二．多选题
1 ． C aCl2 诱导 E.coli 感受态细胞时，下列哪些因素会影响转化效率（ A 、 B 、 C 、 D 、 E ） A ． Ca2+ 浓度 B. DNA 纯度与构象 C. DMSO D. 温度 E. PH 2 ．人工诱导感受态细胞，下列方法哪些正确（ A 、 B 、 C 、 D ）
A ． CaCl2 处理 B. 核酸酶抑制法 C. 饥饿法 D. PEG 处理 E. DMSO
3 ．下列有关利用粘尾质粒将外源 DNA 导入 E.coli 中的说法正确的是（ B 、 C 、 D 、 E ） A ．空 cosmid 质粒可直接体外包装导入 E.coli ，也可用 CaCl2 法导入 E.coli 。 B ． Cosmid/DNA 与头部蛋白、尾部蛋白混合，体外包装后可进入 E.coli 。 C ． Cosmid 虽然只有 4~6kb , 但可容纳约 40~50kb 的外源 DNA 。 D ． Cos 序列是 DNA 包装到λ噬菌体颗粒中所需的 DNA 序列。 E ． Cosmid/DNA 重组体包装后以双链线性分子形式导入 E.coli 。 4 ．下列有关λ DNA 重组体导入 E.coli 说法正确的是（ A 、 B 、 C ） A ．λ DNA 重组体必须有效包装后才能有感染 E.coli 的活性。 B ．λ DNA 重组体包装要有头部蛋白、尾部蛋白的参与。 C ．λ DNA 重组体包装长度为野生型λ DNA 的 75~105% 。 D ．λ DNA 重组体是以双链环状形式导入 E.coli 。
E ．λ DNA 重组体用 CaCl2 法导入 E.coli 也能取得高转化率。
5 ．下列关于 CaCl2 处理获得感受态方法的说法正确的是（ A 、 B 、 C 、 D ） A ． DNA 与 Ca2+ 结合后吸附在细胞表面，该复合物可抵抗细胞表面的 DNAase 作用。 B ． DNA — Ca2+ 在 0 ℃时吸附于细胞表面，温度高或温度波动会大大降低转化效率。 C ．有可能将两种质粒转入同一细胞但最终选择板上的菌落只含一种质粒。 D ． 42 ℃热休克是为了让 DNA 进入感受态细胞。
E ．热休克后要 37 ℃温育 1 小时，目的是使含有外源 DNA 的细胞分裂 1~2 代，更易筛到重组子。三．填空题
1 ．感受态细胞是指 具有摄取外源 DNA 分子能力 的细胞。
2 ．λ噬菌体蛋白对重组 DNA 体外包装时，包装长度为野生型λ DNA 的 75~105% 。 3 ．感受态大肠杆菌细胞在温度为 0 ℃ 时吸附 DNA ， 42 ℃ 时摄入 DNA 。
4 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时， DNA 以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。
5 ．基因工程受体菌的基因型常为 r-m-rec-, r- 表示 限制缺陷型， m- 表示 修饰缺陷型 ，缺陷型。
rec- 表示重组 6 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时，热休克的温度是 42 ℃。 7 ． E.coli 感受态出现的生理时期是 对数期。 四．简答题
1 ．简述在 CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时，影响转化效率的各种因素。
答：影响因素有： Ca2+ 浓度、 PH 值、感受态细胞活力、 DNA 浓度、 DNA 纯度和构象、温度、 DMSO 处理、还原剂处理、氯化六氨合高钴处理。
2 ． CaCl2 法制备感受态细胞转化 DNA 时，低温的主要目的是什么？热休克温度和目的是什么？
答：低温目的：（ 1 ）抑制细胞的旺盛生理代谢；（ 2 ）有助于 DNA — Ca2+ 吸附于细胞表面；（ 3 ）防止 DNAase 降解 DNA 。
热休克温度是 42 ℃；目的是使细胞摄入吸附于其表面的 DNA 。 3 ．简述利用 Cosmid 将外源 DNA 导入 E.coli 的特点是什么？
答：（ 1 ） Cosmid 大小为 4~6 kb ，可用常规 CaCl2 法直接导入 E.coli 扩增。
（ 2 ） Cosmid 含 cos 位点，是 DNA 包装到λ噬菌体蛋白颗粒中所需的 DNA 序列， cosmid/DNA 重组体需与λ噬菌体头、尾部蛋白混合体外包装后，才能导入 E.coli 。
（ 3 ）其包装长度为野生型λ噬菌体 DNA 的 75~105% ，可容纳较大片段（ 30~50kb ） DNA ，可用于建立真核细胞文库。
（ 4 ）只有重组体可包装，未重组 cosmid 不能包装，因而不能进入 E.coli 有利于克隆的筛选。
第三章习题
选择题
1. 关于 PCR 扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中（ B ）项不是主要原因。
A. 底物（模板）过剩 B.dNTP 的大量消耗 C. 产物的聚集 D. 非特异性产物的竞争性抑制
2.Clark 作了一个有趣的实验，发现 TaqDNA 聚合酶可以不需要模板，在双链 DNA 的末端加一个碱基，主要是加（ B ）
A. dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP
3. 有简并引物的 3’ 端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（ A ）
A. TaqDNA 聚合酶具有一定的不精确性 B. 便于排除错误碱基的掺入 C. 易于退火 D. 易于重组连接
4.PCR 实验的特异性主要取决于（ C ）
A.DNA 聚合酶的种类 B. 反应体系中模板 DNA 的量 C. 引物序列的结构和长度 D. 四种 dNTP 的浓度 E. 循环周期的次数
5. 有关 PCR 的描述下列哪项不正确：（ D ） A. 是一种酶促反应 B. 引物决定了扩增的特异性 C. 扩增的产量按 Y=m(1+X)n D. 扩增的对象是氨基酸序列 E. 扩增的对象是 DNA 序列
6. 有关 PCR 的描述下列哪项正确： (ABC) A.polymerase chain reaction 的字首缩写 B.1993 年获诺贝尔化学奖 C. 已广泛的应用于医学各学科 D. 能够准确对扩增模板定量 E. 以上都对
7.PCR 反应产物的特异性取决于 (E)
A 镁离子浓度 B 退火温度 C 引物碱基组成和长度 D 循环次数 E.A+B+C 填空
1.Clark 发现用 TaqDNA 聚合酶得到的 PCR 反应产物不是平末端，而是有一个突出碱基末端的双链 DNA 分子。根据这一发现设计了克隆 PCR 产物的 。
2. 在简并引物的设计中，常常要用到 dI （次黄嘌呤），原因是 。 3. 简并引物 PCR 主要是根据蛋白质的氨基酸序列设计 引物来合成相应的基因。
4.SSC 是由 NaCl 和柠檬酸钠组成的试剂，其中 NaCl 的作用是使 ，而柠檬酸钠的作用是 。 KEY 1.T- 载体
2.dI 可以和任何载体相匹配 3. 一组混合
4.DNA 溶解；作为螯合剂抑制核酸酶的活性
简答题
1. 你打算扩增下图所示的两段序列之间的 DNA ，请从所列出引物中选出合适的一对， 5’-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3’ 3’-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5’ 引物 1 引物 2 5’-GACCTGTGGAAGC 5’-CATACGGGATTG 5’-CTGGACACCTTCG 5’-GTATGCCCTAAC 5’-CGAAGGTGTCCAG 5’-GTTAGGGCATAC 5’-GCTTCCACAGGTC 5’-CAATCCCGTATG
答：引物 1 ： 5’-GACCTGTGGAAGC ； 引物 2 ： 5’-CAATCCCGTATG
2.PCR 反应包括引物与 DNA 模板链间的解链与复性。讨论循环温度范围对引物 -DNA 双螺旋稳定性的影响及对 PCR 产率的影响。
答：由于 GC 对间是三个氢键的作用力，比两个氢键作用力的 AT 对要稳定，因此 DNA 的解链与退火都是依赖于 G+C 的含量与 A+T 的含量的比例。 GC 对普遍比 AT 对更倾向于非特异性的复性，所以 GC 含量高的引物比 AT 含量高的引物更适合于 PCR 反应。
PCR 的基本原理是什麽？用 PCR 扩增某一基因，必须预先得到什麽样的信息？
（ 1 ） 利用 DNA 半保留复制的原理，在体外进行 DNA 的变性、复性和引物延伸。 （ 2 ） 至少要预先知道足够合成一对引物的靶 DNA 序列。
3. 何谓简并引物？简并引物设计的一般原则是什麽？
答：简并引物是指根据肽链的氨基酸序列（或部分序列），并充分考虑密码子的简并性而设计的，用于 PCR 扩增的混合
引物之间具有不同的碱基组成，但碱基数量是相同的。由于充分考虑了密码的简并性，在这种混合引物中必定有一种引物可以和该基因的 DNA 序列精确互补。 简并引物设计的一般原则是：
（ 1 ） 选择保守区设计简并引物；
（ 2 ） 选择简并性低的氨基酸密码区设计引物； （ 3 ） 注意密码的偏爱性；
（ 4 ） 使用尽可能短的引物，以降低简并性，最短可用 15~20 个碱基。
（ 5 ） 由于 TaqDNA 聚合酶在 PCR 扩增时容易掺入错误碱基，所以设计的引物，其 3’ 端尽量使用具有
简并密码的氨基酸。
4. 在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。假如你得到一些恐龙的 DNA ，你如何通过 PCR 和基因克隆来检测恐龙是否是温血爬行动物？
答：用 PCR 扩增恐龙的高度保守的酶的基因，然后将扩增的 DNA 克隆到大肠杆菌表达载体，每可能被合成。然后测定酶的最适温度和热的稳定性并与相应的温血动物（如鸟类）进行比较。来自于冷血动物的酶与来自于温血动物的酶相比，温血动物最适的温度范围较宽。
5.PCR 反应同大肠杆菌体内的 DNA 复制有哪些不同？你认为最根本的差别在哪里？ 答： PCR 用双引物，体内复制用单引物。
染色体 DNA 的提取
选择题
1. 基因组是：（ D ）
A ．一个生物体内所有基因的分子总量 B ．一个二倍体细胞中的染色体数 C ．遗传单位 D ．生物体的一个特定细胞内所有基因的分子总量
2. 下列关于酵母和哺乳动物的陈述哪些是正确的？（ ABD ）
A ．大多数酵母基因没有内含子，而大多数哺乳动物基因有许多内含子 B ．酵母基因组的大部分基因比哺乳动物基因组的大部分基因小 C ．大多数酵母蛋白比哺乳动物相应的蛋白小
D ．尽管酵母基因比哺乳动物基因小，但大多数酵母蛋白与哺乳动物相应的蛋白大致相同
3. 下列哪些基因组特性随生物的复杂程度增加而上升？（ ABD ）
A ．基因组大小 B ．基因数量 C ．基因组中基因的密度 D ．单个基因的平均大小
4. 细胞器 DNA 能够编码下列哪几种基因产物？（ ABCDE ） A ． mRNAB ．大亚基 rRNAC ．小亚基 rRNAD ． tRNAE ． 4.5SrRNA
5. 从细胞或组织中分离 DNA 时，常用蔗糖溶液，目的是：（ B ）
A. 抑制核酸酶的活性 B. 保护 DNA ，防止断裂 C. 加速蛋白质变性 D. 有利于细胞破碎
6. 用 SDS- 酚来抽提 DNA 时， SDS 的浓度是十分重要的，当 SDS 的浓度为 0.1% 时：（ B ）
A. 只能将 DNA 抽提到水相 B. 只能将 RNA 抽提到水相 C. 可将 DNA 、 RNA 一起抽提到水相 D.DNA 和 RNA 都不能进入水相