四. 实验设计题（每小题5分，共10分）
1．大蒜SOD酶分离纯化路线？
大蒜破壁-----离心------盐析-------透析-------凝胶过滤 每种方法1分
2．蛋白质样品含量少溶液和含高盐蛋白质样品溶液，设计纯化色谱方案？
蛋白质样品含量少溶液 IEF/AFC----HIC/无-----SEC 3分
含高盐蛋白质样品溶液 SEC--- IEF/AFC---- SEC 3分
五．论述题（每小题10分，共20分）
1．论述蛋白质分子量的测定方法有哪些？如何测定？
①SDS-PAGE
SDS是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β-巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂。在样品和凝胶中加入SDS和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与SDS结合后，形成带负电的蛋白质-SDS胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS聚合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响。因此，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量，而与所带电荷和形状无关。 在一定分子量范围内， logMW=logK-bm=K-bm迁移率与logMr之间也存在线性关系。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质电泳，分别测出迁移率，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以迁移率对logMr作图，即得到该电泳的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行电泳，测出其迁移率，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。 5分 ②凝胶过滤法
凝胶过滤法测定分子量的基础是公式Kav= a－b logMr，对于特定的凝胶柱，由于外水体积和柱体积是恒定不变的，根据公式可知， Kav =（Ve－V0）/（Vt－V0）在一定分子量范围内，洗脱体积Ve与logMr之间也存在线性关系。利用上述线性关系，人们通过将几种已知分子量的物质加样至层析柱，分别测出洗脱体积Ve，同时计算出这些分子相应的logMr值，并以Ve对logMr作图，即得到该层析柱的分子量标准曲线。然后在相同的条件下对需要测定分子量的物质进行层析，测出其Ve值，根据标准曲线即可求出该物质的分子量。 5分
2．论述在设计下游分离过程中，必须考虑哪些问题方能确保我们所设计的工艺过程最为经济、可靠？ 生物工程下游技术一般处理步骤： 品制作 2分
首先要了解提取对象和杂质的理化性质,生物学性质；明确目的物要达什么样的纯度和收率来设计工艺过 程。 2分 ①控制好下游技术提取步骤
生化分离技术的步骤越多，提取收得率也越低． 1分 ②对于原料来说
来源丰富,含量相对较高,杂质尽可能少. 1分 明确整个阶段的任务
初始阶段: 主要任务在于从相对较大体积的抽提液中除去大量杂质,同时能浓缩样品和保障样品处于稳定的环境中.常用的方法有哪些了啊。 1分
中间阶段: 主要任务是进一步除去大量杂质,但这些杂质与目的物的性质差异相对较小,所以选择分离方法要有较高的分辨率. 常用的方法有哪些了啊。 1分 精制阶段: 主要任务是除去微量杂质,使最后的产品获得高纯度. 常用的方法有哪些了啊。 1分 总之产品的收得率和质量控制应是贯穿生物工程下游技术工艺过程的主线. 1分
河南城建学院2011—2012学年第二学期期末考试
《生物工业下游技术》试题（B卷）参考答案及评分标准
一、判断并改错（每小题2分，共20分）
1. 作为动物细胞培养的优良微载体应该是刚性的。（ × ）
改：作为动物细胞培养的优良微载体应该是非刚性的。
2. 微波加热法破碎细胞特别适合于对热不稳定的的产物的提取。（× ）
改：微波加热法破碎细胞特别适合于对热稳定的的产物的提取。
3. 利用液相色谱方法对包含体蛋白质进行复性比稀释复性法优越.（√ ）
4. 所有的蛋白质电泳都是利用不同蛋白质带的电荷的差异而达到分离不同蛋白质目的的。（× ）
改：蛋白质电泳可以利用不同蛋白质带的电荷的差异、分子量大小差异而达到分离不同蛋白质目的的。
5. 目前动物细胞微囊化方法最常用的是聚赖氨酸/海藻酸法。（ √ ）
6. 离子交换用的层析柱一般粗而短，不宜过长。（√ ）
7. Superdax是珠状琼脂糖经两次交联，而Superose是葡聚糖与交联琼脂糖的结合。（× ）
改：Superdax是葡聚糖与交联琼脂糖的结合，而Superose是珠状琼脂糖经两次交联。
8. 羟基磷灰石是一种强离子或强阴离子交换层析材料。（× ）
改：羟基磷灰石是一种弱离子或弱阴离子交换层析材料。
9. 径向色谱可以线性地增加样品处理量,样品可以在完全相同的色谱条件下直接放大。（√ ）
10. 双向电泳是目前唯一一种可以仅通过一次操作解析上千钟蛋白质的技术，第一向为IEF和第二向为SDS—PAGE，检测得到的是条带。（× ）
改：双向电泳是目前唯一一种可以仅通过一次操作解析上千种蛋白质的技术，第一向为IEF和第二向为SDS--PAGE。检测得到的是点。
二、多选择题（将正确的答案写在横线上，可选的答案个数不固定，每题全对2分，共20分）
1. ABCDE 2． ABCD 3. ABCD 4. ABCD 5.ABCD 6. ABC 7. BC 8. ABCDE
9. ABC 10. ABCD
三. 简答题（5小题，每小题6分，共30分）
1. 化学渗透法破碎细胞的原理及其优缺点。
答：作用机理：某些有机溶剂，抗生素，表面活性剂，金属螯合剂，变性剂等化学药品都可以改变细胞壁或膜的通透性，从而使内容物有选择地渗透出来，这种处理方法叫渗透法。2分