ALV-J病毒是RNA病毒中的一种,病毒基因组结构为两条相同的单链RNA,两个完全相同的单链RNA分子长度在7.2 kb~7.8 kb之间[35],RNA通过反转录形成前病毒(cDNA)。病毒的基因组在RNA分子中的顺序为 5~gag~pol~env~3′,非编码区位于基因组两端,在5’端有帽子(m7GpppGmp)结构,在3’端有多聚A(Poly A)结构;编码区位于中间,由gag、pol和env基因组成,病毒的结构蛋白和有关的酶主要由这些基因负责编码。前病毒DNA与病毒 RNA的基因组序列相同,两端的重复序列(LTR)结构对病毒 RNA的复制和翻译有重要作用[36]。
ALV-J亚群的gag基因与A~E亚群相似性很高,在96%以上,且为保守序列[37],编码的抗原主要有 p27、p19、p15、p12、p10和p2[38]。p27是禽白血病病毒各亚群共有的群特异性抗原,占病毒蛋白比例较大,目前主要通过检测该抗原来判断鸡群感染ALV-J情况。但是该方法无法判断病毒的内、外源性[39],因此在检测时应选择合适的材料。
pol基因也为保守序列,编码两个酶:病毒反转录酶(RT)和病毒整合酶(IN)。反转录酶负责以病毒RNA为模板产生前病毒DNA,是病毒生活周期中所必需的[40];整合酶参与将前病毒DNA整合到宿主染色体,对病毒的复制有着极其关键的作用[41]。
env基因不同于gag和pol,有高度可变性[42],编码gp85和gp37两种蛋白,病毒蛋白由二者相互连接构成。gp85为表面蛋白(SU),主要起识别细胞受体作用,同时也能诱导鸡体产生抗体[43,44]。gp37是病毒的穿膜蛋白(TM),起到转运作用。有研究表明,与gp85基因的同源性,A、B、C、和D四个亚群是80%~85%,而J亚群的为40%[45,46,47];与gp37基因的同源性,A、B、C、和D四个亚群是92%~95%,但J亚群为65%[11,48]。
3.2 流行病学
J亚群禽白血病分布范围广泛,对鸡群危害严重,且在临床上表现出明显症状的较少[49]。感染J亚群禽白血病的鸡可发生死亡,鸡群的生产性能也会普遍降低。鸡是该病毒的自然宿主[50]。母鸡较公鸡在该病的流行中发挥的作用较大,感染的公鸡对后代的先天感染无影响[51]。但公鸡是重要的传染源[52]。
ALV-J具备两种方式进行传播:经蛋的垂直传播和在鸡群间接触的水平传播[53]。其中主要的传播方式为垂直传播,可以使感染经代间传播。健康鸡在与先天感染鸡密切接触后可获得感染,该病毒不耐高温,在外界很难存活,因此不易通过间接接触而感染。ALV-J在肉鸡中的传播速度快,传播效率高于其他外源性ALV,并能使鸡群产生免疫耐受(持续的病毒血症和缺乏抗体),可持续排毒并通过种蛋造成垂直传播[54]。
感染的胚胎在经过孵化后,可在出壳后的雏鸡血液中检测到大量的病毒,成年母鸡可把病毒传给子代。在受到感染的鸡胚胰腺腺泡细胞内可检查到大量病毒[55],病毒颗粒可通过雏鸡胎粪排出,传染性很强[56]。
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3.3 临诊症状及病理变化
发病鸡无明显症状,病鸡消瘦、体质虚弱、食欲不振、鸡冠苍白等。在蛋鸡中,主要表现为在产蛋高峰期前后,鸡的死淘率明显升高。肝脏和脾脏肿大,严重的肝脏可达到数倍之大。有明显症状的在短时间内就可死亡。剖检病鸡可见肝脏、胸骨、心脏、肾脏、卵巢、腺胃等组织有许多黄白色肿瘤结节。
3.4 危害
禽白血病的发病率和死亡率通常较低[57],ALV-J 常常可引发鸡群的骨髓细胞瘤(ML)。我国在蛋鸡中发现ALV-J后,该病的发病率明显上升[ 58,59]。虽然本病的发病率不高,但可引起鸡的生产性能下降和免疫抑制。在鸡的生长性能方面主要影响产蛋量和蛋品质[60],开产延迟、蛋的质量下降、受精率低和孵化率下降等,从而对养鸡业造成严重的经济损失[61]。鸡群感染ALV-J后,会产生免疫抑制,从而导致一些免疫抑制病的发生。最近的研究发现,ALV-J能与其他免疫抑制性病毒发生共感染,从而造成更为严重的经济损失[62,63,64 ]。
3.5 诊断和检测
禽白血病主要根据临诊症状及病理变化来进行诊断,且注意区分与马立克氏病的不同 [65]。另外以下几种方法也是进行禽白血病诊断必须借助的方法[66]。 3.5.1 病毒的分离和鉴定
在诊断禽白血病的多种方式中,病毒的分离和鉴定是一种传统的检测方法,被认为是检测ALV-J最实用的方法[67]。蛋清、10日龄鸡胚、病鸡血清、血浆和粪便中均含有病毒,都可作为病毒分离的材料。在检测这些分离的材料时,可将鸡胚或鸡胚成纤维细胞作为病毒分离和增殖的载体,病毒复制后利用以下方法进行检测。
抗力诱导因子试验:感染ALV-J的CEF细胞在受到同亚群肉瘤病毒的叠加感染时不产生病变。
非产毒细胞激活试验:该试验的原理是:经囊膜缺陷性禽肉瘤病病毒毒株转化成的细胞,无传染性禽肉瘤病病毒的产生,但在用ALV-J叠加感染后产生了传染性禽肉瘤病病毒,将其感染鸡胚成纤维细胞后便可测出[68]。
表型混合试验:本试验原理是C/O(对所有亚群均易感)CEF细胞感染E亚群禽肉瘤病病毒后,会产生转化细胞,在进行叠加感染时,若材料中含有其他亚群的白血病病毒,便可产生其他亚群的禽肉瘤病病毒,这可以通过C/E CEF来测定[69]。 3.5.2 血清学检测方法
血清学检测方法敏感性高、可操作性强且经济适用,在ALV-J的检测中最为常用。而在血清学检测中,ELISA方法在临床中应用较为广泛。该方法具有特异性强、灵敏度高、操作简单、检测快速等优点,可适用于多种样品的检测,既可用于检测鸡群中
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的ALV-J抗原,又可用于检测ALV-J抗体,目前在实际应用中抗原检测较抗体检测要广。国外最早建立该方法,1979年,Simith成功建立了ELISA法[70]。当前,我国虽然有很多关于该方法的研究,但都未达到很好的效果,主要还是依赖进口。ELISA法无法区分内源性病毒和外源性病毒,检测结果有出现假阳性的可能。但该方法速度较快,对于大型鸡群的常规检测很有适用性。
除利用ELISA检测外,还可通过其他一些方法检测。IFA虽然敏感性很高,特异性强,可快速作出诊断,但多用于实验室诊断,很难在生产上推广使用;病毒中和试验敏感性最高且具特异性,但操作繁琐,耗时长,在诊断中很少应用;琼脂扩散试验方便易行,适用性好,但该方法容易使鸡产生应激反应,敏感性差,易出现假阳性,实际操作起来很困难。 3.5.3 分子生物学检测方法
目前,ALV-J病毒检测的方法主要是PCR技术。该方法检测ALV-J具有特异性高、快速简便等特点,其敏感性是ELISA检测方法的5倍以上。被检样品的DNA可以从细胞培养物上提取,也可以直接从患病鸡的肝脏、血液等组织提取,用以检测ALV-J的前病毒DNA[67]。但该方法对仪器和操作要求较高,适用于实验室检测。
3.6 防治
本病的传播方式有垂直传播和水平传播,但主要为垂直传播,产生免疫耐受的鸡,成为主要的传染源,本病通过疫苗免疫后未产生明显效果,且至今尚无有效的疫苗,防治本病最有效的措施为净化种鸡群。从种鸡群消灭ALV-J的步骤包括:选择蛋清和泄殖腔棉拭子检测呈阴性母鸡的受精蛋进行孵化;淘汰胎粪检测ALV-J呈阳性的雏鸡,并同时淘汰其家系成员;在隔离条件下饲养无ALV-J的各组鸡,连续进行4代,建立无ALV-J替代群。但该方法难度大,可行性较差,目前最有效措施主要是减少母源性感染,另外严格的消毒措施也可避免雏鸡的感染。
4 鸡白痢
鸡白痢(PD)是由鸡白痢沙门氏菌(SP)造成的,严重影响了养鸡业的发展[71]。并通过多种途径传染给人,对人类健康造成严重威胁[72]。该病一直是养鸡业的顽疾,对雏鸡危害最大,感染鸡可大量死亡[73];成年鸡多为隐性感染,并可将病菌传给子代。该病在1899第一次被报道,1929将被正式命名为“鸡白痢”,而且至今仍在使用。在近几年,该病的发病特征发生变化,如疫病混合感染愈加严重、疫病的非典型性增多、饲料质量致病因增多、遗传病因致死率明显增高等变化[74],成为新的防治重点之一。
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4.1 病原学
鸡白痢沙门氏菌(SP)为肠杆菌科沙门氏菌属,因其无鞭毛而不运动,无荚膜,不产生芽胞。革兰氏染色阴性,细菌的两端钝圆,大部分是以单一的形式存在。革兰氏染色阴性,细菌的两端钝圆,呈直杆状,绝大多数菌体以单个形式存在。在伊红美蓝培养基上生长为有特征性的小菌落[12]。在肉汤琼脂培养基上生长较差,菌落较小。通过SS选择培养基培养有明显的特征 [75]。SP有O抗原,无H抗原。O抗原成分分别为1、9、12,其中O抗原12具有变异性(O抗原121、122、123)[76]。该菌能使鸟氨酸发生脱羧反应[77,78]。本菌对热和常规消毒剂较敏感,加热至70 ℃经过20 min,用消毒剂经15~20 min均可将其杀死。但该菌对外界自然环境具有较强的抵抗力,存活时间较长。
4.2 流行病学
在禽类中,鸡表现出较强的易感性,火鸡也可感染[78,80,81]。不同品种的鸡对鸡白痢沙门氏菌的易感性不同[82]。母鸡较公鸡易感本病,病鸡、带菌鸡可成为传染源。该病可通过垂直和水平两种方式传播。水平传播主要是在鸡群内和鸡群之间及养殖场间的传播,病鸡的粪便污染了饲料、饮水、用具,健康鸡通过接触经消化道感染。本病主要通过垂直传播,带菌母鸡可通过卵将病菌传给子代。带菌卵孵化出的病雏能将大量病菌排出体外,健康雏鸡可通过接触而受到感染。健康雏鸡受感染后,未及时采取有效措施,可发生死亡,耐过鸡则成为带菌者,成年后可通过卵传给子代。本病常年都有发生,管理、环境、应激等因素可促进本病的发生。
4.3 临诊症状及病理变化
该病的发病症状在雏鸡和成年鸡中明显不同 [83]。雏鸡感染后的潜伏期为4~5 d,大多在孵化出几天后才表现出明显症状。一周后发病鸡数量逐步增加,在随后的一至两周数量最多。病鸡有的急性死亡,有的表现精神萎靡,羽毛松乱,翅膀下垂等症状。在初期病鸡的采食量下降,随后无采食行为。发生腹泻的病雏,有时可因粪便风干堵塞肛门,从而引发炎症。对本病耐过的鸡可变为带菌鸡,发生感染的成年鸡症状不明显。母鸡发生感染后,其生产性能明显下降,有的还可发生急性死亡。
发生急性死亡的鸡,未表现出明显的病变特征。病程较长的,通过剖检后在心肌、肺、肝、盲肠、大肠等处可见坏死灶或结节。输尿管膨胀,盲肠发生阻塞,且有时混有血液。肺部常因炎症发生病变。育成鸡发病后,肝脏明显肿大,颜色呈暗红,在肝表面有坏死病变,在其内部发生出血,有大量血水积聚腹腔内,在肝表面可见有大的凝血块。成年鸡感染后主要表现为生殖器官产生病变。
4.4 危害
鸡白痢沙门氏菌主要有两方面的危害:一是会导致鸡生长缓慢,感染鸡后,为了
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抵抗菌体内增殖需要消耗大量的能量,从而增加养殖成本;二是可造成鸡的生产性能明显降低。有试验表明,发生感染的母鸡所产蛋的蛋品质下降,且阳性母鸡子代雏鸡较阴性母鸡更易发生死亡[84]。时倩等的试验显示鸡白痢阳性鸡群的生产性能较阴性鸡群的低[85]。张丹俊等研究发现,在经过鸡白痢净化后,鸡的死淘率发生明显的下降;且净化组在蛋重、料蛋比、种蛋受精率等方面均优于非净化组[86]。
4.5 诊断和检测
鸡白痢可根据流行病学、临诊症状和病理变化进行初步诊断,进一步确诊还应进行细菌的分离和鉴定。此外还可应用血清学方法和分子生物学方法。 4.5.1 细菌的分离和鉴定
通过无菌操作采集适量病死雏鸡的肝脏、心血、卵黄、胆汁、脾脏等器官或组织,捣碎后接种到SS琼脂或麦康凯琼脂培养皿上,37 ℃下培养24 h,观察菌落形态。若出现圆形细小无色透明的光滑菌落,可以判定为可疑菌落,革兰氏染色作形态学检查,之后可进行血清学鉴定。 4.5.2 凝集试验法
鸡白痢免疫耐受鸡的血液中可产生特异凝集素,因此可采用凝集试验法诊断是鸡白痢。Runnels[87]先用玻璃平板凝集试验对鸡白痢沙门氏菌进行了检测。随后,有关人员提出了相应的改进,使该方法更为方便,快捷。血清、全血、卵黄等可作为检测材料。全血平板凝集试验具有操作简单、反应速度快的特点,因而被广泛用于生产中,但由于受各种客观条件影响,检测结果会有一些假阳性。另外,该方式灵敏度低,有漏检的可能。由于血清中含有高水平的抗体,因此血清平板凝集试验具有更高的灵敏度和更强的特异性,但由于该方法操作较复杂,因此适用于核心鸡群净化检疫[87,89]。间接血凝试验的阳性检出率比全血平板凝集试验要高10%~30%,且在l~2 min即可判定结果,是一种检测鸡白痢的新方法[90]。 4.5.3 ELISA方法
ELISA法在鸡白痢沙门氏菌的检测中应用较为广泛。在检测雏鸡时采用全血,而在检测成年鸡时,既可以采用血清,也可采用全血,二者检测的抗体水平比较接近[91]。ELISA方法具有灵敏度高、检测速度快的优点,但是该方法特异性较低,且仅采用ELISA法检测可靠性不足,还应结合凝集试验等。 4.5.4 PCR方法
随着分子生物学检测技术的发展,一些先进的检测技术开始被广泛应用。抗生素的滥用造成该菌产生耐药性,因此分离该菌较困难,且常规检测方法的结果准确度不高,PCR成为检测该菌的一个新的有效方法,该方法通过提取病鸡组织中的DNA,并从其中扩增了一个片段,长度为284bp,利用inva基因中的定向序列合成所需的引物。该方法对于从阳性鸡和阴性鸡中分离到的细菌DNA,均可将其检出,且较一般
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