溶液 水层 乙醚层（2） 放冷，加活性碳脱色，滤过 加HCL调PH2 1%氢氧化钠
（缓缓滴加，搅拌） 溶液10ml 滤液 放置使沉淀，抽滤 萃取水层 浓缩，放置 水洗至中性 至无色 结晶 黄色沉淀 30%甲醇或乙醇重结晶 白色结晶（测定熔点，纸色谱鉴定） 水层 乙醚层（3）
水层 乙醚层（3）
加HCL调PH2 （大黄素、大黄素甲醚）（第二次） （缓缓滴加，搅拌）
放置使沉淀，抽滤 水洗至中性 黄色沉淀（第三次）
四、鉴定
1.蒽醌类化合物的一般鉴别反应
（1）Borntrager’s反应：取1ml乙醇提取液，加几滴10%氢氧化钠溶液，然后加0.5ml
过氧化氢溶液，加热后再加酸使成酸性，最后再碱化，观察反应过程中颜色变化。
（2）醋酸镁反应：取乙醇提取液1ml，家0.5%醋酸镁甲醇溶液0.5ml，观察是否产生橙红色或兰紫色反应。
（3）升华实验：取虎杖粉末少许，置载玻片上，玻片两端各放小火柴一根，然后再取一洁净的载玻片，放在小木棍上，注意切勿接触下面粉末，再移置有三角架的石棉网小心加热（不使药粉炭化），玻片上有升华物凝结时为止。冷却后取下盖片，使升华物面朝上，放在显微镜下观察，可见黄色针晶或羽毛状晶体，此晶体遇碱呈红色. 2薄层色谱鉴别
样品：上述三种乙醚液。
吸附剂：硅胶CMC-Na板，湿法铺板，105活化30cm。
展开剂：①苯—乙酸乙酯—甲醇（48：12：1） ②石油醚：乙酸乙酯（8：2） 显色剂：5%氢氧化钾甲醇液。 [思考与作业]
（1） 大黄中五种羟基蒽醌化合物的酸性和极性大小就如何排列？为什么？ （2） 梯度pH萃取法的原理是什么？适用于哪些中药化学成分的分离？
（3） 试分析薄层色谱图谱中各羟基蒽醌类成分的结构与Rf值的关系？
实验4 补骨脂香豆素的提取、精制与鉴定
补骨脂为豆科植物补骨脂的成熟种子，具有补肾助阳、温中止泻的作用。其有效成分为：呋喃香豆素和黄酮类。
一、补骨脂中呋喃香豆素类主要成分的结构与性质
补骨脂内酯 mp. 159—160℃ 异补骨脂内酯 mp. 138—139℃
补骨脂内酯与异补骨脂内酯均为白色针状结晶，能溶于氯仿、丙酮、苯、甲醇、乙醇、丙二醇等；微溶于水、乙醚；难溶于四氯化碳、冷石油醚中，两者皆具有升华性。 二、提取与精制
（1）补骨脂素的提取与精制
补骨脂种子粗粉（100g）
置于500ml圆底烧瓶中，加入70%乙醇回流提取 三次，每次用200ml乙醇，回流40分钟，过滤 乙醇提取液
减压回收乙醇至无醇味，放置过夜， 倾去上清液 黑色粘稠物 总量为10倍的甲醇回流提取三次， 趁热过滤
不溶物 滤液 静置过夜，抽滤
母液 补骨脂素粗品
适量甲醇溶解，加少许活性氧化铝炭，加热回流5分钟，趁热抽滤，滤液放冷析晶，滤取结晶
OOOOOO
滤液 结晶
80℃以下干燥
补骨脂素
（2）补骨脂素与异补骨脂素的分离
析出补骨脂素粗品的母液
浓缩至干，氧化铝拌样，进行氧化铝干柱色谱
苯—石油醚（4：1）洗脱，荧光检查，合并相同流份
补骨脂素 异补骨脂素 三、鉴定
1.溶解性试验 取样品少许加稀氢氧化钠1—2ml,加热，观察现象；再加稀酸试液几滴，观察现象。
2.观察荧光 取样品少许溶于氯仿中，用毛细管点于滤纸上，于紫外灯下观察荧光与颜色
3.显色反应 取样品少许溶于乙醇中，加异羟肟酸铁试剂，观察颜色。 4.薄层色谱鉴别
样品：①自制的补骨脂素和异补骨脂素的甲醇溶液
②补骨脂素和异补骨脂素的对照品溶液 吸附剂：中性氧化铝，干法铺软板，105活化30cm。 展开剂：①苯—石油醚（8：2）（每50ml加丙酮15滴） 显色：紫外灯下观察荧光 [思考与作业]
（1） 香豆素类化合物有哪些主要理化性质？这些性质在提取、分离和鉴定中有
何应用？
（2） 异羟肟酸铁反应的机制如何？
实验五 黄芩中黄酮类化合物的提取、分离和鉴定
黄芩为唇形科植物Scutellaria baicalensis Georgi. 的干燥根。味苦，性寒。具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎的功效，用于湿温、暑温胸闷呕恶、湿热痞满、泻痢、黄疸、肺热咳嗽、高热烦渴、血热吐衄、痈肿疮毒、胎动不安等。现代药理实验证明具有清热、抗菌、利尿、降压和镇静等作用。它的主要成分之一黄芩苷具有镇静、解热和利尿作用。
黄芩含有多种黄酮类化合物，主要为黄芩苷（baicalin）、黄芩素（baicalein）、汉黄芩苷（wogonoside）、汉黄芩素（wogonin）、木蝴蝶素-A（oroxylin）、黄芩黄酮Ⅰ（skullcapflavoneⅠ）、黄芩黄酮Ⅱ（skullcapflavoneⅡ）、白杨黄酮6C-葡萄糖-8C-阿拉伯糖苷（chrysin6C-glucoside8C-arabinoside）、白杨黄酮6C-阿拉伯糖-8C-葡萄糖苷（chrysin6C- arabinoside8C- glucoside）、β-谷甾醇（β-sitosterol）等。其主要化学成分的结构和理化性质如下。
COOHOOHOHOHHOOHOOOOHO
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黄芩苷 黄芩素
COOHOOHOHOHOOOCH3OOCH3HOOOH
OHO
汉黄芩苷 汉黄芩素
1.黄芩苷 淡黄色针晶，mp223℃，[α]D18-144.9°（吡啶+水）；易溶于N，N-二甲基甲酰胺（DMF）、吡啶，微溶于热冰醋酸，难溶于甲醇、乙醇、丙酮，几乎不溶于水、乙醚、苯、氯仿等溶剂。黄芩苷有羟基，呈酸性，故可溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠等碱液，但在碱液中不稳定，渐呈暗棕色。
2.黄芩素 黄色针晶，mp264-265℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于乙醚、氯仿、较难溶于苯。在碱液中溶解，但不稳定，易氧化，呈绿色。
3.汉黄芩苷 黄色针晶，无明显熔点，230℃变为红棕色，302℃变黑分解。几乎不溶于水和常见有机溶剂，微溶于50%乙醇的甲醇。
4.汉黄芩素 黄色针晶，mp203℃。易溶于甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯，微溶于乙醚、氯仿、苯，难溶于水。 一、目的要求
（1）掌握黄酮类化合物的提取原理和方法 （2）了解苷类鉴定的一般程序及方法 二、实验原理
黄芩苷和苷元在热水中溶解度大，在强酸性条件下易析出，利用此性质从黄芩中提取总黄酮类化合物；并利用其不溶于酸的性质与酸溶性杂质分离，得到较纯的总黄酮；利用黄芩苷与苷元极性不同用溶剂法进行分离。 三、提取分离
黄芩粗粉100g（三个组共用）
投入8倍量的沸水中，煎煮20min, 用脱脂棉过滤
滤液 滤渣 6倍量水同法煎煮2次，每次20min,滤过
滤液 滤 渣
合并，滴加浓HCL酸化至PH1-2，充分搅拌， 加热至80℃，保温30min，滤过（准备水浴锅）
滤液 沉淀
用热水洗涤2-3次，抽滤
沉淀（第一次） 移至150ml锥形瓶中，加85%的乙醇超声洗涤 4-5次，每次50ml，抽滤
乙醇液 沉淀（主含黄芩苷）
回收溶剂 置索氏提取器中，
加甲醇提取至提取液呈色极淡为止
残留物 甲醇提取液
置索氏提取器中， 浓缩，放置析晶，抽滤 加甲醇提取至提取液 呈色极淡为止
氯仿提取液 结晶（黄芩苷）（第二次）
浓缩，放置放置析晶，抽滤 取结晶1g置圆底烧瓶中，加甲醇100ml，
加热回流20min，趁热过滤
黄色粒状结晶 甲醇溶液
用丙酮或甲醇重结晶数次 浓缩，放置析晶，抽滤