那么：H0=2.5D=2.5×287=717.5 mm H=3D=3×287=861 mm
d=D/2=0.5×287=143.5 mm W=D/12=287/12=23.9mm B=0.9D=0.9×287=258.3 mm S=2d =2×143.5=287mm h=D/4=287/4=71.75mm
液面高度HL=0.7(H+h)=0.7×(861+71.75)=652.925mm 转速340r/min 电机功率0.55KW
径高比为3，初始水温14℃
6.2物料横算
本系统采用5个发酵罐，每个为50 L，纤维素酶产量为232g/L, 发酵液预处理收率约为90%，提取时收率约为95%，浓缩干燥收率为90%，装料系数为75%。
每批5个发酵罐在一个发酵周期纤维素酶产量为： 232*50*5**90%*95%*90%*0.75=33273.25g=33.3kg 5个发酵罐1年产量为: 33.3*29=965.7
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7下游加工
下游加工是得到纯度较高的物质所比不可少的步骤，一般可分为以下步骤：培养液(发酵液)的预处理；固液分离；初步纯化(提取)；高度纯化(精制)；成品加工。
7.1分子筛层析
葡聚糖凝胶Sephadex G - 100充分膨胀,装柱 (Φ1.6 cm×100 cm ) ,用pH 4.8, 0.02 mol/L乙酸-乙酸钠缓冲液平衡,上样量为15 mL ,流速为15 mL / h,每20 min收集1管
7.2离子交换层析
将弱阴离子葡聚糖凝胶DEAE Sephadex A -50膨胀装柱,用pH 5.8，0.02 mol/L的乙酸-乙酸钠缓冲液充分平衡后上样,用0.05 mol/L NaCl梯度洗脱,收集活力峰。
在分子筛层析过程中出现了5个蛋白峰,其中峰 Ⅱ检测到 β-葡萄糖苷酶活,峰 Ⅳ和峰 Ⅴ检测到了内切酶活,将内切酶活力部分和 β-葡萄糖苷酶分别收集合并浓缩,各自经过离子交换层析后,共得到了5个纤维素酶组分 (见图7-1).黄绿木霉的纤维素酶系纯化得到了EGⅠ、EGⅡ、EGⅢ3个EG组分和BGⅠ、BGⅡ2B 组分.
图7-1 纤维素酶各组分的SDS - PAGE电泳图谱
7.3 酶活力测定
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7.3.1温度对酶活力的影响
图7-2显示各酶组分的最适酶反应温度.EG I、EG 11和EGll这3种EG酶的最适温度是60 0C; B G I和BGII这2种BG酶的最适温度是55 ℃。这5种纤维素酶组分都有较高的温度稳定性，比较这5种组分的温度稳定性，BG I >BGII>EGI >EG1ll>EG11.可能纤维素酶的糖基对于纤维素酶有一定的保护作用.
图2 温度对纤维素酶活的影响
7.3.2 pH对酶活力的影响
pH对各酶组分的影响见图7-3,EGⅠ,EGⅡ,EGⅢ, BGⅠ和BCTⅡ这5种纤维素酶组分的最适pH都是5，当pH为3和7时，纤维素酶的残余酶活力基本上都已经很低.说明这些组分作用的pH范围都比较窄.酶pH稳定性顺序为:EG I> EGⅢ>EGⅡ;BCT I >BCTⅡ.
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图3 pH对纤维索酶活的影响
7.4浓缩
纤维素酶采用超滤浓缩。超滤膜及其组件确定后，根据超滤膜浓缩原理、影响因素以及酶的生物特性，为保证酶活力的前提下最大限度地提高碱性纤维素酶的收率，在工艺流程中从以下方面采取了一定措施。
1. 采用低温超滤以减少酶失活，选用具有冷却装置的循环罐。
2.为避免经过泵的剪切力使酶失活， 使用剪切力泵代替离心泵，如采用工业软泵等；
3.配置稀碱和醋酸罐，以便调节pH
4.酶液循环管口需由上部向下插入循环罐液面，避免产生泡沫。
7.5低温结晶
浓缩液在5℃下静止2-6h；得到纤维素酶的粗晶体。
7.6分离、洗涤
用等体积的乙酸乙酯洗涤，再用食盐加柠檬酸钠洗一次，最后用乙酸乙酯顶洗一次得纤维素酶的湿晶体。
7.7干燥磨粉
在70-80℃下进行气流干燥，再用10-20磨球机磨粉120目过筛即可得到纤维素酶的成品。
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