第二章习题
一、 单选题
1. 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（ B ）
A ． I 类限制酶 B. II 类限制酶 C. III 类限制酶 D. 核酸内切酶 E. RNAase
2. 下列关于同裂酶的叙述错误的是 ( B )
A. 是从不同菌种分离到的不同的酶 , 也称异源同工酶。 B. 它们的识别序列完全相同。
C. 它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D. 有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E. 两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。 3. 多数限制酶消化 DNA 的最佳温度是（ A ）
A. 37 ℃ B.30 ℃ C.25 ℃ D.16 ℃ E.33 ℃ 4. 下列关于限制酶的叙述错误的是 ( B )
A. I 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 和 S- 腺苷蛋氨酸。 B. II 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP 。
C. III 类限制酶反应需要 Mg2+ 、 ATP ， S- 腺苷蛋氨酸能促进反应，但不是绝对需要。
D. I 、 III 类限制酶对 DNA 有切割和甲基化活性， II 类限制酶对 DNA 只有切割活性而无甲基化活性。 E. II 类限制酶要求严格的识别序列和切割点，具有高度精确性。
5. 如果一个限制酶识别长度为 6bp , 则其在 DNA 上识别 6bp 的切割概率为 ( D ) A. 1/44 B. 1/66 C. 1/64 D.1/46 E. 1/106 6. 多数 II 类限制酶反应最适 PH 是 ( C )
A. PH:2-4 B. PH:4-6 C. PH:6-8 D. PH:8-10 E. PH:4-10 7. 下列关于限制酶反应的说法错误的是 ( D )
A. 限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B. 许多限制酶对线性 DNA 和超螺旋 DNA 底物的切割活性是有明显差异的。 C. 有些限制酶对同一 DNA 底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D. 限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E. BSA 对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的 BSA 。 8. II 类限制酶反应中必须的阳离子是（ C ）
A. Na + B. Ca2+ C. Mg2+ D. Zn2+ E. Mn2+ 9. RFLP 形成的原因是 （ A ）
A. 由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。 B. 使用不同的限制性内切酶进行切割。 C. 杂交时使用不同的探针。 D. 每种染色体存在两条。 E. 提取不同的染色体 DNA 酶切。
10. 下列关于限制酶命名的表示方法，正确的是（ E ）
A. Sau.3A I B. B.amH I C. pst I D. Ecor I E. Hind III 11. 需进行 DNA 部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（ D ） A. 反应时间 B. 反应体积 C. PH D. 限制酶量 E. 反应温度 12. 下列酶在反应中不需要 ATP 的是 ( D )
A. E coK B. T4DNA 连接酶 C. BamH I D. EcoB E. DNA pol I 13. 限制性内切酶可特异性识别 ( B )
A. 双链 DNA 的特定碱基对 B. 双链 DNA 的特定碱基序列 C. 单链 RNA 的特定碱基序列 D. 单链 DNA 的特定碱基序列 E 双链 RNA 的特定碱基对
14. 下列与 RFLP 相关的一条是 ( D )
A. 不同限制酶在单个染色体 DNA 上的限制性图谱。 B. 两种物种个体间的限制性图谱。 C. 同一个体等位基因的限制性图谱。 D. 同一物种不同个体的限制性图谱。
E. 非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。 15 ． 限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（ A ）
A. 识别和切割序列发生变化。 B. 切割活性大大提高。 C. 识别和切割序列与原来完全不同。 D.
可以任意切割 DNA 。 E. 只能部分切割 DNA 。 二、多选题
1. 下列因素中影响限制酶切割的有 ( A,B,C,D,E)
A. EDTA 浓度 B. 甘油浓度 C. DNA 纯度 D. 酶的自身活性 E. 盐浓度
2. 限制酶反应中出现星活性的可能原因是（ A B D E ）
A ．酶浓度太高 B 低盐 C 盐浓度过高 D 高 PH E 甘油浓度 >5% （ V/V ） 3 ． 限制酶切割后的 DNA 电泳得到的电泳条带有些扩散，可能原因是（ B ， C ， D ， E ） A ．酶失活 B 有蛋白质与 DNA 结合 C 酶切条件不合适 D 有外切核酸酶污染 E 星号活性
4 ． 下列有关回文序列的描述正确的是（ A ， B ， C ）
A ． 是 II 类限制酶的识别序列 B 是某些蛋白的识别序列 C 是基因的旁侧序列 D 是高度重复序列 E 是卫星序列 5 ． 下列有关回文序列的一般特征正确的是（ B ， C ， D ， E ） A ． 可增强基因表达 B 有对称轴 C 是自我互补的序列
D ． 两条链从 5 ‘ 3 ‘方向的序列一致 E 是 II 类限制酶的识别序列 6 ． 关于 II 类限制酶说法正确的是（ B ， D ） A ． 具内切核酸酶和甲基化酶活性 B ． 仅有内切核酸酶活性 C ． 只识别非甲基化的 DNA 序列 D ． II 类限制酶反应条件只需要 Mg2+ E ． II 类限制酶反应需要 Mg2+,ATP
7 ．通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（ B ， C ） A ． 限制酶只切割两个变异等位基因中的一个 B ． 限制酶位点可作为遗传标记
C ． 它不依赖变异的等位基因的产物的功能 D ． 不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异 E ． 同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同
8. 下列关于 II 类限制酶的叙述正确的是（ B ， C ， D ， E ） A ． 它既有内切酶的活性，也有外切酶活性 B ． 在特异位点对 DNA 进行切割
C ． 同一限制酶切割双链 DNA 时产生相同的末端序列 D ． 有些限制酶切割双链 DNA 产生粘末端 E ． 有些限制酶切割双链 DNA 产生平末端
9 ． 限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（ A ， B ， C ， D ， E ）
A ． 限制酶无活性 B 存在抑制剂如 SDS ， EDTA C DNA 不纯 D ． 缓冲液组成不合适 E DNA 甲基化 10 ．下列关于限制酶的叙述正确的是（ B ， C ， D ）
A ． 在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。 B ． 限制酶在 DNA 中的识别 / 切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C ． 如果限制酶的识别位点位于 DNA 分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
D ． 已知某限制酶在一环状 DNA 上有 3 个切点，因此该酶切割这一环状 DNA ，可得到 3 个片段。 E ． 能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。 11 ．酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（ A ， B ， C ， E ） A ． 储存温度不合适 B 稀释后储存 C 储存缓冲液不合适 D ． 分装后储存 E 储存缓冲液中蛋白浓度低
12 ．限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（ A ， B ， C ， D ， E ） A ． 限制酶失活 B 有抑制剂如 SDS ， EDTA 等存在 C 反应条件不合适 D DNA 不纯 E DNA 结构（线形或超螺旋）的影响
13 ．如果用限制酶切割 DNA 后得到的片段比预期的多，可能原因是（ B ， C ， E ） A ． 限制酶失活 B 限制酶的星号活性 C 有其他限制酶污染 D 有抑制剂存在 E 测试 DNA 中有其他 DNA 污染
14 ．限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（ A ， B ， C ， E ） A ．限制酶去除不完全 B 平端连接 C 核酸外切酶污染 D ．连接反应温度低于 16 ℃
E ．从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类 15 ．下列限制酶属同裂酶的是（ A ， B ， D ， E ） A ． BamHI G ↓ GATCC Sau3AI ↓ GATC CCTAG ↑ G CTAG ↑
B ． Sal I G ↓ TCGAC Xho I C ↓ TCGAG CAGCT ↓ G GAGCT ↓ C C ． BamH I G ↓ GATCC EcoR I G ↓ AATTC CCTAG ↓ G CTTAA ↓ G D. Hpa II G ↓ CGC Msp I C ↓ CGG
CGC ↓ G GGC ↓ C E. Xba I T ↓ CTAGA Nhe I G ↓ CTAGC AGATC ↓ T CGATC ↓ G
三．填空题
1 ．限制酶是一类专门切割 DNA 的酶，它能特异性识别切割 双 链（单、双） DNA 。 2 ． II 型限制酶识别位点一般长度为 4~6 个核苷酸对。
3 ．个体之间 DNA 限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性（ RFLP ）。
4 ．限制酶命名采用 Smith 和 A thens 提议的方案，第一个字母大写取自来源细菌的 属名 ；第二、三个字母取自来源细菌的 种名；第四个字母（如果有）取自来源菌的 株系。
5 ．需要部分酶切时可采取的方法有（ 1 ）减少酶的用量 （ 2 ）缩短反应时间 （ 3 ）增大反应体积。 6 ．限制酶识别序列为 n 个碱基，则其切割频率的理论值应是 4n 。 7 ．限制性内切酶通常保存在 50% 浓度的甘油溶液中。
8 ．甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在 5% 以下。
9 ．限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源 DNA 的 限制 和对自身 DNA 的 修饰 来实现的。 10 ． II 型限制酶既具有 识别位点 的专一性，也具有 切割位点 的专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。
四．简答题
1 ．在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（ BSA ）的目的与机理是什么？
答：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。 2 ．如果用 EcoR I 酶切 DNA 时出现星活性，试分析原因？
答：主要原因有：酶浓度太高；高 PH ；低盐；含 Mn2+ 、 Cu2+ 等非 Mg2+ 金属离子；甘油浓度高于 5% ；存在某些有机溶剂。
3 ．下列序列中哪些可能是 II 类限制酶的识别序列？ ATATCG CCCGGG GATATC AGCCGA GAGTC 答： CCCGGG GATATC GAGTC
4 ．用 Klenow 酶可将 5 ‘粘末端填补成平末端，而导致某些限制位点消失，下列酶切后用 klenow 处理再连接不会丢失识别位点的是哪些？
XmaI C ↓ CCGGG BssH II G ↓ CGCGC PstI CTGCA ↓ G HhaI GCG ↓ C HpaII G ↓ CGC 答： BssH II, HpaII