本科毕业论文(设计)开题报告
学 院 姓 名 指导老师 合作老师 题 目 题目性质 仁济学院 陈梦娇 章荣华 孟真、蔡德雷 专 业 学 号 职 称 职 称 生物技术 0719130022 副主任医师 主管技师 浙江省部分地区儿童铅污染状况的毒理学调查 实验研究 技术开发 工程设计 应用型 调查型 其他 一、选题依据和目标 目的、意义: 从毒理学角度对浙江省部分地区儿童ALAD基因多态性、血铅暴露水平和效应生物标志物尿δ-ALA进行分析，对这些地区儿童的铅暴露与基因易感性以及毒性效应的相关性进行初步的探讨。根据研究结果，对相应的地区做好相关预防措施和教育宣传。 研究现状及发展趋势： 随着全球工业化和城市化进程的加快，现代工业和交通的迅猛发展，环境铅污染逐渐成为突出的问题，已是影响儿童生长发育的重要因素。国内铅中毒的研究始于60年代，当时研究的重点是从职业卫生和职业病的角度出发，对该病的病因病 理、临床诊断和治疗进行探讨。于60年代初始，国内儿童铅中毒报道的病例均系症状性铅中毒，主要是由于女工的职业性铅暴露所致的子代机体铅负荷升高，即母源性先天性铅中毒。而亚临床水平的儿童铅中毒的研究则在80年代后才开始，当时的研究表明，不足以产生临床症状的低水平铅暴露即能引起儿童智力发育的损害，这比国外的类似研究大约落后10年。此后各地不断有小规模的研究报道，证明根据国际上沿用的诊断标准，我国儿童铅中毒的现状远较我们想象的严重，即使在我们认为完全正常的人群中，也有相当惊人数目的儿童处于对发育有潜在危害的铅暴露下。铅污染越来越受世界各国的关注，越来越多的国家也针对环境污染状况，逐步制定了相关的政策和措施，积极开展健康教育，进一步完善儿童铅中毒的初级预防措施，让儿童远离铅中毒。 20
二、课题关键问题及难点 1.采样点的选取 查阅文献资料，选取引起铅中毒具有代表性的地区作为调查对象。 2.样品保存 血液是很容易凝固及DNA易变性，对于抽取的儿童外周血要及时于-40℃保存，对于提取的DNA要及时保存在-80℃冰箱保存。 3.实验条件 DNA提取是采用试剂盒进行的，提取过程注意最后离心转数的变动。在进行正式实验前，必须进行预实验，摸清扩增ALAD酶指标测定实验中的最佳条件。 4.结果分析 采用合适的统计学方法对数据进行分析。客观对待实验结果，在合理的范围内分析、推测结果产生的原因。 三、完成该课题研究已具备的条件 本次研究内容为2010年浙江省卫生厅科研立项项目《浙江省重点地区重点污染物毒理学调查研究》内容，在本项目立项前，本实验室已开始从事这一调查工作，因此已有较好的工作基础，我们目前拥有拥有紫外分光光度计、PCR仪等仪器设备，完全能满足本次研究的需要。本次研究的经费主要由浙江省卫生厅科研立项项目提供。 四、研究方案 1. 拟采取的研究方法或试验方法及主要技术路线 本研究采用毒理学研究学进行调查。主要路线：DNA提取是采用生物工程研究所提供的试剂盒进行提取。设置相应的引物，对DNA进行扩展，酶切，根据ALAD基因多态性原理：ALAD基因第4外显子的第177碱基发生G-C突变，这个突变改变了ALAD酶构象，使其增加了AIAD2亚单位个体(ALAD22 型和ALAD12 型)，对电泳结果进行判断基因型；采用石墨炉院子吸收光谱法（GFAAS）对样本血铅水平进行测定；采用比色法对尿δ-ALA水平进行测定；最后采用excel软件录入建立数据库，应用SPSS11.0统计软件包对数据进行协方差分析和秩和检验，对三者进行比较。 2. 研究进度安排 2010.7-2010.8 文献查阅，翻译英文综述，了解实验背景，方法，目的。 2010.8-2010.9 熟悉实验仪器如PCR仪，电泳槽等，初步尝试实验操作，熟悉实验流程。 2010.9-2010.11正式进行实验操作，重复 ，对样本DNA进行扩增、酶切及电泳最后判断其基因型；对个地区的血铅水平及尿δ-ALA进行测定。 2010.12-2010.1 数据的处理、统计和分析。 2010.2-2010.3 论文撰写。 21
五、参考文献 [1]吴胜虎，沈晓明，颜崇淮，等．应用 氨基-δ-酮戊酸脱氢酶基因型筛查儿童铅毒性易感人群的研究．中华儿科杂志，2000, 38(7)：435-438． [2]Wetmur JG, Lehner G, DesnickRJ. The δ-aminolevulinate dehydratase polymorphism: higher blood lead levels in lead workers and environmentally exposed children with the 1-2 and 2-2 isozymes. Environ Res, 1991, 56:l09-ll9. [3]Wetmur JG, Influence of the common human α-amunolevulrate dehydratase polymorphism on lead body burden. Enmron health Pellet, 1994, 102:215-219. [4]王永伟,杨跃林,等.ALAD基因多态性与铅毒性遗传易感性关系的研究.四川大学学报，2008, 39（3）：511-513. [5]吴胜虎．颤祟帷,等．ALAD基因型与儿童铅毒性易感性研究．国外医学儿科学分册，1999，26(2)：85-87. [6]张文众，冷曙光,等.基质γ-羧基谷氨酸蛋白和氨基乙酰丙酸脱水酶基因多态性与儿童血铅的关系.环境与职业医学,2006，23（2）：112-114. [7]叶细标，吴翠娥,等.δ-氨基-γ-酮戊酸脱水酶和维生素D受体基因多态性与铅毒性易感关系的初步分析.中华劳动卫生职业病杂志，2002,20(5)：372-374. [8]张红辉，罗晓宁,等.37例铅中毒者尿δ-氨基乙酰丙酸的分析报告.中国城乡企业卫生,2009, 133(5): 15-16. 六、指导老师意见 签名： 年 月 日 七、学院意见 学院负责人签名： 年 月 日 22
附：开题报告会情况记录
参加开题报告会的主要人员 姓 名 章荣华 蔡德雷 职 称 副主任医师 主管技师 姓 名 孟真 职 称 主管技师 开题报告提出的主要问题及回答情况： 1.样品分析存在的问题和建议 1.由于样品的采集在基层，所以获得样品后不能及时送达中心大大制约了对标本的利用率，包括细胞的分离和DNA的提取非常困难。 2.项目仅限于为毒理学指标检测，指标之间的变化原因较难解释，需要结合人体内相关的污染物暴露情况进行分析，意义可能更大。 3.本项目检测出一定人数的铅暴露易感人群，但是数量相对较少，对数据的进一步分析有一定的影响，建议扩大样本量。 2.DNA提取注意事项 在提取DNA时注意做好无菌措施，以防感染。在提取过程中水浴时间的控制及在水浴时要对样品进行震荡混匀。加不同试剂后离心转数有所改变，注意及时调整离心转数。提取的DNA要及时将其放入-80℃冰箱，以防其变性。 3.ALAD多态性的原理 ALAD扩增上游引物5’-AGACAGACATTAGCTCAGTA -3’下游引物5’-GGCAAAGACCACGTCCATTC-3’ ，ALAD基因第4外显子的第177碱基发生G-C突变，这个突变改变了ALAD酶构象，增加了ALAD2亚单位与铅的亲和力，使ALAD2亚单位与铅的结合更为紧密，从而导致携有ALAD2亚单位的个体(ALAD1型和ALAD 2型)。 记录人： 年 月 日 23
本科毕业论文(设计)文献综述
学 院 姓 名 指导老师 合作老师 题 目 仁济学院 陈梦娇 章荣华 孟真、蔡德雷 专 业 学 号 职 称 职 称 生物技术 0719130022 副主任医师 主管技师 儿童铅中毒的研究 文献综述
儿童铅中毒的研究
指导老师：章荣华 合作导师：孟真、蔡德雷 （温州医学院仁济学院，温州，浙江 325035）
摘要：本文对国内外儿童铅中毒研究现状、铅中毒的根源、铅中毒对儿童的智能、
行为发育、体格生长发育以及对机体的神经、消化、血液、心脑血管、泌尿等多系统造成不可逆性的损害。
关键词：儿童铅中毒，根源，机体不可逆的损害。
引言
随着我国城市化，工业及交通业的迅猛发展，环境铅污染也日益加剧。铅对儿童的健康危害已经成为社会关注的焦点。由于儿童的特殊生理和行为特征，铅对儿童的危害是最直接，也最严重的。国内外大量研究证实，铅对儿童的生长发育、心理、智力及行为损伤是不可逆的，这种损害将是长期甚至是终生的。因此，全球对儿童铅中毒问题的研究极为重视。 1.国内外儿童铅中毒情况
1.1我国儿童铅中毒情况
根据WHO人类环境处的Pruess博士估计，全球5岁以下的城市儿童约有半数血铅（BPb）≥100μg / L，绝大部分铅中毒病例发生于发展中国家[1]。我国目前还
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