B． 限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C． 人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D． 载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 基因工程中目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物；常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，只有经过一定的物质激活以后，才有生物活性；载体上的抗性基因主要是有利于筛选含重 组DNA的细胞，不能促进目的基因的表达．
解答： 解：A、基因工程中受体细胞中常用植物受精卵或体细胞（经组织培养）、动物受精卵（一般不用体细胞）、微生物──大肠杆菌、酵母菌等，A正确；
B、常用的工具酶是限制性核酸内切酶和DNA连接酶；常用的工具是限制性核 酸内切酶、DNA连接酶、运载体，B正确； C、人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性，只有经过一定的物质激活以后，才有生物活性，C正确；
D、抗性基因是标记基因，是为了检测并筛选出载体有导入受体的细胞用的，它不会影响目的基因的表达． D错误． 故选：D．
点评： 本题主要考查了学生对基因工程的操作步骤的了解，这题内容较难． 4．（1.5分）已知某种限制性内切酶在一线性DNA分子上有3个酶切位点，如图中箭头所指，如果该线性DNA分子在3个酶切位点上都被该酶切断，则会产生a、b、c、d四种不同长度的DNA片段．现在多个上述线性DNA分子，若在每个DNA分子上至少有1个酶切位点被该酶切断，则从理论上讲，经该酶切后，这些线性DNA分子最多能产生长度不同的DNA片段种类数是（）
A． 3 B． 4 C． 9 D．12
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 考查了限制性内切酶切割DNA片段的有关知识． “分子手术刀”﹣﹣限制性核酸内切酶（限制酶） ①来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的． ②功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．
③结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端．
这道题目可以转化为单纯的数字计算题．每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种．
解答： 解：A、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是3种，A错误；
B、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是4种，B错误；
C、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，C正确；
D、每个DNA分子上至少有1个酶位点被该酶切断，可以切得的种类有：a、b、c、d、ab、bc、cd、abc、bcd九种，不是12种，D错误． 故选：C．
点评： 主要考查学生对DNA重组技术的基本工具等考点的理解，要求学生能够识记和运用相关知识． 5．（1.5分）下列关于基因工程的叙述中错误的是（） A． 基因工程的出现使人类有可能按照自己的意愿定向改造生物，培育新品种 B． 基因工程技术能冲破远缘杂交不亲和障碍，培育生物新物种 C． 基因工程的基本工具是：限制性核酸内切酶、DNA连接酶和基因的运载体 D． 基因工程的研究成果，目前大多需要通过微生物的旺盛代谢来实现产业化
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 1、基因工程是指按照人们的意愿，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品．
2、基因工程至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体（常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒）．
解答： 解：A、基因工程能按照人们的意愿定向改造生物的性状，创造出更符合人们需要的新品种，A正确；
B、基因工程技术能冲破远缘杂交不亲和障碍，都是培育的生物还是原来的物种，只是出现了新的性状，B错误；
C、基因工程需要的三个基本工具是限制性核酸内切酶、DNA连接酶和基因的运载体，C正确；
D、基因工程的研究成果，目前大多需要通过发酵工程和酶工程来实现产业化，D正确． 故选：B．
点评： 本题考查基因工程和细胞工程的相关知识，要求考生识记基因工程的原理、工具、操作过程、应用及意义；识记细胞工程的意义；识记基因工程、细胞工程、酶工程和发酵工程之间的关系，能运用所学的知识准确判断各选项． 6．（1.5分）基因工程技术也称为DNA重组技术，其实施必须具备的四个必要条件是（） A． 目的基因、限制性核酸内切酶、运载体、体细胞 B． 重组DNA、RNA聚合酶、内切酶、连接酶 C． 模板DNA、信使RNA、质粒、受体细胞 D． 工具酶、目的基因、运载体、受体细胞
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 基因工程需要的工具有：限制酶、DNA连接酶、运载体．基因工程的实质是将一种生物的基因转移到另一种生物的细胞中，因此需要目的基因和受体细胞．
解答： 解：A、目的基因、限制性核酸内切酶、运载体是基因工程必需具备的条件，但体细胞不一定是受体细胞，A错误；
B、重组DNA是由目的基因和质粒重组形成的，RNA聚合酶是转录需要的酶，细胞中具有该种酶，因此不是基因工程必需的条件，B错误；
C、mRNA是基因转录的产物，基因工程中不需要提供该物质，质粒是运载体中的一种，除了质粒还有动植物病毒和噬菌体衍生物，因此质粒不是基因工程中必须的，C错误；
D、限制酶和DNA连接酶属于工具酶，另外运载体、目的基因和受体细胞是基因工程中的必需具备的条件，D正确． 故选：D．
点评： 本题考查了基因工程的相关知识，意在考查考生的识记能力和理解判断能力，属于简单题．考生要能够理解基因工程的过程和实质，识记基因工程的实施必须具备的条件． 7．（1.5分）在基因工程技术中，限制性核酸内切酶主要用于（） A． 目的基因的获取和导入 B． 目的基因的导入和检测 C． 目的基因的获取和重组DNA分子 D． 基因表达载体的构建和导入
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 限制性核酸内切酶（限制酶）主要来源是从原核生物中分离纯化出来的．能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端．
解答： 解：A、目的基因的获取需要限制酶，而导入需要载体，A错误； B、目的基因的导入和检测都不需要限制酶，B错误；
C、目的基因与运载体结合是基因表达载体构建过程，此时需要同一种限制酶切割目的基因和运载体，使它们露出相同的黏性末端或平末端，之后用DNA连接酶连接成基因表达载体（重组DNA分子），C正确；
D、基因表达载体的构建需要限制酶，而导入不需要，D错误． 故选：C．
点评： 限制性核酸内切酶（限制酶）主要来源是从原核生物中分离纯化出来的．能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端． 8．（1.5分）在基因工程操作中，运载体的本质是双链DNA分子，下列功能不能由运载体完成的是（） A． 目的基因的转运 B． 目的基因的扩增 C． 目的基因的表达 D． 目的基因的定位
考点： 基因工程的原理及技术． 分析： “分子运输车”﹣﹣载体：
（1）载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存． ②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入． ③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择．
（2）最常用的载体是质粒，它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子．
（3）其它载体：噬菌体的衍生物、动植物病毒
解答： 解：A、载体是基因工程的运输车，可以将目的基因导入受体细胞，A正确； B、目的基因会随着运载体的复制而复制，B正确；
C、基因的表达机制表明，目的基因的表达与运载体无关，C错误；
D、目的基因是否导入可以通过运载体上的目的基因进行检测，D正确． 故选：C．
点评： 本题考查基因工程中运载体的相关知识，意在考查学生分析问题和解决问题的能力，属于基础题． 9．（1.5分）图为四种限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ和BglⅡ的识别序列．它们切割出来的DNA黏性末端可以互补配对的是（）
A． BamHⅠ和BglⅡ B． BamHⅠ和HindⅢ C． BamHⅠ和EcoRⅠ D．EcoRⅠ和HindⅢ
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 分析题图：根据图中限制酶的识别序列及切割位点可知，限制酶BamH I、EcoR I、
HindⅢ和BglⅡ切割形成的黏性末端依次是、、、．
解答： 解：A、BamHⅠ和BglⅡ切割形成的末端依次是﹣CTAG、﹣CTAG，可见两者互补配对，A正确；
B、BamHⅠ和HindⅢ切割形成的末端依次是﹣CTAG、﹣TCGA，可见两者不互补配对，B错误；
C、BamHⅠ和EcoRⅠ切割形成的末端依次是﹣CTAG、﹣TTAA，可见两者不互补配对，C错误；
D、EcoRⅠ和HindⅢ切割形成的末端依次是﹣TTAA、﹣TCGA，可见两者不互补配对，D错误．
故选：A．
点评： 本题考查基因工程的工具，要求考生识记限制酶的特点，能根据图中各限制酶的识别序列及切割位点，准确判断各组限制酶切割形成的黏性末端是否可以互补配对，属于考纲识记和理解层次的考查． 10．（1.5分）镰刀型细胞贫血症的病因是血红蛋白基因的碱基序列发生了改变．检测这种碱基序列改变必须使用的酶是 （） A． 解旋酶 B． DNA连接酶 C． 限制性内切酶 D．RNA聚合酶
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 首先这道题考点是选修本中的基因诊断，所谓的基因诊断就是用放射性同位素（如32P）、荧光分子等标记的DNA分子做探针，利用DNA分子杂交原理，鉴定被检测标本上的遗传信息，达到检测疾病的目的．而检测样本中是否存在与探针序列互补的同源核酸序列，常用以下方法：
（1）限制性内切酶分析法． 此方法是利用限制性内切酶和特异性DNA探针来检测是否存在基因变异．当待测DNA序列中发生突变时会导致某些限制性内切酶位点的改变，其特异的限制性酶切片段的状态在电泳迁移率上也会随之改变，借此可作出分析诊断．
（2）DNA限制性片断长度多态性分析． 在人类基因组中，平均约200对碱基可发生一对变异（称为中性突变），中性突变导致个体间核苷酸序列的差异，称为DNA多态性．不少DNA多态性发生在限制性内切酶识别位点上，酶解该DNA片段就会产生长度不同的片断，称为限制性片段长度多态性（RFLP）．RFLR按孟德尔方式遗传，在某一特定家族中，如果某一致病基因与特异的多态性片断紧密连锁，就可用这一多态性片段为一种“遗传标志”，来判断家庭成员或胎儿是否为致病基因的携带者．甲型血友病、囊性纤维病变和苯丙酮尿症等均可借助这一方法得到诊断．
（3）等位基因特异寡核苷酸探针杂交法．遗传疾病的遗传基础是基因序列中发生一种或多种突变．根据已知基因突变位点的核苷酸序列，人工合成两种寡核苷酸探针：一是相应于突变基因碱基序列的寡核苷酸；二是相应于正常基因碱基序的寡核苷酸，用它们分别与受检者DNA进行分子杂交．从而检测受检者基因是否发生突变，以及是否有新的突变类型． 根据题意，可用第一种或第二种方法，因此检测过程中必须用到限制性内切酶． 解答： 解：A、解旋酶是在DNA复制时要用的酶，A错误； B、DNA连接酶是用来连接目的基因与质粒的工具酶，B错误；
C、根据题意，可用第一种或第二种方法，因此检测过程中必须用到限制性内切酶，C正确； D、RNA聚合酶是转录过程用的酶，D错误． 故选：C．
点评： 本题主要考查学生对基因诊断与基因治疗等考点的理解． 11．（1.5分）限制性内切酶的作用实际上就是把DNA上某些化学键打断，一种能对GAATTC专一识别的限制酶，打断的化学键是（） A． G与A之间的键 B． G与C之间的键 C． A与T之间的键 D． 磷酸与脱氧核糖之间的键
考点： 基因工程的原理及技术．
分析： 限制酶主要从原核生物中分离纯化出来，它能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
解答： 解：限制酶的作用部位是磷酸和脱氧核糖之间的磷酸二酯键，而一条链中相邻两个碱基之间的化学键为﹣脱氧核糖﹣磷酸﹣脱氧核糖﹣． 故选：D．
点评： 本题难度一般，要求学生识记基因工程的相关知识，考查学生对基因工程概念及操作过程的理解． 12．（1.5分）1982年，世界上第一例体型比普通小鼠大1.8倍的“超级小鼠”培育成功．下列相关叙述不正确的是（） A． 该“超级小鼠”是采用显微注射技术获得成功的 B． 将目的基因导入动物细胞的方法中采用最多，也是最有效的方法是显微注射技术