徐州工程学院毕业设计(论文)
将试管都滴入甲基红试剂后如下图所示：
空白对照 FX-1 FX-2 FX-3
图3-2 甲基红实验
表3-3 甲基红实验结果分析
菌种 FX-1 FX-2 FX-3
阴 / 阳性
+ + -
结论
在培养期仍维持酸性pH 在培养期仍维持酸性pH 转化有机酸为非酸性末
端产物
3.2.3 糖发酵实验
空白对照 FX-1 FX-2 FX-3
图3-3 葡萄糖发酵的实验图片
表3-4 葡萄糖发酵试验结果分析
颜色变化 是否产气 阴/阳性 结论
空白 紫色 否 - 对照组
FX-1 黄色 否 + 能分解葡萄糖
FX-2 黄色 否 + 能分解葡萄糖
FX-3 黄色 否 + 能分解葡萄糖
3.2.4 吲哚试验
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空白对照 FX-1 FX-2 FX-3
图3-4 吲哚实验
表3-5 吲哚实验结果分析
菌种 FX-1 FX-2 FX-3
阴 / 阳性
- - +
结论
不能分解色氨酸为吲哚 不能分解色氨酸为吲哚 能分解色氨酸为吲哚
3.2.5 明胶液化试验
表3-6 明胶液化实验的实验结果 Table 3-6 Gelatin test experimental analysis
是否被液化 阴/阳性 结论
空白 否 - 对照组
FX-1 是 + 明胶被液化
FX-2 是 + 明胶被液化
FX-3 是 + 明胶被液化
3.2.6 尿素酶试验
空白对照 FX-1 FX-2 FX-3
图3-5 尿素酶实验
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表3-7 尿素酶试验结果分析
颜色变化 阴/阳性 结论
空白 黄色 - 对照组
FX-1 粉红色 + 能产生尿素酶
FX-2 粉红色 + 能产生尿素酶
FX-3 粉红色 + 能产生尿素酶
3.3 分子生物学鉴定
4 3 2 1
图3-6 提取出来的质粒电泳图片
注：其中1为已知的重组质粒，2为从FX-1提取的质粒，3为FX-2提取的质粒，4为FX-3提取出来的质粒。
如图可以看出，FX-1，FX-2和T载体连接上形成了重组质粒，而FX-3没有与T载体连接上。将FX-1，FX-2送到南京生物公司检测。
由于一系列原因，只测出FX-1的16S rDNA序列，如下：
GTAATACGACTCACTATAGGGCGAATTGGGCCCGACGTCGCATGCTCCCGGCCGCCATGGCGGCCGCGGGAATTCGATTAAGGAGGTGATCCAGCCGCACCTTCCGATACGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTCGGCGGCTGGCTCCATAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAA
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GACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGGTTGAGCCGGGGGCTTT
图3-7 BLASTn 比对分析
对FX-1的16SrDNA 序列测定结果进行BLASTn 比对分析，结果见表3-8。可看出，分离到细菌与芽孢杆菌同源性超过92%，所以FX-1细菌初步鉴定为鉴定为枯草芽孢杆菌。
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4 结论
由实验，知每克窑湾甜油约含有细菌5.6×106个细菌，FX-1、FX-2、FX-3的数量分别为2.2×106、2.0×106、1.4×106。生理生化实验中，淀粉水解实验、葡萄糖发酵实验、明胶液化实验及尿素酶实验中三种菌的结果均为阳性，可知三种菌均能够利用葡萄糖，产生淀粉酶、明胶酶以及尿素酶。只有FX-3能够分解蛋白胨中的色氨酸。采用分子生物学的方法，进行16SrDNA 序列测序分析，发现FX-1的16SrDNA序列与枯草芽孢杆菌16SrDNA序列相似度为92%。因此可以初步判定FX-1为枯草芽孢杆菌属，还需要进一步对其进行研究。
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