入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[9:43]
3．在无菌操作台上，从大米三角锥瓶中，取大于5g大米。取出后，再用天平称量8g，用40ml95%的乙醇浸泡，用牛皮纸封口[10:46]。 4．测红曲4号样的吸光度，?A4= 0.561，?B4=0.019[16:10]
5.从摇床上取出实验组（深红），取出对照组，重复6月7号二过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为6号样[16:16]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A6上清液=1.615[16:15]，稀释4倍后，?A6上清液=0.546[16:39]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[16:27] 6月8号
1.测红曲5号样的吸光度，?A5=
0.620，?B5=0.012[8:56]
2.从摇床上取出实验组（深红），取出对照组，重复6月7号五过程，离心管A为实验组，B为对照组，记为7号样[8:45]，操作完毕，三角锥瓶放回原位。离心管离心5min，3500r/min，将A中上清液倒入一离心管，测吸光值（?A7上清液=0.681[9:05]）。B中上清液倒入废液缸。沉淀物用95%的乙醇浸提[8:56]
3.取6月7号8g大米用乙醇浸提液，离心5min，测吸光度，用酒精稀释8倍后，
?=0.447[10:48]
4.测红曲6号样的吸光度，?A6= 后，?A6=0.401[16:14] 6月9号
1．测红曲7号样的吸光度，?A7= 0.780，?B7=0.021[11:19],实验组稀释2倍后，?A7=0.536[11:24] 5）实验结果（见附录） 6）实验结果分析
影响红曲发酵的因素：1.菌种：应选择生长快，适应性强，产红色素明显的菌株；2.原料：一般选用无粘性的粳米或籼米，其淀粉含量高，营养丰富，且可
0.819，?B6=0.012[16:09],实验组稀释2倍
吸收适量水分。米的含水量对发酵影响很大，起始水分含量低，红曲色素易生成；水分含量高，会抑制色素合成。一般米中含水量以25%-30%为宜；3.补水:红曲霉在生长繁殖过程中，需补充适量的水分，尤其在生长旺盛期补水显得更加重要；4.湿度：空气相对湿度关系到水分的蒸发，对发酵的影响也很大，一般RH控制在85%以上；5.温度：能在20-37℃范围内生长，通常冷却至30℃发酵；6.通气：红曲霉是一种好氧性微生物，因此培养过程中要注意保持良好的通气。鉴于以上这些客观因素每组都相同，因此结果不同可能是主观原因，比如培养基成分漏加，错加，重复加；摇瓶时培养瓶所处的位置；取样时所取菌种的量不同；加酒精浸提的量不同；观察时间和取样时间不同；调pH值时，有的加了乳酸，有的未加，加了的加的滴数不同等等。
（二）丁醇的发酵试验及其气相色谱检测 1）实验原理：
丙丁梭状芽孢杆菌经厌氧发酵将农副产品转化为丁醇和丙酮。
2）实验仪器设备和化学试剂
1、 实验仪器：电子分析天平，手提式蒸汽灭菌锅，自动控制蒸汽灭菌锅，双孔水浴锅，电驴，生物显微镜，恒温培养箱，培养摇床，真空干燥箱，紫外可见分光光度计，离心机，真空泵，真空干燥器，布氏漏斗，蒸发器
2、化学试剂：玉米粉，葡萄糖，玉米浆，硫酸铵，磷酸二氢钾，碳酸钙、氢氧化钠
3）试验菌种名称，培养基 1．菌种：丙酮丁醇梭状芽孢杆菌 2.培养基：发酵培养基
① 玉米培养基 ② 葡萄糖培养基 4）实验步骤
1．丙酮丁醇梭状芽孢杆菌发酵培养基配制
玉米培养基：一大组配2大瓶（每瓶300mL）（共6小组） 每瓶（18g玉米粉+300mL自来水）
电炉煮沸
灭菌：用10层纱布包裹瓶口，牛皮纸、细线密封。121℃，30min。同时每小组放2个50mL试管（用牛皮纸包裹）一起灭菌 2．接种
在无菌操作台上，将种子液上清液倒出，下部细胞搅匀分装。再倒入灭菌好的玉米培养基，于沸水中煮沸2min（热激活），在自来水管下迅速冷却至常温 3．抽真空，培养
接种好的试管一起放入真空干燥器抽真空，然后连同真空干燥器一起放入恒温培养箱中，37℃静置培养。 5月28号
观察丙酮丁醇梭状芽孢杆菌发酵情况：两个试管中都有泡盖部分形成，有气泡产生。
其他组：有些只有气泡，没有泡盖形成，有些组部分形成泡盖 5月29号
1.挑泡盖 【见图六】
两个试管培养基中都有明显泡盖形成，于无菌操作台中将发酵培养基上的泡盖挑出，继续培养。
其他组：所有组都有明显的泡盖形成，统一于无菌操作台挑出泡盖。 2．油镜观察
在无菌操作台上，用接种环挑取试管A底部菌体（勿挑到培养基），涂片于涂有生理盐水的载玻片上，用酒精灯烘干固定，油镜观察【见图七】 5月30号 1．油镜观察
在无菌操作台上，用接种环挑取试管A底部的菌体，涂布滴生理盐水的载玻片上，在酒精灯上烘干固定，染色2min,洗去染液，用油镜观察【见图八】 6月5号
1. 葡萄糖培养基配制
（NH4）葡萄糖18g，2SO4 1.8g 玉米浆3,0g KH2PO4 0.12g 将上述四种用150mL溶解，
CaCO3 1.8g 用150mL水尽量溶解（可在电炉上加热），PH 要求7.0. 滴加了4滴NaOH, 封口，灭菌（一起灭菌的还有空的对照组和空的锥形瓶，都用纱布、牛皮纸盒细线密封）121℃，30min 2．接种培养
在无菌操作台上，将5.30号厌氧发酵A中上清液倒入一空试管，底部的孢子倒入上午灭菌的空锥形瓶里，再将上午灭菌好的葡萄糖培养基倒入装有孢子的锥形瓶中，从中取5mL于离心管中测吸光值（0号样），完后，封口，置于沸水中热激活2min，迅速用冷水冷却，抽真空，放入恒温箱32℃培养 （时间：16:26）
3．测上一条离心管中样液在600nm处的吸光值 α=0.515 4．测葡萄糖消耗量
将上述离心管离心5min，3500rpm，在生物传感分析仪测葡萄糖消耗量 取1mL上清液，加99mL蒸馏水，即稀释100倍，测得葡萄糖含量为47mg/dL 6月6号
1． 将6.5号下午做的丙酮丁醇发酵培养液取样5mL，测吸光值，此为1号样 对照组取5ml，测吸光值。
以蒸馏水为对照， 实验组α=1.310,对照组α=o.285
以对照组为参照。 实验组α=1.029 （时间：10:01） 2．重复上午丁醇发酵试验的取样步骤，制丁醇2号样 （时间15:31） 以蒸馏水为对照， 实验组α=1.742 对照组α=0.240 以对照组为参照。 实验组α=1.469 （时间：15:31） 从实验组中取1ml，加入蒸馏水49ml，测葡萄糖消耗量
测得的葡萄糖含量：第一次：80mg/dL，第二次：78mg/dL （时间：16:56） 6月7号
1．取丙酮丁醇的发酵液5ml，制丁醇3号样 （时间：9:30） 对照组取5ml，测吸光值。
以蒸馏水为对照， 实验组α=0.699，对照组α=0.368 稀释2倍后，实验组α=0.395
对照组α=0.204
以对照组为对照，实验组α=0.331 稀释2倍后，实验组α=0.190 稀释前时间为9:50 稀释后时间为10:02
将实验组离心后，去上清液1ml，加蒸馏水稀释50倍，测葡萄糖含量：第一次60mg/dL
第二次：60mg/dL （ 时间10:32）
2．取丙酮丁醇的发酵液5ml，制丁醇4号样（时间：9:30） 对照组取5ml，测吸光值。
以蒸馏水为对照， 实验组α=0.840，对照组α=0.268 稀释2倍后，实验组α=0.561
对照组α=0.132
以对照组为对照，实验组α=0.651 稀释2倍后，实验组α=0.427 稀释前时间为9:50 稀释后时间为10:02
将实验组离心后，去上清液1ml，加蒸馏水稀释50倍，测葡萄糖含量：第一次67mgdL
第二次：68mg/dL （时间 17:07） 6月8号
1．取丙酮丁醇的发酵液5ml，制丁醇5号样（时间：8:51） 实验组稀释4倍后α=0.416 （时间：9:07）
将实验组离心后，去上清液1ml，加蒸馏水稀释30倍，混合均匀后，测葡萄糖含量：第一次77mg/dL 第二次：79mg/dL （时间9:55） 2．取丙酮丁醇的发酵液5ml，制丁醇6号样（时间：15:51） 实验组稀释8倍后α=0.599（时间：16:09）
将实验组离心后，去上清液1ml，加蒸馏水稀释30倍，混合均匀后，测葡萄糖含量：第一次70mg/dL 第二次：71mg/dL （时间16:44） 6月9号
1．取丙酮丁醇的发酵液5ml，制丁醇7号样（时间：10:46） 实验组稀释8倍后α=0.370（时间：10：51）
将实验组离心后，去上清液1ml，加蒸馏水稀释30倍，混合均匀后，测葡萄糖含量：第一次32mg/dL 第二次：31mg/dL （时间16:35）