6. 亲和层析配体浓度的估计方法 ( BD )
A、分析法 B、直接测定法
C、间接测定法 D、水解法
7. 理想的凝胶过滤层析载体 ( ABC )
A. 对样品不产生非特异性吸附作用 B. 有高度亲水性，又要不溶于水
C. 具有化学和物理稳定性 D. 是孔径较小的多孔性材料
8. 影响SDS-PAGE分离效果因素 ( CD )
A. SDS分子大小 B. SDS分子质量
C. 凝胶浓度 D. 电泳缓冲系统
9. 选择性变性沉淀的种类有 ( BCD )
A. 离子强度变性沉淀 B. 温度变性沉淀
C. pH变性沉淀 D. 有机溶剂变性沉淀
10. 影响电泳迁移率的因素 ( ABD )
A. 电场强度 B.溶液的pH值
C. 溶液的等电点 D. 溶液的离子强度
三. 简述题（5小题，每小题7分，共35分）
1. 常用的细胞破碎方法？
(一)高速匀浆法 (二)珠磨法 (三)超声破碎法 (四)酶溶法 (五)化学渗透法 (六)微波加热法
(七)其他方法 1.X-press法2.渗透压法3.反复冻结-融化法4.干燥法
2. 膜的污染及其控制方法。
膜分离过程中随着操作时间的增加，膜透过流速的迅速下降，溶质的截留率也明显下降，这被称为膜 的污染。污染是由膜的劣化和水生物(附生)污垢所引起的。
（一）膜的劣化
由于膜本身的不可逆转的质量变化而引起的膜性能变化，有如下三类：
1．化学性劣化2．物理性劣化3．生物性劣化，
（二）水生物（附生）污垢
由于形成吸着层和堵塞等外因而引起膜性能变化。
防止污染应根据产生的原因不同，使用不同的方法。
（1）预处理法（2）开发抗污染的膜（3）加大供给液的流速
3. 离子交换层析分辨率及影响分辨率因素？
层析分离常采用分辨率（RS）来描述两种物质之间分离效果的好坏。分辨率定义为两个洗脱峰峰顶对映的洗脱体积之差比上两峰在基线上峰宽的和的平均值。
分离两种物质时分辨率取决于这两种组分的洗脱体积和峰宽。
而决定组分洗脱体积和峰宽的因素包括两种组分的分子大小，
凝胶柱的选择性和柱效。
4. 理想凝胶过滤介质应具备的条件。
（1）有较强的机械稳定性，能满足层析过程所需流速，在其标称的操作压力范围内不发生体积变化；
（2）高化学稳定性，凝胶颗粒对分离过程中常用的试剂和样品都保持惰性，在很宽的pH范围内保持稳定，耐去污剂、有机溶剂，耐高温，从而方便清洗和消毒灭菌；
（3）球形，颗粒直径均匀，呈现亲水性；
（4）不带电荷，不对样品产生吸附作用。
5. 亲和吸附剂的制备过程。
1）选择合适的配体；
2）选择合适的载体和连接臂；
3）用合适的方法将配体化学偶联到载体上；
4）封闭偶联载体上的裸露活化基团；
5）估计并储存亲和吸附剂。
四. 论述题（每小题15分，共15分）
请根据下游技术的一般工艺过程及它们的主要技术特点设计一套经济的且技术可行的提取纯化方案。（至少要涉及三种技术）
发酵液 提取 原材料：酵母 处理对象：酵母蔗糖酶
第一步：离心要沉淀。
第二步：破碎细胞。因为酵母蔗糖酶是胞内产物，所以要破碎细胞把酵母蔗糖酶释放出来，采用氨解法。 第三步：用氨解法抽提粗酶还含有大量杂质，需要进一步分离纯化，采用有机溶剂乙醇沉淀。
第四步：乙醇分级后的蔗糖酶仍含有许多杂质，这时用一些层析技术，如离子交换层析。
最后检测蔗糖酶纯度和得率。
Rs Ve2 Ve1(Wb1 Wb2)/2
2010-2011学年第一学期《生物工程下游技术》试题（A卷）答案
二、选择题（将正确的答案写在横线上，可选的答案个数不固定，每题全对3分，共30分）
1. 下游技术的生物原料可以是( ABCD )
A. 生物界自然产生的 B. 酶反应获得的
C. 动植物细胞组织培养的 D. 微生物菌体发酵的
2. 细胞浓度的直接测量方法有 ( ABCD )
A. 细胞干重法 B. 显微计数法 C. 平板计数法 D. 浊度法
3. 依离子价或水化半径不同，离子交换树脂对不同离子亲和能力不同。树脂对下列离子亲和力排列顺序正确的有 ( BC )
A. Na+ >Ca2+> Fe3+ B. Fe3+>Ca2+>Na+
C. Li+ < Na+ < K+ D. Li+ > Na+ > K+
4. 要使目的物从离子交换剂上解吸而被洗脱，采用方法有 ( ABCD )
A. 改变洗脱剂的pH B. 增加洗脱剂的离子强度
C. 往洗脱剂中添加特定离子 D. 往洗脱剂中添加一种置换剂
5. 下列表述正确的有 ( CD )
A. 总交换容量是指每克干介质包含的带电功能基团，它是个变质
B. 低密度的离子交换剂具有优势
C. 无论是哪一类离子交换剂，其膨胀度都随着交联度的增加而下降
D. 离子交换层析分辨率与系统的选择性，效率和容量因子有关
6. 动物细胞培养类型有 ( ABC )
A. 悬浮培养 B. 贴壁培养 C. 固定化培养 D. 包埋培养
7. 下列表述错误的有( AD )
A. SEC（疏水层析）B. IEC（离子交换层析）C. AFC（亲和层析） D. HIC（凝胶过滤层析）
8. 分配系数Kd >1的情况有( BCD )
A. 亲和作用 B. 疏水作用 C. 吸附作用 D. 离子间的静电作用
9. 下面表述正确的有 ( ABCD )
A. 总柱床体积是凝胶经溶胀、装柱、沉降，体积稳定后所占据层析柱内的总体积
B. 外水体积是柱中凝胶颗粒间隙的液相体积的总和
C. 内水体积是存在于溶胀后的凝胶颗粒网孔中的液相体积的总和
D. 凝胶体积是凝胶颗粒固相所占据的体积
10. 影响电泳迁移率的因素有 ( BCD )
A. 溶液的粘度 B.溶液的pH值 C. 溶液的离子强度 D. 电场强度
三. 简述题（5小题，每小题7分，共35分）
1. 目标产品分离对象特点及根据这些特点应该如何做？
1）目标产物浓度普遍较底，悬浮液中大部分是水;
2）组分复杂，含有细胞，细胞碎片，蛋白质，核 酸，脂类，无机盐等多种物质；