将20克SDS 小心加入装有80 ml灭菌纯水的容器中，在35°- 45℃轻轻混匀溶解，定容至100ml 。
5、20 mg/ml 蛋白酶K 储存液*
100 mg Proteinase K 粉末溶于5 ml 灭菌纯水中，混匀，分装在1.5 ml离心管中，每管
500-600 μl ，-20℃保存备用。 6、10X Tris- 0.9 M Tris base (108 g 0.9 M Boric Acid (55 g
0.02 M EDTA, pH 8.0 (40 ml 0.5 M 溶于1000 ml灭菌的纯水中，高压灭菌 注意：如果缓冲液有沉淀生成必须丢弃。 7、Ethidium Bromide(EB*
10 mg/ml EB的储存液用纯水1:10,000 稀释(即100 ml水中加入10 μl 储存液 ，(500ml水中加50ul 。稀释液在丢弃前可以染5-6块胶。
实验试剂
注意：用灭菌的玻璃制品、塑料制品和纯水来制备以下试剂。
1、Tris:EDTA Buffer (TE, pH 8.0*－(10 mM Tris-HCL:1 mM EDTA , pH 8.0 10 ml 1 M Tris-HCL, pH 8.0 2 ml 0.5 M EDTA, pH 8.0
用灭菌的纯水稀释到1000 ml
在E. coli O157:H7, Salmonella and Shigella sonnei, and Campylobacter jejuni PFGE －用TE Buffer 于:
⑴. 溶解1% SeaKem Gold:1% SDS agarose ⑵. 细菌裂解后洗胶块
在L. monocytogenes PFGE －用TE Buffer于: ⑴. 悬浮菌细胞 ⑵. 细菌裂解后洗胶块
2、Cell Suspension Buffer (CS－100 mM Tris-HCl:100 mM EDTA, pH 8.0 用于E. coli O157:H7, Salmonella, and Shigella sonnei PFGE 10 ml 1 M Tris-HCl, pH 8.0 20 ml 0.5 M EDTA, pH 8.0 用灭菌的纯水稀释到100 ml
3、Cell Lysis Buffer(CLB－50 mM Tris-HCl:50 mM EDTA, pH 8.0 + 1% N-Lauroyl-Sarcosine,
Sodium salt (Sarcosyl，0.1mg/ml Proteinase K (用前再加入
用于裂解E. coli O157:H7, Salmonella, Shigella sonnei,和 Campylobacter jejuni 25 ml 1 M Tris-HCl, pH 8.0
50 ml 0.5 M EDTA, pH 8.0 50 ml 10% Sarcosyl 3
用灭菌的纯水稀释到500 ml，每5 ml CLB加入25μl 蛋白酶K 储存液(20 mg/ml，使其终浓度为0.1 mg/ml.
5、0.5X TBE Buffer
200 ml 5X TBE用纯水稀释到2000 ml或 100 ml 10X TBE用纯水稀释到2000 ml
注意：用来稀释5X TBE、10X TBE的纯水可以不灭菌。 6、SeaKem Gold Agarose －做胶块； －电泳胶
报价 seakem gold 琼脂糖 25g 货号50111，1567元人民币。可打9折。 125g 货号 50150 ，BMA ， 6422元。 7、无菌的超纯水
8、蛋白酶K 粉末或蛋白酶K 溶液(20mg/ml 6、限制性内切酶
E. coli O157:H7, Salmonella, Shigella sonnei －XbaI, ，AvrII (同切限制内切酶BlnI ，SpeI (NotI可用于S. sonnei；但不用于E. coli O157:H7 L. monocytogenes，－AscI, ApaI
Campylobacter jejuni, C. coli，－SmaI, KpnI 器 材
1、Dade Microscan Turbidity Meter Spectrophotometer
bioMérieux Vitek Colorimeter －调整细胞悬浊液的浓度 2、微波炉－溶胶 3、水浴摇床
－裂解胶块中的细胞(54℃ －用水和TE(50℃ 洗胶块
4、56℃水浴箱－平衡和保温熔化的胶 5、25℃, 30℃, 37℃水浴箱－酶切
6、50℃水浴箱－加热用于洗胶块的水和TE ，酶切 7、离心机。
8、最少需要两个水浴箱－一个平衡到56℃，另一个到37℃。如果需要，温度可以上下调动。Listeria PFGE中胶块的ApaI 酶切需30℃水浴。
耗 材
1、无菌的Falcon 2054(12-mm x 75-mm或Falcon 2057(17-mm x 100-mm－用于细胞悬浊液的制备
基因公司代理 ，
2、无菌的聚酯纤维或棉签－用于从琼脂平板上刮取细菌
3、无菌的枪头或巴斯得吸管
4、无菌的1.5 ml离心管－用于混合细胞悬浊液和胶、酶切
5、无菌的50 ml screw-cap tubes 或50 ml Oak Ridge tubes －用于装胶块， 6、Green Screened Caps(Bio-Rad 1703711－洗胶块时用伯乐公司 货号 170-3711。
7、模具
－10孔(可重复利用的，2cm x 1cm x 1.5mm －50孔(一次性的，1.5mm x 10mm x 5mm
8、单刃剃须刀、手术刀、平皿或类似物－用于切胶块 9、无菌的一次性皮氏平皿或大的玻璃载物片－用于切胶块 10、一端宽、一端窄的平铲
药铲，生工等公司的实验室耗材部分有。 11、标准胶槽(14 x 13cm的框和平板 12、10孔的梳子(14 cm长，1.5 mm宽
13、15孔的梳子(21 cm长，1.5 mm宽 －Bio-Rad 170-3627 14、胶水平台
15、盛放EB 染液的塑料容器
16、70％异丙醇、5%－10%的漂白剂或其它合适的消毒剂 17、各种体积的无菌烧瓶或瓶子(50 ml - 2000 ml