1.1.2 主要试剂........................................................................................................................ 17 1.1.3 主要仪器设备 ................................................................................................................ 17 1.1.4 主要溶液配制 ................................................................................................................ 17 1.2 试验方法 .................................................................................................................................. 17
1.2.1试验动物分组 ................................................................................................................. 17 1.2.1 样品的采集与处理 ........................................................................................................ 17 1.2.2 泄殖腔棉拭子、蛋清和胎粪样品中ALV P27抗原ELISA的检测.......................... 18 1.2.3 鸡白痢的检测 ................................................................................................................ 19 1.2.4 种蛋的孵化 .................................................................................................................... 19 1.2.5 数据处理与分析 ............................................................................................................ 19 2.1样品的采集结果........................................................................................................................ 20
2.1.1泄殖腔棉拭子、蛋清及胎粪样品 ................................................................................. 20 2.1.2血清样品......................................................................................................................... 20 2.2 在不同饲养模式下的黄山黑鸡禽白血病检测结果 ............................................................... 20 2.3 在不同饲养模式下的黄山黑鸡鸡白痢检测结果 ................................................................... 21 2.4 不同饲养模式对黄山黑鸡种蛋蛋品质的影响 ....................................................................... 22 2.4 不同饲养模式对黄山黑鸡雏鸡体重的影响 ........................................................................... 22 2.5 不同饲养模式对黄山黑鸡孵化性能的影响 ........................................................................... 22 3 讨论 ..................................................................................................................................................... 21 4 结论 ..................................................................................................................................................... 23 参考文献 ................................................................................................................................................. 24
VI
英文符号及缩略词
英文缩写 ALV ALV-J RSV LL NC RT IN PR SDS kb env pol gag LTR
gp85 gp37 SU TM CEF ELISA p27 IFA PCR PD SP
bp PBS min mol/L g mL cm μL nm r/min
英文全称 Avian leukosis Virus J subgroup of Avian leukosis Virus
Avian Sarcoma Virus Lymphoid Leukosis Neuleocapsid Reverse Transcreptase
Integrase Protease
Sodium dodecyl sulfate
kilobase envelope gene protease/polymerase group antigen Long Terminal Repeat glycoprotein 85 glycoprotein 37 Surface protein Transmembrane protein Chicken embryo fibroblast Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay
protein 27 Immunofluorescence Polymerase Chain Reaction
Pullorum diseases Salmonella pullorum
base pair
Phosphate-Buffer Saline
minute mole per liter
gram milliliter centimeter microliter nanometer rotation per minute
汉语名称 禽白血病病毒 J亚群禽白血病病毒 禽劳斯肉瘤病毒 淋巴细胞性白血病
核衣壳 反转录酶 整合酶 蛋白酶 十二烷基硫酸钠 一千个碱基 囊膜蛋白基因 蛋白酶/核酸聚合酶
群抗原 长末端重复序列 糖蛋白 85 糖蛋白 37 表面蛋白 穿膜蛋白 鸡胚成纤维细胞 酶联免疫吸附试验
衣壳蛋白 间接免疫荧光法 聚合酶链式反应
鸡白痢 鸡白痢沙门氏菌
碱基对 磷酸盐缓冲液
分钟 摩尔/升 克 毫升 厘米 微升 纳米 每分钟转数
VII
文献综述
1 黄山黑鸡
黄山黑鸡的主要产区为安徽省黄山市，该地区主要为丘陵地带，根据其地理位置可将其归为亚热带湿润性季风气候，具有降水量充足、四季分明的特征。在黄山大部分地区都有饲养黄山黑鸡，且多分布在山区，目前在黟县和祁门县的边界处较多，在黟县柯村，饲养量最多，该鸡种是当地劳动人民长期的人工选择和自然驯化后形成的，具有活泼的气质特点，耐粗饲，寻找食物和就巢性，适应性强，等，受到当地农民的亲耐。黄山黑鸡是该地山区农民放养的多种地方鸡之一。独特的自然地理环境和人文地理环境对黄山黑鸡品种的形成发挥了重要作用。
黄山黑鸡的公鸡躯体为马鞍形，背呈U型，羽毛为黑色，短而圆的头，脸部，肉垂和耳叶红色，冠主要为单冠，冠红色，齿5到7个。无胡须，喙呈青黑色或青色；母鸡体型较小，呈马鞍形，尾部较直，全身黑羽，头部短圆，肉垂和耳叶为鲜红色，且较公鸡略小。冠主要为单冠冠，冠红色，齿5到7个。虹彩橙黄色，喙青黑色或青色。皮肤为白色。雏鸡全身绒毛呈灰黑色[1]。
2 饲养模式
由于国民生活和消费水平的日渐升高，人们的饮食结构和消费观念也有所改变，对畜禽产品的质量要求更高。如今，肉品质优劣主要取决于风味、营养价值和安全性等因素。人们的生活习惯决定了肉和蛋的消费占消费的比重较大，但随着城市化进程的加速，土地资源的减少、环保和其他因素，制约了以往的养殖模式，鸡病种类增加，疾病的程度增加。同时，为了追求经济效益最大化，在舍饲养殖过程中使用药物治疗，并出现激素催熟现象，使得鸡的健康状况有所下降。笼养鸡虽然成本较低，但质量和安全性却令人担忧[2]；传统放养鸡的品质好，但养殖成本高，且易发生各种传染病[3]。
2.1 鸡的不同饲养方式
近年来，我国的养鸡产业集约化程度增加。鸡的养殖模式已经从农户放养发展为集约化、规模化的饲养模式，且比较成熟，目前我国养鸡业应用较多的饲养方式有笼养、平养、放养等饲养模式。 2.1.1 笼养
笼养鸡笼的种类有多种，主要由金属丝制成。笼养能够增加鸡的饲养数量，鸡群
1
管理集中，生产效率高，饲料营养全面且合理，饲料利用率较高；其生长速度较快，减少了饲养时间，提高成活率，在数量上能够满足不断增加的消费需求，利于增加经济效益；同时，便于加强饲养管理，统一防疫，减少疾病发生机率，特别是对预防球虫病大有好处。但由于高密度和环境条件的影响，容易引起鸡群的啄癖，腿病，胸囊肿病，且鸡群缺乏自由[4]。 2.1.2 平养
平养包括地面垫料平养、网上饲养和混合地面饲养三种方式。地面垫料平养的垫料原料有锯末，稻壳，秸秆，干草等，在鸡群淘汰或出栏后，彻底清除更换垫料。该方式可以提高鸡舍温度，利于仔鸡抵御严寒；腿病和胸囊肿发生率较笼养低[5]；比较适合于中小型鸡场和养鸡专业户。网上平养是将鸡群置于离地面有一定高度的网上地面进行饲养，这种方式可以改善鸡群的生长环境。网上平养以手动操作为主，也可装配自动饮水、喂料、清粪等设施。有研究表明该方式与笼养方式对鸡的死亡率和饲料利用率几乎无影响[5]。 2.1.3 放养
放养是将鸡放在大棚或林地中，让鸡群在这些环境下有充足的活动空间，自由觅食的一种方式。放养鸡群大部分时期在舍外活动，夜间回舍栖息。在该饲养方式下，鸡群可以获得充足的光照和活动空间，同时觅食到的自然蛋白和青绿饲料营养价值高，维生素、微量元素、脂肪酸等含量丰富。由于补料中未添加任何药物、抗生素和激素等化学物质，产品具有品质高、无药残、无污染等特点，市场效益好[6]。但由于养殖技术落后，养殖户依旧沿用以往的传统饲养方式，导致鸡群中疫病频频发生，造成养殖户养鸡积极性下降和严重的经济损失，阻碍了放养模式的发展和提升。侯庆文等[7]认为生态养殖是一种高效的养殖模式，且在生态环境保护方面发挥了积极作用。缺点是需要一定的放牧场地，饲料利用率低，同时由于采食的局限性和运动量较大而显著降低了生长速度。孔新荣等[8]认为，生态放养的场地要求地势高、干燥、坡度缓、避风、光照和水源充足，场地周围布置围栏。场地一般选择在果园或林地较好好。目前国内关于放养的相关研究较少，只对管理方法和经济效益进行了研究。国内已有报导在田间、山地、树林等放养模式[6]。
3 J亚群禽白血病
禽白血病（Avian Leucosis)主要是由禽白血病病毒（ALV）和禽肉瘤病病毒（RSV）引起禽的肿瘤疾病的总称[9]。根据临床症状的不同，可分为多种肿瘤[10]。其中大部分肿瘤都和造血方面相关，很少可以损害其他组织[11]。该病可引发鸡的许多传染性肿瘤
[12]
。根据病毒囊膜蛋白的抗原差异、宿主范围、病毒-血清中和实验和病毒间的相互
2
干扰模式，将病毒分成A~J 10个亚群[13]，A、B、C、D、E、J 6个亚群可以引起鸡群感染。A、B、C、D、J为外源性病毒，A、B亚群病毒在鸡群中最普遍，且A亚群较B亚群流行更广；C、D亚群很少出现，但对鸡也有致病作用；E亚型在鸡体内是以前病毒形式存在，但致病性很弱[14,15]。
禽白血病是造成早期养禽业经济损失的主要原因，随着养禽业养殖规模的扩大和科学技术的发展，禽白血病的危害已不容忽视，在上世纪80年代前后，世界上主要的大型养禽公司经过长期净化，已基本上将禽白血病净化干净，且病毒在遗传上也表现出相对稳定[16,17]。但在1988年，在英国发现了一种致毒性更强的ALV毒株，可引起鸡各脏器（特别是肝脏）的骨髓细胞瘤，且从正常肉种鸡和一个病鸡中分离到几株禽白血病病毒[18]。Payne等在此发现的基础上作了进一步研究，结果表明先前分离到的几株禽白血病病毒属于一个新的亚群，并进一步研究了HPRS-103株，对J亚群的研究起到了重要作用[19]，ALV-J的发现再次给肉鸡业的发展带来严重影响。随后，J亚型禽白血病很快爆发并广泛传播，在世界许多地区均报道发现ALV-J病例[20,21,22]。1999年，我国在肉鸡中发现 ALV-J[23]，由此证明ALV-J在我国鸡群中的存在。随后，该病在全国范围内迅速爆发和传播，且蛋鸡以及地方品种鸡也有感染。徐镔蕊等在蛋鸡中分离检测到该病毒[24]。成子强等在国内地方品种鸡中检测到ALV-J[25]。目前，J亚型禽白血病是我国养鸡业的一种重要传染病。
3.1 病原学
3.1.1 分类
ALV-J在最新分类中被归为反录病毒科α-反转录病毒属[9]。该病毒的特点主要是有病毒复制方面的酶。 3.1.2 形态及理化特性
ALV-J病毒在构造上与其他RNA病毒类似，呈两股线状结构[26]。病毒粒子呈球状，从外到内依次为球状纤突、外层膜、中层膜和核芯，病毒表面有突起，直径8 nm，构成了病毒糖蛋白。病毒的核芯结构由二倍体 RNA及各种酶（NC、RT、IN、PR）构成，在核芯内部有较密的电子分布，直径约为 35~45 nm，呈二十面体对称分布[27,28]。病毒在负染后，为球形粒子，在干燥的环境中会发生变形[29]。禽白血病病毒对热敏感，可通过高温灭活，只有在-60 ℃以下时, 病毒才能被保存数年而不丧失其感染力[30]。病毒全部化学成分包括 60~65%蛋白质，其中 5%~7%的糖蛋白，脂质占病毒的30%~35%，RNA 占 2.2%，还有少量可能来自宿主细胞的 DNA[31]。脂溶性溶剂可破坏病毒囊膜，从而使病毒失去感染能力[32]，在经过SDS处理后，病毒可发生裂解。ALV-J在pH 5~9时相对稳定，超出此范围则很快失活[33]。蛋白酶能够去除病毒粒子表面的部分糖蛋白，但对紫外线具有很强的抵抗力[34]。 3.1.3 基因组结构
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