黄芩素 精制黄芩苷
四、鉴定
1.熔点的测定 使用熔点测定仪，测定黄芩苷和黄芩素的熔点。 2.显色反应
（1）盐酸镁粉反应：取样品少许，加稀乙醇热溶，加镁粉少许，滴加弄盐酸数滴，必要时水浴加热，观察溶液颜色的变化。
（2）三氯化铁反应：取样品少许，溶于水或乙醇中，加1%三氯化铁醇溶液一滴，观察溶液颜色的变化。
（3）Molish反应：取样品少许置于试管中，加0.5ml乙醇溶解，再加入1%α—萘酚溶液数滴；然后沿管壁加入浓硫酸约0.5ml，观察两溶液界面处颜色的变化。 3.色谱鉴定
样品的制备（黄芩苷的水解）：精密称取黄芩苷约0.5g，置干燥25 ml三角瓶中，加入浓硫酸3ml，用玻棒搅拌均匀，滴加蒸馏水约2ml使黄芩苷溶解，得透明橙红色溶液。水浴加热15min左右，放冷。将此溶液在搅拌下倾入100ml冰水中，析出黄色沉淀，抽滤并用水洗涤至无酸性反应，干燥。
水解所得黄色沉淀，用氯仿反复提取，合并氯仿溶液，浓缩回收乙醇至干。残留物再用甲醇重结晶得黄色针晶，为黄芩素，供苷元的鉴定。
滤去苷元后的水液，分取1/10。加固体碳酸钡使水溶液至中性，滤去碳酸钡沉淀。滤液浓缩至2-3ml，供糖的鉴定。（第三次） （1）糖的纸色谱鉴定
样品：水解所得糖的溶液。
对照品：葡萄糖醛酸（准备葡萄糖对照品） 支持剂：新华1号滤纸
展开剂：正丁醇—醋酸—水（4：1：5，上层） 显色剂：苯胺—邻苯二甲酸试液（准备显色瓶） 于105℃烘10min，显色。葡萄糖醛酸Rf为0.16（文献值） （2）黄芩苷和苷元的纸色谱鉴定
样品：自制黄芩苷和黄芩素的乙醇溶液。
对照品：①黄芩苷对照品的乙醇溶液 ②黄芩素对照品的乙醇溶液 支持剂：新华1号滤纸
展开剂：正丁醇—醋酸—水（4：1：5，上层）
显色：①紫外光下观察荧光。②2%三氯化铁乙醇溶液。③1%三氯化铝溶液，喷后紫外下观察荧光。
（3） 黄芩苷的聚酰胺薄层色谱鉴定
样品：自制黄芩苷的乙醇溶液。 对照品：①黄芩苷对照品的乙醇溶液 吸附剂：聚酰胺薄膜
展开剂：水—乙醇—乙酰丙酮（1：1：1）（冰乙酸） 显色剂：2%三氯化铁乙醇溶液。 （4）黄芩苷元的薄层色谱鉴定
样品：自制黄芩素的乙醇溶液。 对照品：黄芩素对照品的乙醇溶液 吸附剂：4%醋酸钠硅胶G-CMC板
展开剂：①乙酸乙酯—丁酮—甲酸—水（5：3：1：1）。 ②苯—甲酸乙酯—甲酸（75：24：1）
显色剂：1%三氯化铁乙醇溶液。 [思考与作业]
（1） 从黄芩中提取黄酮类化合物的原理是什么？
（2） 水提酸沉法提取黄芩苷应注意哪些操作？大生产中如何解决？
实验六 穿山龙中薯蓣皂苷元的提取、分离和鉴定
薯蓣皂苷元（giosgenin）存在于薯蓣科（Dioscoreaceae）植物中，一般含量为1%—3%，我国薯蓣科植物资源丰富，种类亦多，分布南北各地，其中作为薯蓣皂苷元生产原料的植物，主要有盾叶薯蓣Dioscorea zingiberesis C.H.Wright.,俗称黄姜，穿山薯蓣D.nipponica Makino, 俗称穿山龙、黄山药D.panthaical Prain et Bruk.。具有活血舒筋、祛痰等功效。药理研究认为具有镇咳、祛痰平踹和治疗心血管系统疾病等作用。常用其根茎提取薯蓣皂苷元。
薯蓣皂苷属甾体皂苷，水解可得薯蓣皂苷元，这种甾体皂苷元，是近代制药工业中合成甾体激素和甾体避孕药的重要原料。
本实验以穿山龙为原料。穿山龙中含有多种甾体皂苷，有水溶性皂苷和水不溶性皂苷，结构多数不详，总皂苷水解可得薯蓣皂苷元，其含量可达1.5%-2.6%。 薯蓣皂苷（dioscin）为无定形粉末或针状结晶，mp288℃。可溶于乙醇、甲醇、乙酸，难溶于乙醚等弱极性有机溶剂，不溶于水。
薯蓣皂苷元为白色结晶体粉末，mp204-206℃，[α]D25-129°（C=1.4，氯仿）。可溶于常用有机溶剂及醋酸中，不溶于水。
OOHCH2OHOOHOCH3OOOHOHOOCH3OHOHRO R=
OHOH
薯蓣皂苷
水 解
H+ OOHO+D—葡萄糖+2L—鼠李糖
薯蓣皂苷元
一、目的要求
（1） 掌握甾体皂苷元的提取方法。
（2） 掌握薯蓣皂苷及薯蓣皂苷元的性质和检识方法。 二、基本原理
薯蓣皂苷元在植物体内与糖结合成苷，经水解可得其苷元和单糖。利用薯蓣皂苷元不溶于水，易溶于有机溶剂的性质，可用石油醚连续将其提取出来。 三、提取和分离
穿山龙粗粉50g
置圆底烧瓶中，加水250ml，浓硫酸20ml,
室温浸泡24h，加热回流4-6h，放冷，倾出酸水液 酸性药渣
用清水漂洗3次然后将药渣倒入乳钵中，加碳酸钠粉
末，反复研磨调PH至中性，水洗，抽干
中性药渣
80℃干燥12h 干燥药渣
置乳钵中研成细粉，装入滤纸筒，置索氏提取器中， 用石油醚（60-90℃）提取4-5次 石油醚提取液 回收至剩10-15ml，迅速倾入 小三角瓶中，放置使冷却，抽滤
滤 液 沉 淀
用少量石油醚洗涤3次
薯蓣皂苷元粗晶
无水乙醇或氯仿—甲醇（1：3）重结晶 薯蓣皂苷元精制品
干燥，称重，计算收率
薯蓣皂苷元纯品 三、鉴定
1.泡沫试验 取穿山龙粗粉5g，加水浸泡（1：10）1h或置80℃水浴上温浸30min，滤过。取滤液2ml于试管中，紧塞试管口后猛力振摇，试管内液体则产生大量的持久性的似蜂窝状泡沫。
2.溶血试验 取2%血球悬浮液1ml，生理盐水8ml，再加上述滤液1ml，混合均匀后放置，几分钟内溶液由红色混浊变成红色透明，产生溶血现象。 3.显色反应
（1）Liebermann-Burchard反应：取样品少许于试管中，加冰醋酸0.5ml使溶解，再加醋酐0.5ml，沿试管壁滴加浓硫酸1ml，液体则呈现紫红色，最后变成乌绿色。
（2）Salkowski反应：取样品少许，用氯仿1ml溶解，加入浓硫酸1ml后，在氯仿层出现红或蓝色，硫酸层有绿色荧光出现。 4.紫外光谱鉴定 UV λ
max nm(log):334(3.68)，412(4.1)，512(3.52)。
5. 薄层色谱
样品：自制薯蓣皂苷的乙醇溶液。 对照品：薯蓣皂苷元对照品的乙醇溶液
吸附剂：硅胶G-CMC板，湿法铺板，105℃活化30min 展开剂：苯—乙酸乙酯（8：2）。
显色剂：25%磷钼酸的乙醇溶液（110℃加热5min）。 [思考与作业]
（1） 甾体皂苷及苷元可用哪些方法进行鉴别？
（2） 试设计一种从穿山龙中提取薯蓣皂苷及苷元的工艺流程，并说明提取、分
离原理。
（3） 使用石油醚作提取溶剂时，操作中应注意哪些事项？
实验七 中草药化学成分系统预试法
—试管及纸片法
一、实验目的
1.了解中草药化学成分预试的意义
2.掌握中草药化学成分预试的方法，并对预试结果作出初步判断。 二、预试溶液的制备 1.水浸提法
称取中草药粉末6g，加蒸馏水50ml，在50—60℃水浴上加热1小时（用温度计控制温度，不可超过规定温度，否则将影响蛋白质等的检出），趁热过滤。滤液可供检糖、多糖、有机酸、苷类、酚类、鞣质、氨基酸、多酞、蛋白质、生物碱等用。 2. 乙醇提取法
称取中草药粉末6g，加50ml95%的乙醇，在水浴上回流1小时后过滤。滤液可供黄酮、蒽醌、酚类、鞣质、苷类、有机酸、香豆素、萜类、内酯及甾体等项的检查。
如预试中草药为植物叶，因其含叶绿素较多，并尽可能将叶绿素除去，以减少对预试的干扰，方法是将中药粉末95%乙醇在水浴上回流后，过滤而得到的乙