3．
® System时）
4． 将上述PCR反应液加入Real Time PCR用反应管中，然后再加入2.5～1 μl*的RT反应液（或
RT反应的稀释液），保证最终反应体积为25 μl。
* RT反应液的加入量不要超过Real Time PCR反应体积的1/10（V/V）量。 ◆反应例
通过RT-PCR对Human GAPDH mRNA进行检出。
使用Total RNA 1 pg～100 ng相当量的cDNA及
Negative Control的dH2O做为模板。
●引物设计说明
进行Real Time PCR反应时，设计反应性能良好的PCR引物非常重要。根据以下原则，可以设计PCR扩增效率高，反应特异性强的良好引物。
◆ PCR扩增产物长度： 80～150 bp最为合适（可以延长至300 bp）。 ◆ 设计引物要求如下：
*1 OLIGO: Primer Analysis Software。
*2 Primer3: （http://www-genome.wi.mit.edu/ftp/distribution/software/） *3 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/
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