于仪器方法。
通过分析含已知被测物浓度的样品，来确定被测物在可接受的准确度和精密度下能被定量测试的最低水平。 B. 基于信噪比
此方法仅适用于能产生噪音基线的分析规程。
信噪比的确定，是将测得的含已知低浓度被测物的样品的信号与其空白样品的信号比较，并建立能可靠地检测到被测物的最低水平。典型的信噪比为10：1。 信噪比可通过人工或采用色谱软件的方法，通过比较样品产生的信号和基线噪声来确定。
C. 根据响应值的标准偏差和斜率
定量限可表示成： QL = 10σ/S
说明：σ =响应的标准偏差
S =校验曲线的斜率
斜率S可从被测物的校正曲线中估计。标准偏差可通过多种途径获得包括： ? 根据空白样品的标准偏差：通过分析适宜数量的空白样品进行分析背景响应值的测量，计算这些响应值的标准偏差。
? 根据校正曲线：测试含QL范围的被测物样品，研究其校正曲线。回归方程的剩余标准偏差或Y轴截距的标准偏差可用来作为响应值的标准偏差。 D. 推荐数据
定量限和用于确定定量限的方法必须得到描述。
此限度应通过分析一定数量的近定量限的已知浓度的样品来验证。
7.2.1.7线性和范围
A. 线性
线性关系的评估应涵盖分析规程的范围，采用建议的测试规程直接用活性物质（稀释标准储备液）和/或产品组分的合成混合物的称量。
应观测相当于被测物的浓度或含量的信号图来评估线性。如果呈现线性关系，使用适当的统计方法来评估测试结果，例如：通过最小平方法计算线性回归。 应报告相关系数、Y截距、回归线斜率和残差平方和，并包含数据图。另外，分析实际数据点与回归线的偏差同样有助于评估线性。 步骤
? 为建立线性分析，推荐使用至少5个浓度。其它模式应作评价。 ? 每个浓度水平峰面积对浓度作图。
? 当响应值与浓度的关系呈线性时可使用线性回归分析，计算相关系数、Y截距、斜率和残差平方和，并用数据图表示。
? 如果响应值和浓度关系不是直接线性，在进行线性回归分析之前可先进行数学转换。
接受标准：参见附件2。
SOP-Z-QA-002/F02/00
B. 范围
特定的范围通常得自线性研究，并基于规程的应用。分析规程的范围是通过测试含有分析规程特定范围内或极端处被测物量的样品时，分析规程能提供可接受的线性、准确度和精密度来确认。 步骤
应考虑以下最小的特定范围：
? 活性物质或成品的含量测定：一般为测试浓度的80％ ～ 120％；
? 含量均匀度：覆盖至少是测试浓度的70％至130％，除非基于制剂的性质（如：有定量装置的吸入剂）使用更宽的适用范围。
? 溶出度测试：指定范围的±20%。例如：一个控释产品的规格为1小时后的20％到24小时后的90％，验证的范围为标示量的0 ~ 110%。
? 杂质测定：从杂质报告水平至规格的120％。对于那些已知有显著作用或能产生有毒或非预期的药理作用的杂质，检测/定量限应与杂质的控制水平相当。 ? 如果含量和纯度测定在一个测试进行，且只有100％标准品被使用，则线性应该覆盖从杂质报告水平至120％含量规格的范围。
线性范围可通过研究在线性、准确度和精密度上的符合接受标准来确定。
7.2.1.8 耐用性
耐用性是衡量分析规程保持不受设计的小的变化影响的能力。这些变化通常是保持其它参数不变的单个变化。耐用性应能体现在分析参数有变化的情况下分析方法的可靠性。
如果测量易受分析条件的影响，则应适当控制分析条件，或在规程中作预先声明。 典型的变化例子有： ? ?
分析溶液的稳定性 萃取时间
在液相色谱的情况下，典型的变化例子有： ? ? ? ? ?
流动相中pH变化的影响 流动相组分变化的影响
不同的色谱柱（不同批号和/或供应商） 温度 流速
在气相色谱的情况下，典型的变化例子有： ? ? ?
不同的色谱柱（不同批号和/或供应商） 温度 流速
A. 溶液稳定性（推荐）
a)
被评估的溶液
标准液、样品液、检测限溶液、定量限溶液、杂质类似物溶液和分离度溶液 b)
研究条件
SOP-Z-QA-002/F02/00
实验室环境条件和冰箱
应考虑额外的被测物储存条件，如光敏性 c)
建议的研究周期
样品溶液：12小时、24小时、48小时、72小时 标准溶液：12小时、24小时、48小时、72小时 d) ? ? ? ? e)
步骤
双份制备考察溶液，然后立刻进行双份的含量测定。 在考察的条件下储存制备液。
在经过每个考察周期后对储备溶液进行含量测定。
每个时间点的结果应以新鲜制备的标准溶液评估。分析结果的平均值将与接受标准比较。
接受标准 – 见附件2
检测限、定量限、杂质类似物以及分离度溶液也需评估稳定性。但这些溶液的接受标准应基于能提供认可的系统适用性的要求来制定。接受标准应在方法验证计划中得到规定。 B. 药品耐用性的样品制备 a)
萃取参数
用制剂为关键区域的可变性评估样品制备步骤。典型的变化例子有：搅拌的时间、速度和温度及萃取体积。 i. 可变性 ? ?
搅拌的时间、速度和温度：建议参数值的上下25％。 萃取体积：规程水平的一半和两倍。
ii. 步骤
双份测定每个指定参数下的考察样品的含量，评估所感兴趣的被测物的回收率，分析结果的平均值用于与接受标准作比较。 注意 ? ?
对于杂质含量评估，采用加入了预定规格水平的代表性杂质的样品。 如果可行，耐用性实验采用同一检测仪器、柱和/或流动相。样品分析前应首先测试系统适用性，样品必须和标准制备一起进行测试。样品必须被标准制备所包围。 过滤
b)
如果使用过滤，则评价回收率和干扰值。
? 回收率 –根据规程，分析过滤后的药品制备液，测定平均值。 ? 干扰 – 过滤稀释剂并根据定量方法测试。
接受标准：回收率不得少于98%。干扰值不得大于1%。
如果被评估参数的范围不能符合接受标准，但能提供评价并且实验被重复，则可减少参数。 c)
溶出度/释放率的样品制备
SOP-Z-QA-002/F02/00
i. 参数
溶出度/释放率步骤中典型的变化，参见附件3 接受标准
6份样品的平均百分溶出度或释放度，应在建议的规格时间点使用程序参数所获得的平均结果的?5%内。
ii. 过滤－如果采用了过滤，则评估回收率和干扰值。 ? ?
回收率 –根据规程，分析过滤后的相对标准偏差。 干扰 – 过滤稀释剂，根据定量方法测定。
接受标准
相对标准偏差不得过2.0%。干扰值不得大于1%。
注意：如果评估的变化范围不能满足接受标准，则在有说明并有记录的情况下可减少范围，并在另一范围重新进行实验。 d) i. ii.
色谱系统-HPLC/GC
色谱分析规程中的典型变化，参见附件3 步骤
采用规程的参数值及所列的范围值，评估每个变化点，同时保持其它参数在程序值。所研究样品包括： ? ? ?
药品样品 要求的标准溶液 分离度溶液
注意：可运行系统适用性精密度，但评估耐用性时不作要求。对于杂质分析，如果样品中没有一个可定量的杂质，必须在样品中加入药品中预期的主要杂质，其值为规格水平，所得结果应和采用拟定参数获得的结果相比较。如果决定不研究某一参数，则需在方法验证计划或验证方案中得到说明。 标准溶液和样品溶液可在已建立的稳定性期限内使用。如果需要新的制备液，此溶液需要在程序条件下经过测试。 iii.
接受标准 ?
每一个被评估的变化范围应有符合要求的系统适用性参数，最终的系统适用性标准在耐用性实验结束时建立/确认。 ? 分离度?1.5 ? 拖尾<2.0 ? 容量因子> 2 ? QL溶液的信噪比>10 ?
样品含量的平均结果的精密度应在采用规程参数获得的结果的RSD%的2倍范围以内。比如，程序参数的RSD%为0.30％，接受范围可以小于0.60％。采用程序参数获得的平均结果的%RSD应在精密度范围内。 加入的杂质或恒定存在的杂质的平均结果应在采用规程参数获得平均值的0.1%内（绝对值）。比如，程序参数值为0.40%，接受范围可以是0.30%~0.50%之间。
残留溶剂的含量平均值应在使用规程参数获得平均值的10%内。
SOP-Z-QA-002/F02/00
?
?
e) 其它程序
评估每个分析规程人为设计的步骤/参数的变化。记录此方案以表明参数/步骤变化时分析程序是可靠的。 接受标准
变化不能超过程序相对于采用程序参数获得的平均结果的精密度。
7.2.2 微生物测试方法
本规程不对微生物检验替代方法的验证做规定。如需采用此类方法时，应由微生物技术人员指出验证策略，并经QC经理和QA经理的批准。
药典通用方法必须通过方法适用性确认实验，确认在此检测条件下，所采用的方法适合于供试品的微生物检测。
微生物限度检测方法需进行3次独立的平行试验，每次试验应尽可能使用不同批号的样品。 方法验证试验应在阳性室进行。 7.2.2.1
菌液的制备
验证用菌种传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第0 代），菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若于2～8℃保存，不得超过24小时。黑曲霉孢子悬液可保存在2～8℃，在规定的或验证过的贮存期内使用。 取不大于100cfu的试验菌进行测定。
7.2.2.2 供试液制备
A. 确认乳化、混合、加热、稀释、等程序不对供试品中的微生物造成很大影响。 B. 对于含抑菌性的供试品应对其抑菌活性进行处理，验证时，可依据供试品的物理
或化学特性来消除抑菌活性。 C. 处理方法：
a） 培养基稀释法：只要供试品特性允许，应尽量采用培养基稀释法；
b） 中和法：用适宜的中和剂或灭活剂消除其抑菌成分。所采用的中和剂和灭活剂，
应通过稀释剂对照组考察其对微生物的损伤，且能有效中和抑制微生物的物质。 c） 薄膜过滤法。
方法验证时，应考虑滤膜的毒性及滤器内壁的吸附而影响微生物的回收。 如改变滤膜的型号或供应商时，应进行方法再验证 d） 联合使用以上方法。
7.2.2.3 需氧菌总数、霉菌和酵母菌总数计数 A. 菌种
验证试验用的菌种应选用有代表性的革兰阴性菌、革兰阳性菌、芽孢杆菌、酵母菌和霉菌：
? 铜绿假单胞菌 ? 金黄色葡萄球菌 ? 枯草芽孢杆菌 ? 白色念珠菌 ? 黑曲霉。
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