醇提取液，加适量的水，使含醇量为70%，转如分液漏斗中，加等体积的石油醚或汽油振摇，分出下层醇液，水浴上减压浓缩至干，95%乙醇溶解后供用。 3 石油醚提取法
称取中草药粉末1g，加入10ml石油醚（沸程60-90℃），室温放置3-4小时后过滤，滤液放在表面上，让石油醚挥发，石油醚提取液可供萜类，甾体，脂肪等项的预示。
为了对照检查，特配制了生物碱、蛋白质、有机酸、酚类、鞣质、糖、皂甙、黄酮、内酯、强心甙、蒽醌、挥发油等标准品，在每一种成分的检查时，均同标准品对照检查。 三、各类成分的检查 1．生物碱
（1）碘化铋钾试剂(Dragendorff试剂)：取水提液1ml加盐酸酸化，滴加此试剂，如有橘红色沉淀生成，即示可能含有生物碱。
（2）碘化汞钾（Mayer试剂）：样品液同上，亦酸化成酸性，滴加此试剂，如有白色或淡黄色沉淀产生，即示可能含有生物碱。
（3）硅钨酸试剂（Bentrand试剂）：取水提液1ml加盐酸酸化，滴加此试剂，如有浅黄色或灰白色沉淀产生，即示可能含有生物碱。 2．氨基酸、多肽、蛋白质
（1）双缩脲试检（Biuret反映）：取水提液1ml加入40%NaOH和1%硫酸酮溶液等量混合液，摇匀，如显紫色和紫红色，表示含有多肽或蛋白质。
（2）茚三酮试剂（Linhgdrin试剂）：取水提液1ml加入0.2%茚三酮溶液2-3滴，摇匀，在沸水浴上加热5分钟，冷却后，如显兰色或紫色，表明含有氨基酸、多肽或蛋白质。
（3）吲哚醌反应：样品点在试纸上，喷酒吲哚醌试剂，用吹风吹干后于100摄氏度烘箱中烘6-10分钟，产生各种颜色均为正反应，示有氨基酸及其衍生物。 3．有机酸
（1）PH试纸检查：用广泛试纸检查水提液和乙醇提取液如呈酸性，表明含有游离的有机酸或酚性物质。
（2）澳酚兰试剂：水提液点样于纸片上，喷酒0.1%澳酚兰试剂，立即在兰色的
背景上显黄色的斑点，如不明显，可再喷洒氨水，然后暴露于盐酸气体中，背景逐渐由兰变为黄色，而有机酸盐的斑点仍为兰色。 4．酚类化合物和鞣质
（1）1%三氯化铁试剂：取样品液1ml，溶液如为酸性，即可直接检验，如为碱性，应加醋酸酸化后，再滴加次溶液1-2滴显兰、暗绿或兰紫色，示含有酚类或鞣质。
（2）三氯化铁——铁氰化钾试剂：点样于纸片上，喷洒次试剂，如立即显兰色斑点，证明可能含有鞣质、酚类以及还原性化合物。
（3）香草醛——盐酸试剂：点样于纸片上稍干湖，喷洒此试剂，立即显不同程度的红色，对具有间苯二酚和间苯三酚的化合物呈阳性反应。
为了进一步确证是一般酚类化合物还是鞣质与生物碱或明胶产生沉淀的性质，使鞣质除去后再进行试验。（生物碱可选用0.1%咖啡碱水溶液） 5.糖、多糖和苷
（1）裴林试剂(Fehling试剂):取水提液1ml,加入新配制的裴林试剂4-5滴,在沸水浴上加热数分钟,如产生红棕色沉淀,证明有还原糖.
为了检查多糖和苷,另取2ml水提液, 在沸水浴上加热10分钟,滤去沉淀,滤液加10%HCL酸化后,再加入过量的盐酸1ml, 于沸水浴上加热半小时,如有混悬物析出,表明可能是苷元,滤去沉淀.加10%氢氧化钠呈碱性,再加入裴林试剂, 加热10分钟,如有红棕色沉淀,表示有多糖或苷.
(2)α-萘酚(Molish反应):取水浸提液或乙醇提取液1ml加入5%α-萘酚乙醇溶液2-3滴,摇匀,沿试管壁缓缓加入1ml浓硫酸,如在试液与浓硫酸的交界面产生紫红色环,证明有糖类、多糖、苷类。
（3）氨性硝酸银试剂（Tollens试剂）：0.1N硝酸银溶液和5N的氨水等量混合，将样品点在纸片上，喷洒此试剂，在100℃加热5-10分钟，如有还原糖，即现褐色斑点。 6.皂苷
（1）泡沫试验：取水浸液1-2ml于试管中，强烈振摇，如产生持续性泡沫，且泡沫的量不少于液体体积的1/3，放置10分钟以上，甚至加热，加乙醇，泡沫也不明显地减少，表明含有皂苷。
（2）溶血试验：取红血球、生理盐水的混悬液，加数滴皂苷溶液，观察悬浊液是否澄明，溶液颜色是否红色，必要时可在电动离心机中离心，观察上层清液颜色，若有溶血现象，证明含有皂苷。
（3）醋酐—浓硫酸反应（Liberman-Berchard反应）：取乙醇提取液置小瓷蒸发皿中，于水浴上挥去乙醇残渣滴加0.5ml醋酐溶解，滴加数滴浓硫酸，如呈紫红色，且溶液上层逐渐变为污绿色，即表明含皂苷、甾体、三萜类，此显兰色反应变色情况甾体皂苷比三萜皂苷快。 7. 甾皂体
（1）醋酐—浓硫酸反应：样品同上，方法亦同上。
（2）氯仿—浓硫酸反应：（Salkonsk反应）：取乙醇提取液置瓷蒸发皿中，于水浴上蒸干，残渣用1ml氯仿溶解转入试管中，加1ml浓硫酸，如氯仿层显红色或青色，浓硫酸层有绿色荧光，示含甾醇。
（3）三氯化锑(Kahlenberg反应)：接上述方法所得残渣，加氯仿溶解，加入三氯化锑的氯仿饱和溶液，如显红色，即表明含甾体。 注：强心苷、三萜类等能产生类似的颜色反应。 8.黄酮类
（1）盐酸—镁粉反应：取乙醇提取液1ml于试管中，加镁粉少许，再滴加浓盐酸数滴（必要时在沸水中加热3分钟），如呈现棕红色，表明含有黄酮体或黄酮。 （2）1%三氯化铝乙醇溶液：将样品点于纸片上，喷洒此试剂，干燥后，置紫外灯下观察有明显的黄绿色荧光，表明含黄酮类化合物。
（4） 荧光试验：取1ml乙醇提取液，于水浴上蒸去乙醇，残渣加0.5ml硼酸的
饱和水溶液和0.5ml10%柠檬酸丙酮溶液，再蒸去溶剂至干，残渣置紫外灯下照射，如显强烈的荧光，表明含有黄酮类化合物。 9.内酯、香豆素及其苷
（1）含有香精的水溶液有兰色荧光，加氨后变为黄色荧光。
（2）重氮化反应：取乙醇提取液1ml,加等量3%碳酸钠液于水浴中煮沸三分钟，冷却后加入新配制的重氮化试剂1~2滴，显红色，表明含有香豆精及其甙。 （3）异羟肟酸铁反应：取乙醇提取液1ml，加入10滴盐酸羟胺的饱和乙醇液，20滴氢氧化钠的饱和乙醇液，加温至反应开始（有泡发生）。冷却后滴加5%盐
酸使之成弱酸性，滴加5滴1tCl3溶液，如有橙红色或紫色反应，表明含有内酯、香豆精及其甙。 10.强心甙
（1）3，5－二硝基苯甲酸试剂（Kedde试剂）：取乙醇提取液0.5ml,加入此试剂2滴，再加入2滴10％NaOH,呈红色或紫色，表明含强心甙。
（2）碱性苦味酸试剂（Baliet）:取乙醇提取液1ml，加入此试剂一滴（放置15分钟），呈橙色或橙红色，表明含强心甙。
（3）克勒尔—克林尼反应（Keller-Kiliani反应）：取乙酵提取液置试管中，中浴上蒸去乙醇，余物用0.5ml含有少量三氯化铁的冰醋酸液溶解，沿管壁加入浓硫酸1ml，处呈红棕色或其它颜色（随甙元性质而异），而上层冰醋酸逐渐在绿色变为兰色，表明可能含有带有氧糖的强心甙。 11.蒽醌类
（1）1%硼酸水溶液：将乙醇提取液点样纸片上，喷洒此试剂，如显黄、橙、红色荧光，表明含有蒽醌及甙类。
（2）0.5%醋酸甲醇溶液：将乙醇提取液点于纸片上，喷洒此试剂，如呈橙红色、紫色、紫红色表明含蒽醌及其甙类。
（3）碱性试验：取乙醇提取液1ml；加入1ml10%NAOH溶液，如产生红色，表明含有蒽醌及其甙类。 12.挥发油及油脂
（1）一般检查：水提液如有香味表明含有挥发油，将石油醚提取液滴于纸片上，如滤纸上的油斑在室温就挥发，可能含有挥发油，如油斑不消失，则可能为油脂。 （2）0.5%荧光素水溶液：将石油醚提取液点滴于纸片上，喷洒此试剂后，将纸片暴露在碘蒸汽（或溴蒸汽）中，含有双键的萜斑点呈黄色，背景很快就变为淡红色。
（3）25%磷钼酸乙醇溶液：将石油醚浸提液点于纸片上，喷洒此试剂后，于115~118℃烘2分钟，对油脂、三萜及甾醇等显兰色，背景为黄绿色或藏青色。 三、预试结果的判断
由于预试验查是用粗提取物：（本预示中挥发油例外）有时反应结果不如纯品明显（如异羟肟酸铁反应），有些反应为几点成分所共有（如三氯化铁反应），
相反也有个别反应具有一定的局限性（如盐酸—镁粉反应），因此预试只能作为成分的初步判断，根据预试验查结果，如某类成分的检查均为正反应，则认为有某类成分，如部分为正反应，或由于成分干扰以致反应结果难以判断者，则认为可能含有某类成分，如均为负反应，则可初步肯定无某类成分。 四、预试报告记录 1. 中草药名称
2. 药用部分特征（色泽、嗅、味等） 3. 化学成分的预试及初步判断（以表列出） 成分类别 试 验 反 应 现 象 反应结果(＋、－、±) 初步判断 备注：表中符号。＋表示正反应；－表示负反应；±表示可疑。 4. 结论 预试人姓名：
5. 预试日期 报告日期 年 月 日
实验八 综合与设计实验
综合与设计实验主要是为了进一步培养学生理论联系实际、分析问题及解决问题的能力。学生根据布置的题目，通过查阅文献、综合文献资料，写出实验原理、实验目的、主要化学成分的理化性质及检识、具体实验操作方法，同时确定实验方案，并能完成实验内容、提交实验报告和产品。通过综合与设计实验，可以考察学生基本理论、基本技能掌握的熟练程度及综合运用知识的能力；评价学生的文献查阅能力，文献综合能力；考核学生的工作态度和实验完成的质量和程度。
甘草中甘草酸和甘草次酸的提取、分离和鉴定
【简要文献背景】
甘草为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch．、胀果甘草G．inflata Bat．或光果甘草G．glabra L．的干燥根及根茎。昧甘，性平。具有补脾益气，清热解