[思考与作业]
（1）季铵型生物碱提取常用的溶剂有哪些？分离方法有哪些？ （2）渗漉法提取黄柏中小檗碱时，采用石灰乳有哪些作用？ （3）柱色谱有哪些注意事项？
（4）生物碱沉淀反应条件如何？如何能够得到正确的结论？
（5）生物碱薄层色谱鉴别中采用硅胶作吸附剂时，如何避免拖尾现象？
实验二 防己中生物碱的提取、分离和鉴定
防己为防己科千金藤植物粉防己Stephania tetrandra S.Moore 的干燥根。味苦，性寒。具有利水消肿、祛风止痛的功效，用于小肿脚气，小便不利，湿疹疮毒，风湿痹痛，高血压等。
防己的有效成分是双苄基异喹啉型生物碱，总碱含量约为1—2%，其中主要是粉防己碱（tetrandrine）、去甲粉防己碱（demethylterandine）及轮环藤酚碱（cyclanoline）。它们的结构和主要理化性质如下：
OCH3H3COH3CNHORNOOCH3HCH3N+HOCH3OHO
OCH3
1.粉防己碱（汉防己甲素），无色针状结晶，mp217—218℃，[α]D25+297°（C=1.00，氯仿），其盐酸盐mp263℃。苦味酸盐mp247℃，[α]D18+286.7°（氯仿）。不溶于水、石油醚、易溶于乙醇、甲醇、丙酮、氯仿和苯中，亦溶于稀酸水溶液中。 2.去甲粉防己碱（汉防己乙素），所用溶剂不同，结晶熔点不同。吡啶—甲醇中结晶，mp121—122℃；丙酮中结晶，六面体粒状结晶，mp134—136℃；甲醇中结晶，细棒状体，mp177—179℃；乙醇中结晶，细棒状，mp241—242℃，[α]D28+295°（C=0.75，氯仿），其苦味酸盐mp186℃，[α]D18+172.4°（氯仿）。溶解度与粉防己碱相似，极性较粉防己碱强，故在苯中的溶解度小于粉防己碱，而在乙醇中的溶解度大于粉防己碱，借此可以互相分离。具隐性酚羟基，不溶于
一般浓度的氢氧化钠溶液中。
3. 轮环藤酚碱，无色正八面体结晶成针状结晶，mp211—212℃，[α]D30-120°（C=0.67，甲醇），其氯化物为无色正八面体针状结晶，mp214—216℃；碘化物为无色丝状结晶，mp185℃；其苦味酸盐为黄色结晶，mp160—162℃，[α]D30-120°（甲醇）。季铵型生物碱，易溶于水、甲醇、乙醇、难溶于苯、乙醚等非极性有机溶剂。 一、目的要求
（1）掌握总生物碱的一般提取方法。
（2）掌握总生物碱中脂溶性生物碱和水溶性生物碱的分离、纯化方法。 （3）掌握脂溶性生物碱的色谱分离条件和方法。 （4）掌握生物碱类的鉴定方法。 二、基本原理
根据生物碱的通性，利用乙醇对脂溶性生物碱及其盐、水溶性生物碱都有很好的溶解度，用乙醇回流提取总生物碱。
利用脂溶性生物碱在酸性条件下成盐后，溶于水而不溶于极性小的有机溶剂，而其在碱性条件下生成游离生物碱，溶于极性小的有机溶剂而不溶于水的性质，用溶剂萃取法反复处理，借此使脂溶性生物碱（粉防己碱、去甲粉防己碱）和水溶性生物碱（轮环藤酚碱）分离；利用粉防己碱与去甲粉防己碱结构上差异，用吸附柱色谱法分离。 三、提取分离
粉防己粗粉150g 置500ml圆底烧瓶中，用乙醇回流2次 （350ml，2h;350ml,1h），滤过（纱布）
滤液 残渣 减压过滤 滤液
减压浓缩 浓缩液
倒入蒸发皿中，置水浴锅上蒸发至无醇味，加1%HCL使溶解 溶液
置分液漏斗中，加氨水，调PH=9左右， 用氯仿萃取5次（75ml、50ml、3χ40ml）
碱水层 氯仿层
减压蒸馏回收氯仿至快干，倒入蒸发皿，加丙酮少许，水浴锅上加热蒸干
残渣
刮取残渣约0.1g，加丙酮溶解， 加氧化铝1g搅匀，蒸干 上柱样品
柱色谱（干法装柱）
吸附剂：氧化铝30g
洗脱剂：环己烷—丙酮（4：1）
至洗脱剂流出后10—15ml为1份收集 洗脱流分 薄层色谱检查： 对照品：粉防己碱乙醇溶液 去甲粉防己碱乙醇溶液
展开剂：氯仿—丙酮（1：1）（氨水蒸气饱合） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 合并与对照品Rf值相同的流分
样品1（粉防己碱） 样品2（去甲粉防己碱） 四、鉴定
1.生物碱沉淀反应 取氯仿层蒸干后的残渣少许，加10%盐酸溶解，分别放置小试管中，每份1ml，分别滴加下列各试剂，观察并记录有无沉淀及颜色变化。 （1）碘化铋钾试剂 （2）碘—碘化钾试剂 （3）硅钨酸试剂
（4）苦味酸试剂（先将酸水液调至中性，再滴加该试剂） 2.薄层色谱鉴别
样品：①粉防己碱 ②去甲粉防己碱 ③总提取物的乙醇溶液 吸附剂：硅胶G—CMC板，湿法铺板，105℃活化30min。 展开剂：①氯仿—丙酮（1：1）（氨水蒸气饱和） 显色剂：改良碘化铋钾试剂 [思考与作业]
（1） 提取总生物碱的常用方法有哪几种？各有何优缺点？
（2） 粉防己碱和去甲粉防己碱在结构上有哪些异同点？实验中如何利用它们
的共性和个性进行提取分离？
（3） 什么叫生物碱的假阳性沉淀反应？如何排除干扰因素？ （4） 怎样防止和排除乳化现象的发生？
实验三 虎杖蒽醌类成分的提取分离及鉴定
虎杖又名阴阳莲、土地榆、苦杖，为蓼科植物虎杖（Polyganum cuspidtumsieb et Zuce）的根茎。有活血化淤、清热解毒、祛痰止咳等功效。近年类用于治疗黄疸、低血脂、高血小板，并可治疗慢性支气管炎及烧伤等。虎杖中含大量的蒽醌类成分和二苯乙烯类成分，其主要已知成分的结构和理化性质如下：
1.大黄素（Emodin）：橙黄色针晶，其mp. 256—257℃，能升华，易溶与乙醇、氨水、碳酸钠和氢氧化钠水溶液中，几乎不溶于水。
2.大黄酚（Chrysophanol）:金黄色六角形片状结晶（丙酮）或针晶（乙醇），mp. 196—197℃能升华，易溶与苯、氯仿、乙醚、醋酸、乙醇，难溶于石油醚，不溶于水、碳酸氢钠和碳酸钠水溶液，可溶于氢氧化钠及热碳酸钠水溶液。 3.大黄素甲醚（Phgsion）：金黄色针晶，mp.207℃，能升华，可溶于氯仿、吡啶、甲苯、微溶于醋酸、乙酸乙酯、乙醚，不溶于水，易溶于氢氧化钠溶液。 4.白藜芦醇（Resveratrol）：无色针晶，mp. 256—257℃， 261—262℃，能升华，易溶于乙醚、氯仿、甲醇、乙醇、丙酮等，白藜芦醇苷有称为虎杖苷，mp. 255℃，323℃，微溶于冷水，易溶于热水、甲醇、乙醇、丙酮等；可溶于乙酸乙酯，难溶于乙醚；苷元可溶于氢氧化钠碳酸钠水溶液。 5. 虎杖中还含有少量大黄素-8-葡萄糖苷、甾醇等。
OHOOHH3COR
大黄素 R=OH
大黄酚 R=H大黄素甲醚 R=OCH3
OHHOCHCH 二苯乙烯衍生物
白藜芦醇R=H 白藜芦醇苷R=C3H1105 一、目的要求
1.了解苷和苷元的提取分离方法
2.掌握PH梯度萃取法在分离中草药有效成分中的应用； 1. 掌握蒽醌类化合物的鉴定方法 二、基本原理
利用苷和苷元都溶于乙醇的性质，用乙醇提取总成分。根据苷和苷元溶解性能不同，以乙醚分出极性小的苷元游离蒽醌，以水分离出极性大的苷类成分，进一步用PH梯度萃取法使酸性强弱不同的蒽醌得以分离。 三、提取分离
虎杖根茎粗粉100g(三个组共用)
置1000ml圆底烧瓶，用乙醇回流提取3次 （500ml,1.5h,2χ300ml,1h） 滤过，合并滤液 滤液
减压浓缩至无醇味
浓缩物（第一次）
加水30ml转入分液漏斗中，乙醚萃取，第1次20ml,以后各10ml，至萃取液无色，合并萃取液
水层 乙醚层 （含蒽苷类） 加5%碳酸氢钠溶液
加活性碳2g煮沸，趁热过滤 10ml萃取水层至无色
滤液 浓缩至30ml，冷却，加乙醚5-10ml，水层 乙醚层（1）
置冰箱放置，滤过 加HCL调PH2 5%碳酸钠10ml
（缓缓滴加，搅拌） 萃取水层至无 放置使沉淀，抽滤 色 滤液 结晶 水洗至中性 30%甲醇或乙醇，热溶 黄色沉淀 OR