六 、实验报告
1. 要求每人有完整的原始实验记录，实验记录连同实验报告一起交老师评分。 2. 实验报告主要内容： （1） 实验名称 （2） 实验原理
（3） 实验仪器设备和化学试剂
（4） 实验菌种名称，培养基和实验方法，包括分析方法；实验步骤按顺序填写 （5） 实验结果，包括菌的生长曲线，产物的生成曲线，分析图谱，每批实验的
产物量，列表，以及对比分析，说明等 （6） 查阅的与实验相关的参考文献
（7） 实验对动手能力培养的收获及实验中获得的经验教训建议等。 3. 实验报告提交和评分
实验完成后一个星期之内提交实验报告，由学习委员收集，交实验指导教师。
总评分按实际操作过程和实验报告内容质量两个部分，各占50分。实际操作过程包括参加实验的次数考勤情况、操作的正确性和熟练程度、分析解决所遇到问题的能力、互相帮助的作风等；实验报告包括记录的翔实准确、工艺过程的描述、分析数据的整理及其图表的清晰度、结果和结论分析的深度等。 七、实验操作步骤及结果分析
（一）红曲的发酵试验及其抑菌作用研究
1） 实验原理：红曲霉通过有氧发酵将淀粉质原料转化为次级代谢产物红曲色素。 2）实验仪器设备和化学试剂
1、 实验仪器：电子分析天平，手提式蒸汽灭菌锅，自动控制蒸汽灭菌锅，双孔水浴锅，电炉，生物显微镜，恒温培养箱，培养摇床，真空干燥箱，紫外可见分光光度计，离心机，真空泵，真空干燥器，布氏漏斗，蒸发器
2、 化学试剂：大米粉、硝酸钠、磷酸二氢钾、硫酸镁、乳酸、95%乙醇、蒸馏水
3） 试验菌种名称，培养基和试验方法
1、菌种：红曲霉菌种monascus purpureus 。
2、培养基：
（1）种子培养基：大米粉3% ，硝酸钠O.5% ，KH2PO4 0.15% ， MgSO4 0.1% , 250ml三角瓶中装量100ml，pH6.0乳酸调 （加入一定数量的玻璃珠），121℃灭菌30分钟备用（或可溶性淀粉 3g，硝酸钠0.3g，黄豆饼粉0.5g，水100ml “微生物学实验” 胡开辉）每小组做一瓶 （2）发酵培养基：大米粉9% ，硝酸钠O.2% ，KH2PO4 0.1%， MgSO4 0.2% ，pH6.0乳酸调 4）实验步骤 5月26号
1．种子培养基为：（配两瓶分别标为1A,1B)
大米粉3% ，硝酸钠O.5% ，KH2PO4 0.15% ， MgSO4 0.1% , 250ml三角瓶中装量100ml，测pH,pH6.0乳酸调,不需滴加乳酸调pH,（分别加入70颗玻璃珠），用10层纱布裹住锥形瓶口，再套上牛皮纸密封，121℃灭菌30分钟备用。 2．接种红曲霉
在无菌操作台进行接种：1.点燃酒精灯；2.用酒精棉球擦拭双手与接种铲；3.解下细绳松动瓶口，灼烧接种铲，待冷却后取菌种接种（B瓶中接种的菌种面积约0.09cm2;A瓶中接种菌落面积比B瓶稍大一点） 3．菌种培养
在摇床上培养（30℃,188rpm） 5月27号
1.发酵培养基配制（配两瓶分别标为1A,1B)
大米粉9g ，硝酸钠O.2g，KH2PO4 0.1g， MgSO4 0.2g，100ml水，测pH,pH6.0,未滴加乳酸调pH，分别加入70颗玻璃珠，用10层纱布裹住锥形瓶口，再套上牛皮纸密封，121℃灭菌30分钟备用。 2.接种
在无菌操作台上将培养好的种子培养液1B（1A放入冰箱中）用移液枪吸取1ml,接种于已灭菌的上述发酵培养基A,B中 3.菌种培养
在摇床上培养（30℃,188rpm）
4.取B瓶种子培养液制片，检测红曲霉生长状况（第一次镜检）
滴一滴生理盐水于载玻片上，滴一滴种子培养液和伊红美蓝，盖上盖玻片镜检，拍照（见附件） 5月28号
1.取斜面培养基中的红曲霉进行制片，镜检
在无菌操作台上进行制片，点燃酒精灯，酒精棉球擦拭双手与接种环，取两片载玻片，均滴加一滴生理盐水，灼烧接种环，冷却后，挑取斜面培养基上的红曲霉，涂于生理盐水中，按同样的方法在做一载玻片，一个滴加伊红美蓝染色，另一个不染色均盖上盖玻片，镜检，拍照。【见图一、图二】 2.在B瓶发酵培养基中追加1ml菌种（无菌操作台） 5月29号
1.在无菌操作台上，用移液枪取五毫升A瓶中的发酵液与离心管中【A瓶比B瓶颜色深（见图三），取完后继续放在摇床上培养】装有发酵液的离心管放入离心机中以3500rpm离心5min,取上清液测在505nm处的吸光值A管ɑ=0.204(10:30);B管ɑ=0.342（15:25）
2.将离心管的沉淀物制片观察，并拍片【见图四、图五】 3.用95%的酒精浸提离心管A,B中的沉淀物（16:05） 5月30号
1.将离心管中的浸提物离心五分钟，3500rmp取上清液测吸光值 A管ɑ=0.096;B管ɑ=0.389（15:14）
2.用抽滤机抽滤红曲发酵培养基（A,B均抽滤后存放在一起）把滤渣即菌丝收集倒入三角瓶中，加入95%乙醇（体积约为滤渣体积的4-5倍），牛皮纸封口。（15:09）（布氏漏斗中叠放三层滤纸） 6月3号
1.取100g大米于500ml三角瓶中，用200ml沸水浸泡2h，沥干封口于灭菌锅中121℃灭菌30min
2.配制200ml大米粉培养基配置两瓶（A为实验组，B为对照组）
大米粉18g,硝酸钠0.4g，KH2PO4 0.2g ， MgSO4 0.4g , 未滴加乳酸均加入 60
颗玻璃珠。8层纱布，牛皮纸封口，于灭菌锅内121℃灭菌30min
3.无菌操作台（用红曲种子培养基A）接种，在大米粉培养基A中接种两毫升种子液（14:54），大米培养基接种10ml（14:59）（后因大米没熟，加水20ml，再次灭菌—121℃，30min。接种20ml，放入恒温箱培养。
4.在两瓶大米培养基中各取5ml（在无菌操作台上进行）于离心管中，离心管A为实验组，B为对照组，记为0号样。在离心机中离心5min，3500r/min。倒出上清液，沉淀物用95%的乙醇浸提。[15:43] 6月4号
1.在505nm处，测5月30号下午滤液及用乙醇浸提过的滤渣的吸光值。测滤液的吸光值用蒸馏水作对照，测得?=0.519[9:30]，测酒精浸提后的上清液，用酒精作对照，测得?=3.010[9:30],稀释8倍后，测得?=0.608[9:45]，操作完毕，倒入废液缸，洗净。
2.测6月3号下午，0号样的吸光值，505nm，用酒精作对照，?A0=0.034，
?B=0.029[9:49]
0
3.在无菌操作台上，用接种铲翻动大米培养基[10:28]，操作完毕，放入恒温箱中培养。
4.从摇床上取出实验组（未红），恒温培养箱中取出对照组，重复6月3号四过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为1号样[14:55]，操作完毕，放回原位。【未知原因，已废，另取】 6月5号
1.从摇床上取出实验组（未红），在无菌操作台上，补加彭帆组种子2ml[8:54]，操作完毕放入摇床。
2.从恒温箱中取出大米培养基，在无菌操作台上，用接种铲翻动通气[9:00]（深红），操作完毕，放入恒温箱培养。 3.观察大米培养基，紫红[14:35]
4.从摇床上取出实验组（淡粉），取出对照组，重复6月4号四过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为1号样[14:50]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A1上清液=0.833[15:14]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[14：
57]。
5.从摇床上取出实验组（嫣红），取出对照组，重复6月5号四过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为2号样[21:00]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A2上清液=1.405[21：23]，稀释4倍后，?A2上清液=0.3513[21:29]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[21:09] 6月6号
1.测6月5号四中1号样的吸光值。?A1=0.336，?B2=0.032[9:33]
2.从摇床上取出实验组（绛红），取出对照组，重复6月5号五过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为3号样[11:06]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A3上清液=0.577[11:27]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[11:22]
3.将6月5号五中的离心管取出，离心5min，测上清液的吸光度。?A2=0.214，
?B=0.08[14:54]
2
4.从摇床上取出实验组（绛红），取出对照组，重复6月6号二过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为4号样[15:51]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A4上清液=0.574[16:10]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[15:58] 6月7号
1.将6月6号三中的离心管取出，离心5min，测上清液的吸光度。?A3=0.832，
?B=0.018[9:13]，将实验组稀释2倍后，?A2
3稀释=0.416[9:27]
2.从摇床上取出实验组（深红），取出对照组，重复6月6号四过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为5号样[9:30]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A5上清液=1.118[10:04]，稀释2倍后，?A5上清液=0.671[10:11]）。B中上清液倒