3、盖紧管盖,短暂离心,上机检测。
(七) 软件运行(以天隆仪器客户端作为演示)
1、打开检测仪器电源,仪器进行自检运行;双击点开“个体化药学服务平台”分析软件;
2、在提示框中的“温控实验项”选择待检基因类型组别;在“基因位点项”选择该次检测的SNP位点。点右下角“选择”按钮进行下一步。
每一个基因组里的SNP位点可同批次进行检测(各基因位点在打开软件之后的“样本设置”界面的“基因类
型”下拉框中选择)
3、对待检标本进行设置
(1)点击“新建”按钮,或在“文件”选项里的“新建”,弹出保存对话框,设置文件名和保存路径。(也可以不点击新建,在进行样本设置过程中会自动弹出保存对话框,设置并保存后不再提示。)
(2)按照位置从A1开始的顺序,在“名称”栏对待检样本进行编号。在“基因类型”栏选取该标本待检的基因名称。选择基因型时,样本选择相应的基因型,质控选择“通用”。
4、点击右上角“开始”按钮(三角图形),开始运行检测。
5、检测运行完成后。软件“数据分析”界面给出基因型分析结果。
注意事项:
1)待检样本放入仪器的位置顺序。与软件“样本编辑”界面中位置顺序一致。 2)运行开始后,不能关闭软件或者进行其他操作。检测完成后,数据会自动保存。
3)在检测过程中,电脑不能进入待机或者休眠。使用前,需将待机、睡眠、关闭显示器等设置修改为“从不”。 4)检测过程中,如果需要查看先前的数据,可以重新打开客户端软件,不会影响正在运行的原件。但是,此时不能修改各位点参数、温控等设置等。
5)若检测样品显示的结果为“重测”,则表示该样品无阳性检测信号或信号过低。“重测”往往是因为样本量
太低,加入的样品DNA拷贝数,达不到本方法的检测下限3000拷贝,应增加样品DNA拷贝数后,重新检测。 (八) 质控品说明 1、标准品质粒
每个SNP位点对应三个标准品(野生纯合型、突变杂合型、突变纯合型),是根据NCBI的标准序列、人工合成的DNA标准片段。标准品为1.5ml离心管包装。每个SNP位点有对应标准品,标准品编号与样本分析试剂盒上基因位点编号对应。
2、质控的制备
分别从每个标准品中取1.5ul标准DNA序列,加入到分析样本处理试剂,用于检验的质控。每个SNP位点对应三个标准品,对应做三种质控。质控试剂有该位点的三个基因型的标示,质控试剂与普通检测试剂相同,可以依据实际情况调换使用。
3、质控的使用
质控主要用于“MaxSt差值上限”与“MinSt差值下限”(在博奥设备客户端中,此二项为“ΔSt上限”、“ΔSt下限”)的设定。每使用一批新的试剂时,应用该批试剂随带的三种基因型的质控品进行系统参数校准。若连续使用同一批试剂,在累计完成50份临床标本检测时,应进行一次新的质控检测。
4、若质控在“通用”类型进行试验后,计算出的ST差值不能按照从小到大或从大到小(A-B-C或C-B-A,质控杂合突变基因型ST差值必须在中间)时,必须在第一时间,将质控试验结果文件以及软件一起打包发送至我司技术支持部。我公司技术支持服务邮箱为:support@sino-era.com。
(九) 试剂与样本的保存
1、血液标本:4℃可临时存放,-20℃冷冻保存时间不能超过1周。长时间冷冻或反复冻融会破坏白细胞结构,导致富集的样本不足,使用分析保存液(耀金保)保存的待检血样,于4℃临时保存,于-20℃可保存至少3月。
2、分析保存液:可于4℃低温保存。