应对工艺流程作仔细检查以查明污染原因。若有必要，应对工艺全部重新设计。 B对病毒检测和鉴别方法的建议 1．逆转录病毒测试 2．体外检测 3．体内检测 4．抗体产生试验
IV．未加工品的病毒测试
未加工品包括集中回收的一批或多批细胞和培养基。细胞不易取到(如使用中空纤维或类似装置回收)时，未加工品是发酵罐中收获的液体。在作深加工前，从生产反应罐中获的一份未加工品的典型样本最有可能污染外源病毒， 若有染， 也最有可能被检测出来。 因此，除在部分初加工时进行敏感的病毒测试外(如未加工品在细胞培养基中可能有毒性，而经部分加工后可能就没有毒性了)，应在未加工品阶段进行病毒测试。
在某些情况下， 可对同时含有完整细胞和破碎细胞以及加工前从反应器中取出的培养上清液的混合物进行测定。在行上市注册申请时，至少应上报三批中试生产规模的未加工品资料。 生产商应制定出对各批产品进行外源病毒现场考核的划。对于未加工品病毒测试的范围、程度和次数应结合以下几点综合考虑后再作决定：用于生产产品的细胞系性质、细胞系界定过程中病毒检测的结果和广度、培养方法、原料来源和病毒消除研究结果等。对未加工品，一般使用一种或几种细胞系进行体外筛查试验。如适用，可使用 PCR 试验或其他适当的方法。
一般来说，已检出有外源病毒的未加工品不能再用于生产产品，并应对工艺流程作认真检查，以确定污染原因，以便采取适当措施。
V．对纯品进行病毒清除研究和病毒检测的基本原理和操作方案
VI．病毒清除程序的评价和鉴定
VII． 小结
本文件就病毒污染危险性的评价方法及产品的病毒清除方法提出建议， 从而有助于从动物或人细胞系生产出安全的生物技术产品。同时强调了以下一些措施的价值： A 要对细胞基质原材料进行全面定性和筛查，以明确存在哪些病毒污染物。 B 通过确定污染物的人向性，对危险程度作出评价； C 制定一项测试未加工品中外源病毒的计划。
D 为获得最佳病毒清除效果，对病毒清除研究应进行仔细设计，在同一生产过程中使用不同的病毒灭活或消除方法。
E 评价病毒灭活和消除的方法研究。
a见正文—III．A．2
b传代限期内的细胞：在体外传代限度之内的生产细胞(见正文—m．A．3) c也可测定其他因子。
d若逆转录病毒感染试验为阳性，则无须作。 e指使用于已受此因子感染的细胞系。
f第一个WCB 时，此测试应在该 WCB 产生的体外代次在生产限度之内细胞上进行；以 后的 WCB，可直接在明 WCB 上进行单项体外和体内测试，或在体外代次在生产限度之内的细胞上测试。
g例如 MAP、RAP、HAP———通常使用于啮齿细胞系。 h“例如，适用于人、非人灵长目或其他细胞的测试方法。
Q5b对用于生产 rDNA 来源蛋白质产品的细胞的表达构建体分析
本文件旨在为用真核和原核细胞生产重组 DNA 蛋白产品的表达构建体的鉴定提供指导，内容仅限于在评价重组 DNA蛋白表达构建体时各种有价值的资料，不涵盖 rDNA 来源医药产品的所有有关质量的内容。
Q5c生物技术／生物制品稳定性试验
稳定性的评价可能需要采用复杂的分析方法。 生物活性测定是稳定性研究的关键内容之一。在制品纯度和分子特性允许的情况下，用适当的理化、生化和免疫化学的方法分析分子实体及定量检测降解产物也是稳定性研究的一部分。
申报者应根据以上所述的这些概念，提供能支持生物技术产品及生物制品稳定性的数据，同时还应考虑到许多外部条例亦会影响产品的效价、纯度和质量。
原料药 半成品 制剂
应提供至少 3 批能代表生产规模情况的制剂的稳定性资料。如可能，用于制剂稳定性试验的各批次应源于不同批号的原料药。
对一个具有不同装量(如 1ml、2m1 或 10m1)、不同单位(如 10 个单位、20 个单位、
或50 个单位)或不同重量(如 1mg、2mg 或 5mg)的制剂进行稳定性试验时，可采用矩阵法或归一法选择样品。
效价
当制剂的用途与明确的、可测定的生物活性相关时，效价测定应是稳定性试验的一部分。
本指导中在阐述稳定性试验的目的时，提到效价是指制剂能达到其预期作用的一种能力，它是根据制剂的某种属性用一个合适的定量方法来测定的。一般来说，当效价用与其相同的参比物质的效价表示时，不同实验室测得的生物技术产品及生物制品的效价的相互比较才是有意义的。为此，分析试验中应包括经与国家或国际参比物质直接或间接标化的参比物质。
某些生物技术产品及生物制品，其效价取决于其活性成分与另一种物质或佐剂的嵌合，这时，应在真实时间/真实温度(包括装运条件)的条件下，测定活性成分与载体或佐剂的解离度。对于这类制品，有时稳定性评价较为困难，因为体外生物活性的检测方法和物理化学试验方法难于提供准确的结果。这时，需采取适当的措施(如在结合前测定、评估活性成分从嵌合体中解离的情况以及体内检测等方法)或使用适宜的替代方法，以克服体外试验的不足。
纯度和分子特性
生物技术产品及生物制品的纯度通常用几种方法综合评估，而且其纯度值取决于所用的检测方法。 在稳定性试验中，纯度试验应侧重于建立检测制品降解产物的方法。
在稳定性试验中涉及到的生物技术产品及生物制品的纯度以及单一的或总的降解产物均应成文上报，降解产物的可接受限度应根据临床前和临床研究所用各批原料药和制剂分析结果的总体概况而定。 物理化学、生物化学和免疫化学有关分析方法的应用可对原料药和制剂作全面鉴定(如分子大小、电荷、疏水性)，而且可以准确测定在贮藏过程中的去氨基、氧化、硫酰化、聚集或裂变所造成的降解变化。测定的方法有电泳(SDS-PAGE、免疫电泳、Western blot、等电聚焦)、高分辨色谱(如反相色谱、凝胶过滤、离子交换、亲和层析)和肽图。 当在长期稳定性试验、加速试验和/或强力破坏试验中检出降解产物有明显的定性或定量变化时，应考虑其潜在的危害性，并需在长期稳定性试验中对降解产物进行定性和定量的分析。并根据用于临床前和临床研究样品的实际水平制定降解产物的可接受限度。 对于不能用适宜方法鉴定的物质或不能用常规分析方法检测其纯度的制品， 申报者应提出替代试验的方法，并证明其合理性。
6．贮藏条件
6．1 温度 6．2 湿度
6．3 加速条件和强力破坏条件 6．4 光
6．5 容器/闭塞物
6．6 冻干制品溶解后的稳定性
Q5d细胞基质的来源和鉴定
本指导原则的目的是对用于生产生物技术产品及生物制品的人和动物细胞系和微生物细胞系以及为用于生产的细胞库的制备和鉴定建立标准提供指导。
为确保制品的质量和安全性，需提供一份支持性文件，记载生产生物技术产品及生物制品的细胞基质的历史，还应记载它们全部或部分来源于母细胞系的历史，以便将细胞基质在研究和开发阶段所发生的事件与生产制品所用的特定细胞基质相联系来全面评估其危险性。
在开发过程中应详细记录细胞基质的操作。 对细胞历史的记载仅是鉴定细胞基质的内容之一，一般来说，对细胞历史资料的缺乏不会影响产品的批准，但会使人们更多的依赖其他方法对细胞基质进行鉴定。
细胞的起源、来源和历史
1. 应说明所用细胞基质的细胞来源(实验室制备或来源于菌种库)，引证科学文献上的相关参考资料。直接从实验室获得的资料是首选的，如果没有这些资料，则应利用文献。
2. 对于人细胞系，应相应描述原供体的下述特征：组织或器官的起源、人种和地理位置、年龄、性别和一般的生理状况。如有材料，应将供体致病因子的检查结果与健康状况或病史一并报告。特别是人二倍体成纤维细胞，由于供体的年龄可能影响细胞系的体外寿命，应尽可能提供。
3. 至于动物细胞系的来源，应提供物种、品系、饲养条件、组织或器官的起源、地理位置、年龄和性别、致病因子的检查结果以及原供体的一般生理状况。
4. 对于微生物细胞，应提供产生细胞系的物种、株和已知的遗传和表型特征。如可能，还应提供其致病性，毒素产物和其他生物危害方面的资料。
应记录细胞的培养历史，包括最初分离细胞的方法、细胞体外培养的方法以及建立细胞系的方法(例如，任何物理、化学或生物学的方法，或附加的核苷序列)。应提供所有对基因操作和筛选的描述、细胞内源性和外源性因子的鉴别、特性和检测结果等资料。
5. 对于来源于后生动物的传代细胞系，通常通过估计其群体的倍增数，或在规定的稀释倍数下的传代次数或所需天数，来决定其培养周期。对于体外有限代次的二倍体细胞系，应在整个研究、开发和生产阶段，准估计其群体倍增数。对于微生物细胞，只需记录细胞基质产生后的传代次数。
关于细胞基质的产生，应详细研讨制备方法中接触于传染因子的步骤。应提供培养基的组分，特别是提供关于细胞接触人或动物源的物质如血清、酶、水解产物或其他活细胞方面的资料。该资料还应包括来源、制备和质控方法、试验结果和质量保证。还应提供这方面的相关文献。些资料将用于详细分析外源因子来源的可能途径，并成为制品的利弊分析的一部分。
细胞库
用连续传代培养的细胞生产生物技术产品及生物制品的最大优点是使每批产品都有一个经检定过的共同起源，即细胞的储备库。生产商可制备自己的细胞库，也可从外部获得。 生产商有责任对每个细胞库进行检验，以确保其质量。
细胞库系统
两级细胞库的概念，即用主细胞库生产工作细胞库(WCB)，通常被认为在连续生产产品时供应细胞基质的最实际方法。生产商应说明从自己的细胞库中连续供应细胞的方案，包括生产用细胞库的预期利用率、制备新细胞库所预期的间隔时间以及细胞库的合格标准。 通常，MCB 直接从最初的克隆或源于最初克隆的初级细胞库中制得。对某些类型的细胞，不必从克隆制备细胞库(如二倍体细胞，它们的体外寿命有限或其他的技术因素使细胞克隆不切合实际；或末被克隆的细胞群体，对某种用途来讲已足够均质)。
WCB 来源于一支或多支 MCB。WCB 是直接提供生产用细胞。当需要时，可从 MCB中生产更多支的 WCB。新制备的 WCB 应通过鉴定和试验证明符合要求。
如每年生产的产品仅需有限的几支细胞时，仅建有 MCB 而没有 WCB 的单级细胞
库，原则上亦是允许的。
在一些微生物表达系统中，对每批新细胞基质进行新的转化，这种新的转化要使用经过彻底检验的宿主细胞库和质粒库，每次转化的细胞基质库都经过检验。这个转化的细胞基质库可被看做为 MCB，它被用作生产用细胞基质的来源。宿主细胞库、质粒库和 MCB 均需用合适的方法予以保存。因为细菌和酵母的转化通常是重复性好、操作容易，不像转染后生动物细胞那样复杂，因此，这种经过改变的表达系统是符合要求的。生产商应提供有关宿主细胞、重组 DNA分子(如质粒)、转化及细胞建库的方法以及鉴定结果等方面的资料。
细胞库鉴定和检测的一般原则
对建库细胞基质的鉴定和检测是生物技术产品及生物制品质量控制的重要组成部分。 通过对 MCB 的鉴定，生产商可对是否存在来自其他细胞系的细胞、外来和内在因子以及其他污染物(如来自于宿主的毒素或抗生素)进行评估。检测的目的是为了证实用于生产的细胞基质的特性、纯度和可用性。在有些情况下，其他方面如致癌性或胞核学的检测也是有用的。
生产商应对每个 MCB 作一次纯度试验和鉴别实验，对将要注册的每一产品在细胞培养期间作一次稳定性试验。此外，还要对每一个WCB 作纯度和有限的鉴别试验。申报者亦应参考 ICH指导原则中有关病毒安全性方面的内容，进行以下所列的有关试验，并在申请制品上市时将试验内容和试验结果一并上报。
对于含有外源构建的表达载体的细胞系，应参照 ICH 指导原则中有关rDNA 表达载体方面的内容，作为核首酸和氨基酸序列鉴定方面的指南。也可用类似的方法对基因序列明确并已鉴定的某些非重组 DNA来源的细胞系的编码序列进行分析。但是，没有必要对那些编码复杂的天然产品的序列进行分析，如相关的基因家庭的产品、微生物疫苗抗原或来自于杂交瘤的单克隆抗体。
如条件具备，应鼓励生产商在细胞基质鉴定和测试中使用先进方法和技术更新，但新方法的特异性、灵敏度和精密度至少应与现有方法相当。
如说明了理由，生产商可选择鉴定WCB，而不鉴定 MCB。
鉴别试验 纯度试验
评估 MCB 和 WCB 的生物学纯度，即无外源性微生物因子和外源性细胞污染是细胞研制和建库的关键部分。在设计和进行这些试验时，应考虑选择性试剂和抗生素对检测外源微生物污染的影响。
细胞基质的稳定性
细胞鉴定的另一个角度是细胞在生产中的适用性。 对细胞基质稳定性主要应从两个方面进行考虑，即生产产品的一致性和贮存在规定条件下细胞能否维持其生产能力。
胞核学和致瘤性试验
根据细胞类型、产品的性质以及生产工艺，决定是否必要用胞核学和致瘤性试验评价二倍体细胞系的安全性或鉴定一个新的细胞系。
Q6a新原料药和新药制剂的测试方法和认可标准：化学物质
2.4 设计和开发中应考虑的问题
在新原料药和制剂开发中积累的经验和数据是制定规范的基础。 在此基础上可建议删除或替代一些试验。举例如下：
· 原料药和固体制剂的微生物试验(开发研究结果表明其不支持微生物的存活或生长) (见判断图#6和# 8)。