7. 变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于 DNA 分离，原因主要是：（ A ） A. 氧化物可使 DNA 的磷酸二酯键断裂 B. 氧化物同 DNA 形成复合物 C. 氧化物会改变 pH 值 D. 氧化物在 DNA 分离后不易除去
8. 在分离 DNA 时，异戊醇的作用是：（ D ）
A ．使蛋白质脱水 B ．使 DNA 脱水 C ．帮助 DNA 进入水相； D ．减少气泡，促进分相 填空题
1. 酚是蛋白变性剂用酚抽提细胞 DNA 时，具有两方面的作用：（ 1 ） （ 2 ）
2. 用酚 - 氯仿抽提 DNA 时，通常要在氯仿或酚 - 氯仿中加少许异戊醇，这是因为：异戊醇
。另外，异戊醇有助于分相，使离心后的上层含 DNA 的水相，中间的变性蛋白及下层有机溶剂相维持稳定。
3. 同其他水解蛋白酶相比，蛋白水解酶 K 具有两个显著的优点：（ 1 ） （ 2 ） 。
4. 在分离 DNA 时要使用金属离子螯合剂，如 EDTA 和柠檬酸钠等，其目的是
5. 用乙醇沉淀 DNA 时，通常要在 DNA 溶液中加入单价的阳离子，如 NaCl 、 NaAc ，其目的是 。
6. 浓缩 DNA 的方法有（ 1 ） （ 2 ） （ 3 ） （ 4 ） 。
7. 通常可在三种温度下保存 DNA ： 4~5 ℃， -20 ℃， -70 ℃，其中以 最好。
8. 用于分离质粒 DNA 的细菌培养浓度达到 0.8 ? 109 细胞 /ml 时，即通过离心收集菌体。收集菌体使用定角转子，离心的速度以 为宜。
9. 在用 SDS 分离 DNA 时，要注意 SDS 的浓度， 0.1% 和 1% 的 SDS 的作用效果是不同的，前者 ，后者 。
10. 在 DNA 分离过程中，通常要进行透析，其目的是 。
11. 在 DNA 分离过程中造成 DNA 分子断裂的因素很多，主要有（ 1 ） （ 2 ） （ 3 ） 。
12. 在 DNA 分离过程时，常用（ 1 ） （ 2 ） （ 3 ） （ 4 ） 等方法去除蛋白质。 13. 在 DNA 保存液中，常加一滴氯仿，主要是起 的作用。
14. 在分离 DNA 时，要戴手套操作，原因是 。 15. 乙醇沉淀 DNA 的原理是 。 填空题答案：
1. （ 1 ）使蛋白质变性；（ 2 ）由于它能使蛋白质变性，故也能使核小体和核糖体解聚，释放出 DNA 和 RNA ，提高 DNA 的得率。
2. 是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生。
3. （ 1 ）水解能力很强，作用范围广；（ 2 ）在 SDS 和 EDTA 中保持高活性，可以同 SDS 和 EDTA 同时使用。 4. 螯合 Mg2+ ，抑制核酸酶的活性。
5. 中和 DNA 分子的负电荷，增加 DNA 分子间的凝聚力。
6. （ 1 ）包埋吸水法 （ 2 ）蒸发 （ 3 ）膜过滤法 （ 4 ）有机溶剂抽提法 7. -70 ℃ 8.8000rpm
9. 只将 RNA 分离出来；可将 DNA 与 RNA 一起分离出来。 10. 除去小分子的无机离子。
11. （ 1 ）核酸酶降解；（ 2 ）化学降解；（ 3 ）物理减切 12. （ 1 ）酸变性；（ 2 ）碱变性；（ 3 ）热变性；（ 4 ）酶水解 13. 抑制真菌污染 14. 手上常有核酸酶 15. 乙醇使 DNA 分子脱水 简答题
1. 溶菌酶是破碎细菌细胞的有效方法，但有些细菌的孢子对溶菌酶不敏感，应该如何处理？ 答：添加 DTT 、 ? - 巯基乙醇，或 8.0mol/L 的尿素等增加敏感性。
2. SDS 是分离 DNA 时常用的一种阴离子除垢剂，它在这里的主要作用是什麽？
答：（ 1 ）溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂；（ 2 ）溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来；（ 3 ）对 RNase 、 DNase 有一定的抑制作用；（ 4 ） SDS 能够与蛋白质结合形成 R-O-SO3-?R- 蛋白复合物，使蛋白质变性沉淀。
3. 比较基因的大小和基因组复杂性的不同：
一个基因组有两个序列，一个是 A ，另一个是 B ，各有 2000bp 长，其中一个是由 400bp 的序列重复 5 次而成，另一个则由 50bp 的序列重复 40 次而成，问：
（ 1 ） 这个基因组的大小怎样？ （ 2 ） 这个基因组的复杂性如何？
答：基因组的大小是指在基因组中 DNA 的总量。复杂性是指基因组中所有单一序列的总长度。这个基因组的大小为 4000bp ；复杂性为 450bp 。
4. 从细菌中分离总 DNA ，应采取哪些措施获得高分子量的 DNA ？ 答：添加酶抑制剂抑制核酸酶活性，温和操作，加保护剂等。 用于克隆的 DNA 在质量上有什麽要求？
答：（ 1 ）首先是稳定性：保持 DNA 的高分子量和原有的构型。 （ 2 ）低蛋白质含量
（ 3 ） DNA 样品中应不含 RNA （ 4 ）不含可透析的小分子
5. 为什么从细胞中分离 DNA 时往往会断裂？
答：（ 1 ）细胞内存在很高的核酸酶活性， DNA 裸露后，很容易遭到核酸酶的降解； （ 2 ）在分离 DNA 的过程中，要用到一些酸碱等化学试剂，也会使 DNA 断裂；
（ 3 ）在 DNA 的分离过程中要经过多次离心、吸取、转移等，产生的机械张力剪切会使 DNA 断裂。
实验习题
一、 填空
1 ．质粒提取中细菌的裂解可采用多种方法，包括： 非离子型或离子型去圬剂 ， 有机溶剂 ， 碱 或 加热 处理。 2 ．用于分离质粒 DNA 的细菌培养浓度达到 0.8 × 10 9 细胞 /ml 时，即可通过离心收集菌体。收集菌体使用定角转子，离心的速度以 8000r/min 为宜。
3 ．在分离质粒 DNA 的菌体培养过程中，加入氯霉素有两个好处： 可以扩增质粒 DNA ； 抑制了菌体的数量，有利于裂解 。
4 ．常使用的质粒纯化方法都利用了质粒 DNA 相对较小 和 共价闭合环状 两个性质。
5 ．由于不同构型的 DNA 插入 EB 的量不同，它们在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率也不同，超螺旋的共价闭合环状结构的质粒 DNA （ SC ）的泳动速度 最快 ，一条链断裂的开环状质粒 DNA （ OC ）泳动速度 最慢 ，二条链断裂的线性 DNA （ L ）居中，通过凝胶电泳和 EB 染色的方法可将不同构型的 DNA 分别开来。
6 ．超离心法纯化质粒 DNA 时，选用 CsCl 作介质的优点是： CsCl 与不同 DNA 起反应 ； CsCl 可以自动形成密度梯度 ，从而使不同分子量的 DNA 分子得以分开。
7 ． SDS 是分离 DNA 时常用的一种阴离子除垢剂，它有四个作用： 溶解膜蛋白及脂肪，从而使细胞膜破裂 ； 溶解核膜和核小体，使其解聚，将核酸释放出来 ； 对 RNase 、 Dnase 有一定的抑制作用 ； SDS 能够与蛋白质结合形成 R 1 -O-SO 3 - ? R 2 + - 蛋白质复合物，使蛋白质变性沉淀 。 8 ．碱裂解法所用溶液Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的体积比为： 2:4:3
9 ．质粒提取中溶液Ⅱ的主要成分为 SDS 和 NaOH 。
10 ． 溶液Ⅲ中钾是 3 mol/L ，乙酸根是 5 mol/L 11 ． LiCl 可沉淀 大量蛋白质 和 高分子 RNA 。 12 ． 1OD 260 = 50 μ g 质粒 DNA/ml 。
13 ． 在碱变形法提取质粒 DNA 实验中，聚乙二醇用于 沉淀 质粒 DNA 。 14 ． 残留在 DNA 样品中的酚可 抑制 酶的活性。
15 ． 质粒 DNA 提取中酚的 pH 值范围是 pH7.8 ～ pH8.0 。
16 ． 乙醇沉淀核酸的沉淀混合液中常用的单价阳离子的类型有： 乙酸铵 、 氯化钠 和 乙酸钠 。 17 ． SSCP 电泳方式为 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳 。
18 ． SSCP 是依据 点突变引起单链 DNA 分子立体构象的改变 来实现电泳分离的。 19 ． 影响 SSCP 重复性的主要因素为 电泳的电压 和 温度 。 20 ． SSCP 中使 DNA 双链起变性作用的试剂是： 甲酰胺
21 ． 点突变对 SSCP 检出率的影响不仅仅取决于该点在 DNA 链上的位置，更取决于 该位置对维持立体构象作用的大小 。 二、 选择
1 ．质粒提取中溶液Ⅱ的主要成分为： B A. SDS 和 EDTA B. SDS 和 NaOH C. EDTA 和 NaOH D. SDS 和冰乙酸
2 ．分离质粒 DNA 时，用蔗糖的目的是： B A. 抑制核酸酶的活性 B. 保护 DNA ，防止断裂 C. 加速蛋白质变性 D. 有利于细胞破碎
3 ．关于碱解法分离质粒 DNA ，下面哪一种说法不正确？： D A. 溶液Ⅰ的作用是悬浮菌体 B. 溶液Ⅱ的作用是使 DNA 变性 C. 溶液Ⅲ的作用是使 DNA 复性
D. 质粒 DNA 分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性
4 ．质粒 DNA 提取中酚的 pH 值范围： D A. pH6.5 ～ pH7.0 B. pH8.0 ～ pH8.5 C. pH6.8 ～ pH7.0 D. Ph7.8 ～ pH8.0
5 ． CsCl-EB 密度梯度离心法纯化质粒 DNA 的原理是： C A. 氯化铯可以较多地插入到线状 DNA 中去 B. 氯化铯可以较多地插入到 SC DNA 中去 C. EB 可以较多地插入到线状 DNA 中去 D. EB 可以较多地插入到 SC DNA 中去
6 ．同一种质粒 DNA ，以三种不同的形式存在，电泳时，它们的迁移速率是：A. OC DNA>SC DNA>L DNA B. SC DNA>L DNA>OC DNA C. L DNA>OC DNA.SC DNA D. SC DNA>OC DNA>L DNA
7 ．用碱法分离质粒 DNA 时，染色体 DNA 之所以可以被除去，是因为： C A. 染色体 DNA 断成了碎片
B. 染色体 DNA 分子量大，而不能释放 C. 染色体变性后来不及复性 D. 染色体未同蛋白质分开而沉淀 8 ． 1OD 260 相当于每毫升质粒 DNA ： A A. 50 μ g B. 100 μ g C. 50ng D. 100ng
9 ．加入溶液Ⅲ后出现的白色絮状沉淀不包括： A A. 质粒 DNA 和小分子量 RNA B. 染色体 DNA 和高分子量 RNA C. 钾离子和 SDS D. 蛋白质和细胞膜
B