al.1990 ，且可能造成高分子质量DNA 降解。在实验中可视情况而定。 4. 琼脂糖凝胶块在TE(pH7.6中4℃可存放数年，如在0.5mol/L EDTA 中可存放更长时间。
5. 一些高压电源并不适合脉冲电场凝胶电泳，因为这些电源设计时均带有保护电路，它可以检测到负载的突然降低并且引发外加电源自动关闭。
6. 由于电压较高，就会产生热量，为了保证温度为14℃，需要一些冷却设备(缓冲液冷却循环器或MiniChiller 。此外，把电泳系统放在一个敞口的冰盒中也可保持恒温。
PFGE （脉冲场凝胶电泳）标准操作规程(SOP
目的：运用PFGE 方法对20Kb 至数Mb 的DNA 进行分子分型
背景知识：这个试验是公认的操作繁琐，至少要2天，而且每一步操作对结果的好坏都有很大影响，因此，一个严格、标准的操作方法是十分十分必要的。
主体内容： 一、胶块的制备
1、在Falcon 2054管上标记样品名称和空白对照，分别加入约2ml 细胞悬 浊液(CSB；
2、在1.5ml eppendorf管上标记好对应样品的名称； 3、在模具上标记好对应样品的名称；
4、用CSB 湿润接种环，从培养皿上刮取适量细菌，均匀悬浊于CSB 中， 用bioMerieux Vitek colorimeter 测其OD 值，并调整至3.6~4.5。如果OD 值大于4.5，加入CSB 稀释；如果OD 值小于3.6，增加菌量提高其浓度。
5、取400μl细菌悬浊液于相应的1.5ml eppendorf管中，置于37℃水浴中孵 育5分钟。将剩余的细菌悬浊液置于冰上直到胶块制备好放在水浴摇床中。 6、从水浴箱中取出eppendorf 管，每管加入20μl蛋白酶K(储存液浓度为 20mg/ml混匀，使其终浓度为0.5mg/ml。
7、制备好1%Seakem Gold：1%SDS，放于56℃水浴箱中。
8、在eppendorf 管中加入400μl的1% Seakem Gold：1%SDS，用枪头轻轻 混匀。
9、将混合物加入模具，避免气泡产生，在室温下凝固10-15分钟。 注意事项：
(1用后的接种环要放在指定的废弃物容器中。 (2细胞悬浊液、蛋白酶K 要置于冰上。
(3在混合细胞悬浊液和1% Seakem Gold：1%SDS时要避免气泡的产生。 (4混合物加入模具时不能产生气泡。
(5在加1% Seakem Gold：1%SDS的过程中1% Seakem Gold：1%SDS要一直放在56℃水浴箱中。
二、细胞的裂解
1、在50ml 的screw-cap tube上做好标记。
2、配制细胞裂解液(CLB：每5ml 细胞裂解液加入25μl蛋白酶 K(20mg/ml，使其终浓度为0.1mg/ml，然后颠倒混匀。
注意：蛋白酶K 要置于冰上，配制好的细胞CLB 也要置于冰上。 3、每个管子加入5ml 蛋白酶K/CLB混合液。
4、如果想使胶块平齐，可以用刀片削去模具表面多余的部分。
(1可重复利用的模具：打开模具，用小铲的宽头部分将胶块移入相应的screw-cap 管中。
(2一次性模具：撕掉模具下面的胶带，用小铲将胶块捅进相应的screw-cap 管中，将模具、胶带、小铲放入废弃物容器中。
5、保证胶块在液面下而不在管壁上。
6、将管子放在54℃水浴摇床中孵育2小时，转速约170转/分钟。 7、将纯水和TE 放在50℃水浴摇床中预热。 三、洗胶块
1、从水浴摇床中拿出screw-cap 管，盖上绿色的screened-cap 。轻轻倒掉 CLB 。在实验台上轻磕管底使胶块落在管底。 注意：
把管倒置在吸水纸上，使管内液体被尽量排除干净。随后的操作中也如此。 2、每管中加入15ml 预热的纯水。
3、确保胶块在液面下而不在管壁或盖子上，放回50℃水浴摇床中，摇10分钟。
4、倒掉水，用纯水再洗一次。、
5、倒掉水，加入15ml 预热的TE ，在50℃的水浴摇床中摇15分钟。
6、倒掉TE ，用TE 重复洗三次，每次10－15分钟。 7、倒掉TE ，加入10ml TE，放在4℃冰箱保存备用。 注意：要确保胶块在液面下而不在管壁或盖子上。 四、胶块内DNA 的酶切
1、在1.5ml eppendorf管上标记好相应的样品及H9812的名称。 2、按照下面的比例配制缓冲液H 的稀释液，混匀。 试剂μl/胶块μl /10胶块 纯水180μl1800μl Buffer D20μl200μl 总体积200μl2000μl 注意：缓冲液要置于冰上。
3、在每个1.5ml eppendorf管中加入200μl缓冲液H 的稀释液。 4、小心从TE 中取出胶块放在干净的培养皿上。
5、用刀片切下2mm 宽的胶块放入1.5ml eppendorf管中。确保胶块在液面下面。将剩余的胶块放回原来的TE 中。
6、用同样的方法处理标准株H9812的胶块。 7、将管子放在37℃水浴中孵育10-15分钟。
8、在用稀释缓冲液孵育的过程中，按照以下的比例配制酶切缓冲液，混匀。 试剂μl/胶块μl /10胶块
纯水175μl1750μl Buffer D20μl200μl 酶(10U/μl5μl50μl 总体积200μl2000μl 注意：
(1将酶置于冰上，用后立即放在－20℃保存。 (2用枪头吸出缓冲液H ，避免损伤胶块。
9、每管加入200μl混合液，轻轻在实验台上磕管子的底部，确保胶块在液面的下面。
10、在37℃水浴中孵育至少2小时。 五、加样
(一 将胶块直接粘在梳子齿上
1、调整梳子的高度，使梳子齿与胶槽的底面相接触。用水平仪调整胶槽使 其水平。
2、从37℃水浴中取出胶块，平衡到室温。 3、用枪头吸出酶切混合液，避免损伤或吸出胶块。 4、每管加入200μl 0.5×TBE 。
5、把梳子平放在胶槽上，把胶块加在梳子齿上。如果用的是10个齿的梳 子，把标准菌株H9812加在第1、5、10个齿上。