方法的敏感性高，是一种更有效果的检测方法[92]。
4.6 防治
4.6.1 预防措施
建立无感染鸡群：主要是净化种鸡群，应选用健康种鸡，保证种源的健康性。经过检测后，对阳性鸡和可疑鸡进行淘汰，检测每年都应进行，每次检出阳性鸡且经确诊后，采取净化措施，直至淘汰全部阳性鸡和可疑鸡。
规范饲养管理技术：在每次进鸡前都要至少提前2周对鸡舍、设备、用具及周围环境进行彻底消毒。在饲养过程中，制定合理的日粮配方，执行严格的消毒措施，做好育雏工作。在孵化种蛋前要做好清洗和消毒工作，用作孵化的种蛋应产自无病种鸡，且种蛋须经消毒后才可入孵。雏鸡出壳后可在饮水或饲料中添加适量抗生素，但应合理选择与使用药物，避免产生耐药性。 4.6.2 治疗
抗生素治疗：在利用抗生素治疗本病前，最好先利用现场分离的菌株要做药敏试验[93]。磺胺类药物在治疗本病时效果较好，可作为首选药物。此外，土霉素、环丙沙星、恩诺沙星、卡那霉素等也有较好的疗效。
中药治疗：随着鸡白痢沙门氏菌的耐药性增强，家禽产品中的抗生素残留量也随之增加，对消费者的健康构成了严重威胁。中草药由于药物残留量低，而且可以增强机体的免疫力，现已广泛应用于鸡白痢的治疗[93]。
微生物制剂：微生物制剂是当前研究的热点，其中益生菌的应用对鸡白痢沙门氏菌起到了积极作用。益生菌通过改善动物胃肠道内的菌群，进而起到预防和治疗致病菌感染的作用。对新生雏鸡使用益生菌可有效控制沙门氏菌。常用的益生菌有乳酸菌、双歧杆菌等，对治疗该病效果较好，且环保无污染，有很好的应用前景[94]。
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引言
黄山黑鸡在品种分类中为兼用型，为安徽省特有的家禽品种。该品种具有全身黑羽，适应性强，体型清秀，肉蛋品质高等特点，2009年通过我国有关部门的专业鉴定[95]。
鸡白血病是严重危害鸡群的最重要的疾病之一，主要是经种蛋垂直传播，国内外防制鸡白血病主要通过检测种鸡ALV阳性率，淘汰带毒的种鸡，切断其传播途径[96]。鸡白痢也是影响我国养鸡生产的重要疾病，与鸡白血病均可通过种蛋垂直传播。受污染的健康母鸡所产种蛋和带菌母鸡产的种蛋在孵化时，会有死胚或病雏，成为健康雏鸡的传染源，经感染且耐过的可成为带菌鸡，经带菌卵传给子代，形成恶性循环，可造成严重的危害[97]。
当前，地方鸡规模化饲养条件下白血病、沙门氏菌病的净化引起业界关注，同时地方鸡不同饲养模式对主要垂直传播疾病阳性率的影响研究较少。本研究通过比较笼养和放养两种饲养模式对地方品种黄山黑鸡白血病、鸡白痢阳性率和繁殖性能影响的差异，为黄山黑鸡种源性疾病净化与防控提供参考依据。
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1 材料与方法
1.1 试验材料
1.1.1 试验动物
试验黄山黑鸡选自安徽省黄山市黟县柯村黄山黑鸡保种场。 1.1.2 主要试剂
ELISA试剂盒购自北京IDEXX元亨生物科技有限公司；
鸡白痢平板凝集抗原、鸡白痢阳性血清和鸡白痢阴性血清均购自北京中海生物科技有限公司。 1.1.3 主要仪器设备
表 1-1 主要仪器设备 Table 1-1 The main apparatus
仪器名称 台式低速离心机
电子天平 酶标仪 游标卡尺 蛋壳厚度测定仪 蛋壳颜色测定仪
生产厂家
长沙维尔康湘鹰离心机有限公司 上海越平科学仪器有限公司
美国BIO-RAD公司 上海精密仪器厂 以色列Orka公司 英国TSS公司
型号 TD4Z-WS YP16002 BIO-RAD680 LR029015 GSA-1020 QCR型
1.1.4 主要溶液配制
pH 7.2的0.01 mol/L PBS缓冲液：
（1）制备25×PBS：称取2.74 g Na2HPO4和0.79 g NaH2PO4·2H2O加蒸馏水至100 mL。
（2）制备1×PBS：从（1）中量取40 mL，加入8.5 g NaCl，加蒸馏水至1000 mL。 （3）调节pH至7.2。
1.2 试验方法
1.2.1试验动物分组
选择120日龄的黄山黑鸡，随机分为两组，每组各300只，分别采用三层阶梯式笼养和山坡林地放养，笼养公母鸡配比1:15；放养鸡公母鸡配比1:10，采取相同的光照制度，即自然光照+人工补光。笼养鸡群和放养鸡群饲喂（或补饲）产蛋鸡全价配合饲料。笼养采用人工授精，林地放养公母鸡自然交配。 1.2.1 样品的采集与处理
（1）泄殖腔棉拭子样品的采集：取笼养黄山黑鸡92只，其中公鸡32只，母鸡
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60只；取放养黄山黑鸡90只，其中公鸡34只，母鸡56只；用消毒棉棒插入鸡泄殖腔内约1.5 cm处，并沿泄殖腔内壁转一至两圈后取出，避免带有鸡粪，将插入泄殖腔的一端剪入加有1 mL PBS缓冲液的离心管中，剪刀要保持清洁，使剪刀不粘鸡粪、不潮湿，以尽量减少交叉污染的机会。加入样品盖上离心管盖后，在管上编号。采样结束后，将样品放入加有冰袋的保温箱内并密封，样品送达实验室后，将其放入-20 ℃冰箱中冷冻以待检测。
（2）蛋清样品的采集：各取笼养和放养同一批300日龄母鸡所产的种蛋90枚，在其小头端打一小孔，用移液器吸取100 μL蛋清，置于试管内备用。
（3）胎粪样品的采集：在进行雏鸡公母鉴别时，采集胎粪，放入加有1 mL PBS缓冲液的试管中，采样结束后，将样品置于-20 ℃冰箱中冷冻以待检测。
（4）血清样品的采集：本次试验采集了231日龄（笼养100只，放养100只）、251日龄（笼养99只，放养94只）、274日龄（笼养84只，放养96只）、301日龄（笼养100只，放养100只）和327日龄（笼养100只，放养100只）的黄山黑鸡的血样。首先采集待检鸡只全血样本，将鸡保定后，用一次性注射器在被检鸡只翅膀内侧的静脉血管抽取3 mL血液，将血样置于塑料离心管内，待血清自然析出后，吸取血清，进行血清平板凝集试验。
1.2.2 泄殖腔拭子、蛋清和胎粪样品中ALV P27抗原ELISA的检测 1.2.2.1蛋清样品的检测步骤：
（1）将采集的蛋清于-20 ℃反复冻融3次，以降低其粘稠度，然后恢复至室温（18~25℃）备用。
（2）从试剂盒中取出96孔酶标板，用移液器分别吸取100 μL阴性和阳性对照液加入板孔。
（3）在对应位置的孔中分别加入100 μL待检的样品，将检测板置于室温下孵育60 min。
（4）垂直方向甩出反应板中的内容物，用移液器加入350 μL蛋清专用的洗涤液（用去离子水1:20倍稀释）使每板孔填满，洗涤5次，每次洗完在吸水纸上拍干。
（5）在每孔中加入100 μL的二抗，盖好板盖，室温下孵育60 min。
（6））孵育完成后取出检测板，将稀释液甩净，用洗涤液洗涤5次，每次洗完在吸水纸上拍干。
（7）在每孔中加入100 μL底物溶液，遮光反应15 min； （8）在每孔中加入100 μL的终止液，使反应停止。 （9）利用酶标仪测量吸光值A。 1.2.2.2 泄殖腔棉拭子和胎粪的检测步骤如下：
（1）将样品反复冻融3次，离心后吸取100μL上清加入到检测试剂盒酶标板检
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样孔中，37 ℃温箱孵育60 min。
（2）孵育完成后取出酶标板，将稀释液甩净，用洗涤液洗涤5次，每孔加入100uL酶标二抗，室温下孵育60 min；
（3）孵育完成后取出酶标板，将二抗甩净，用洗涤液洗涤5次，拍净洗液，每孔中加入 100 μL TMB底物溶液，避光反应15 min；
（4）在每孔中加入100 μL的终止液，使反应停止，利用酶标仪测量吸光值A。 1.2.2.3 计算方法：
（1）阴性对照的平均值（NCx）：NCx=[A1孔A(650)+A2孔(650)]/2 （2）阳性对照的平均值（PCx），PCx=[A3孔A(650)+A4孔(650)]/2
通过计算S/P值确定样品的阴、阳性。S/P≤0.2，样品为阴性；S/P>0.2，样品为阳性。S/P=(所测样品平均值-阴性对照平均值)/(阳性对照平均值-阴性对照平均值) 1.2.3 鸡白痢的检测
用50 μL移液器吸取抗原50 μL，垂直滴于玻璃板上，然后吸取50 μL被检血清与抗原混合，2~3 min内判定结果。若一半以上发生凝集，则可判为阳性，否则判为阴性，在二者之间的判为可疑，可疑的在经过单独饲养后，再作检测，依据结果做出判定。
1.2.4 种蛋的孵化
产蛋率达到50%后开始收集种蛋，连续收集10天。每种饲养方式共收集种蛋382枚。种蛋收集后在蛋库进行熏蒸消毒，并用记号笔标号，集中入孵。种蛋入孵前每天测定编号种蛋的外部蛋品质，主要包括：
（1）蛋重：用电子天平测定（精确到0.1 g）。
（2）蛋形指数：通过游标尺测量纵径和横径来计算，蛋形指数=纵径/横径。 （3）蛋壳厚度：通过蛋壳厚度测定仪测定钝部、中间和锐部三点的厚度值，计算平均值，单位为mm。
（4）蛋壳颜色：用蛋壳颜色测定仪测定，使用前采用黑白两块标准瓷块校正。黑色瓷块的校正值为0，白色瓷块的校正值为79.9。通过测定钝部、中间和锐部三点的颜色值，计算平均值。
种蛋经熏蒸消毒后放入孵化箱进行孵化，按照孵化程序进行孵化（孵化条件：1~18天温度37.8 ℃湿度50%~70%，19~21天温度37.2 ℃湿度75%，翻蛋时间间隔为2 h）。第10天照蛋统计两种模式的种蛋受精率。落盘前准备塑料网兜和纸片，落盘时将每枚雏鸡和一张记录该雏鸡种蛋号纸片放进一个网兜内，纸片登记该雏鸡编号、性别及重量。
1.2.5 数据处理与分析
采用EXCEL对数据进行初步整理，SPSS16.0软件T检验进行统计分析。
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