优点（相对机械破碎）：
对产物释出有一定的选择性；1分
细胞保持完整，碎片少，利于进一步提取；1分
核酸释放量少，黏度低，便于进一步分离。0.5分
缺陷：
时间长，效率低； 0.5分
化学试剂有毒； 0.5分
通用性差 0.5分
2. 目标产品分离对象特点及根据这些特点应该如何做？
答：1）目标产物浓度普遍较底，悬浮液中大部分是水; 1分
2）组分复杂，含有细胞，细胞碎片，蛋白质，核 酸，脂类，无机盐等多种物质； 1分
3）由于pH ,离子强度，温度等变化因素，分离过程易造成失活和污染现象； 1分
4）性质不稳定，随时间变化。 1分
1.迅速加工,缩短停留时间, 0.5分
2.控制好操作温度和pH, 0.5分
3.减少或避免与空气接触受污染的机会, 0.5分
4.总体设计好各组分的分离顺序. 0.5分
3. 什么叫吸附等温线?研究吸附等温线有什么意义?
答：吸附等温线：指在一定温度下物质分子在两相界面上进行的吸附过程达到平衡时它们在两相中浓度之间的关系。2分
研究吸附等温线可以提供得到以下方面的信息：
预测代表该吸附等温线的组分在非线性色谱中色谱峰的形状；1分
为非线性色谱分离与纯化物质选择最佳条件；1分
反映被分离物质分子与固定相表面的作用，从而研究分子的构型及吸附状态。1分
建立分子结构-吸附之间的定量关系，从而由分子结构预测吸附性能。1分
4. 简述凝胶色谱的分离原理是什么？有哪些用途？
答：排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或有机溶剂为流动相。3分
用途：分离纯化，脱盐，分子量的测定。（各1分，共3分）
5. 非线性色谱的概念及其特点?
答：非线性色谱: 流动相中的样品浓度(Cm)与固定相中的样品浓度(Cs)不呈线性关系的色谱.分析色谱大多属于线性色谱;制备色谱大多属于非线性色谱. 3分
非线性色谱的特点:
样品的保留值可变:非线性色谱的保留值随样品及其浓度的不同而变化; 1分
峰形的不对称性:不是高斯正态分布的; 1分
色谱峰的峰高与浓度不是线性关系:峰高增加的速率随浓度的增加而下降. 1分
四. 实验设计题（每小题5分，共10分）
1．从牛血清中提取牛血清蛋白并分离纯化。
离心------盐析-------透析-------凝胶过滤层析 （电泳）各1.5分
2．已知某蛋白的分子量约为17 kDa，等电点3.9~4.1，它能耐一定的高温，在90 C加热3~4 min后仍然能够保持80%的活性。该蛋白含有较多的疏水性残基，与Ca2+结合后可以暴露它的疏水基团。该蛋白的作用是作为生物体内酶的激活剂。请设计一个从脑组织中提取和分离纯化该蛋白的实验方案，要求写出具体的步骤和理由，以及检测方法。
脑组织匀浆破碎（添加蛋白酶抑制剂 ）——离心（使之澄清）——凝胶过滤层析、亲和层析、疏水作用层析 ——等电聚焦电泳。初始阶段、中间阶段各2分，、精制阶段1分。
五．论述题（每小题10分，共20分）
1．试述包含体复性的基本过程,复性过程错误发生的主要原因是什么?举例分析主要的复性方法的优缺点,为什么LC复性是最好的?
答：包含体复性的基本过程：
①
②
分
③ 溶解：包涵体的溶解必须用很强的变性剂，通过离子间的相互作用破坏包涵体蛋白间的氢键而增溶蛋白。去污剂可以破坏蛋白内的疏水键，可以增溶几乎所有的蛋白，但由于无法彻底去除而不允许用在制药行业中；酸可以破坏蛋白的次级键从而增溶蛋白，这种方法只适合少数蛋白质。对于含有半胱氨酸的蛋分离包含体：第一步是对培养收集的细胞进行破碎，比较有效的方法是高压匀浆结合溶菌酶处理，然洗涤：包涵体沉淀需用去污剂（Triton X-100或脱氧胆酸钠）和低浓度变性剂（2mol/L尿素或盐酸胍后5000~20000g离心，可使大部分包涵体沉淀，与可溶性蛋白分离 。1分 等）洗涤除去脂类和膜蛋白，这一步很重要，否则会导致包涵体溶解和复性的过程中重组蛋白质的降解。1
白，在增溶时应加入还原剂打开蛋白质中所有二硫键，对于没有二硫键的目标蛋白有时也应使用还原剂，因为含二硫键的杂蛋白会影响包涵体的溶解，同时还应加入金属螯合剂用来螯合Cu2+、Fe3+等金属离子以防止其与还原状态的巯基发生氧化反应。 1分
复性过程错误发生的主要原因是：在去除变性剂的同时，重组蛋白质在体外折叠，分子间存在大量错误折叠和聚合，复性效率往往很低，包涵体蛋白折叠复性的效率实际上取决于正确折叠过程与聚集过程之间的竞争。1分
复性方法的优点：透析、稀释和超滤复性法，这三种方法是最传统也是应用最普遍的蛋白质折叠复性方法，使变性剂浓度降低到蛋白质能恢复折叠的浓度。1分
复性方法的缺点：复性活性回收率低，而且难于与杂蛋白分离。稀释法大大增加溶液体积，不利于后续的分离纯化；透析法耗时长，易形成无活性蛋白质聚集体；超滤法在膜上聚集变性，易造成膜污染；稀释法处理量太大，不利于工业放大。1分
LC复性是最好的原因：与传统的稀释法和透析法相比，液相色谱复性的优点是：
①
②
③
④
2.何谓生物工程下游技术？举例论述在设计下游分离过程中，必须考虑哪些问题方能确保我们所设计的工艺过程最为经济、可靠。
答：生物工程下游技术：它是描述回收生物产品分离过程原理和方法的一个术语.是指对于由生物界自然产生的或由微生物菌体发酵的、动植物细胞组织培养的、酶反应等各种生物工业产生过程获得的生物原料，经提取分离、加工并精制目的成分，最终使其成为产品这个过程中所采用的方法和手段的总称．2分 生物工程下游技术一般处理步骤： 细胞分离 成 品制作 2分