6、用吸水纸的边缘吸去胶块附近多余的液体，在室温下风干约3分钟。 7、把梳子放入胶槽，确保所有的胶块在一条线上，并且胶块与胶槽的底面 相接触。从胶槽的下部中央缓慢到入100ml 熔化的在55℃－60℃平衡的1％SKG 。避免气泡的生成；如果有，用枪头消除。在室温下凝固30分钟左右。
8、记录加样顺序。
(二 将胶块直接加在加样孔内
1、调整梳子的高度，使梳子齿与胶槽的底面有一定间距。用水平仪调整胶 槽使其水平。
2、把梳子放入胶槽，从胶槽的中央缓慢倒入100ml 熔化的在55℃－60℃平 衡的1％SKG 。避免气泡的生成；如果有，用枪头消除。在室温下凝固30分钟左右。
3、小心拔出梳子。
4、从37℃水浴中取出胶块，平衡到室温。 5、用枪头吸出酶切混合液，避免损伤或吸出胶块。 6、每块胶加入200μl 0.5×TBE 平衡。 7、用小铲将胶块加入加样孔。 8、用溶化的胶封闭加样孔。 注意：
a 可以在加样孔中加入0.5×TBE ，利用毛细作用将胶块沉在加样孔底，尽量避免气泡形成。 b 记录加样顺序。
六、电泳
1、确保电泳槽是水平的。如果不水平，调整槽底部的旋钮。注意：不要触 碰电极。
2、加入2.2L 0.5×TBE, 关上盖子。
3、打开主机和泵的开关，确保泵设在－70(这时缓冲液的流速约1L/分钟 和缓冲液在管道中正常循环。
4、打开冷凝机，确保预设温度在14℃(缓冲液达到该温度通常需要20分钟左右 。
5、打开胶槽的旋钮，取出凝固好的胶，用吸水纸清除胶四周和底面多余的胶，小心的把胶放入电泳槽，关上盖子。
6、设置电泳参数。
7、记录电泳初始电流(通常120－145ma 。 8、结束电泳：关机顺序为：冷凝机－泵－主机。 七、图像的获取
1、取出胶，放在盛放400ml EB溶液的托盘内(EB储存液浓度为10mg/ml， 1：10,000稀释，即在400ml 水中加入40μl储存液 。 注意：
EB 是致畸剂。储存在棕色瓶中的EB 稀释液可以用3-5次。废弃的EB 溶液应妥善处理。
2、将托盘放在摇床上摇25-30分钟。
3、放掉电泳槽中的TBE ，用1-2L 纯水清洗电泳槽，并倒掉液体。 4、戴上手套将用后的EB 溶液小心倒入做有标记的棕色瓶中，在托盘中加 入400-500ml 纯水，放在摇床上脱色60-90分钟，如果可能每20-30分钟换一次纯水。
5、用Gel Doc 2000拍摄图像。
注意：如果背景干扰分析，可进一步脱色30-60分钟。 6、转换成*.1sc文件用于处理分析。 八、数据的分析 图像的读取
电泳图像通常用BIO-RAD 的GEL DOC 2000或其它成像系统来获取。其它可以替代的成像设备，只要具有CCD 相机，可以提供IBM 兼容的未压缩的TIFF 图像，且分辨力≥768 x 640像素，能够用BioNumerics software (Applied Maths, Inc.软件与PulseNet 数据库中其它图像进行对比分析，也可以运用。
运用GEL DOC 2000的简单说明： QUANTITY ONE软件
1、点击QUANTITY ONE按钮打开该软件。 2、点击菜单FILE →GEL DOC。 注意：需要10－20秒打开窗口。
3、打开抽屉，把胶放在台板上。胶已经经过EB 或GEL-STAR 染色并经过充分脱色。用黑色胶框把胶放在合适的位置。关上抽屉门。
图像的获取
1、按下EPI-LIGHT 按钮打开白光。
2、把胶放在调准网格线内，使胶的加样孔和调准网格线的最上面一条蓝线对齐。
3、保证调准网格线和过饱和按钮被选中。
4、改变镜头的MIDDLE RING以调整图像的大(顺时针 小(逆时针 ，使图像占据整个窗口。如果需要，挪动胶在台板上的位置。胶的加样孔、下边界和左右边界在屏幕上都应该可以看到。
5、如果需要，按BOTTOM RING以调整相机的焦距。
注意：焦距的调整只可以偶尔用之，不可用于每一块胶。可以用尺子帮助调整焦距。
6、按下EPI-LIGHT 关掉白光，按下UV 按钮打开透射紫外光。 7、点击AUTO EXPOSE以确定大概的曝光时间。当图像出现在窗口时，AUTO EXPOSE自动关闭而MANUAL EXPOSE被激活。
8、点击MANUAL EXPOSE 的↑↓按钮，调整曝光时间。而调整饱和度时，点击箭头或TURN THE TOP RING以降低光量(如果图像过饱和，图像显现红色 。
注意：如果出现对话框“曝光可以在0.03－360秒之间波动”，则需通过改变相机的像素以调整饱和度。调整饱和度使样品条带没有红色很重要，因为这会影响BIONUMERICS 软件对胶图像的分析。而胶加样孔的过饱和属于正常现象。
9、当图像调整的比较满意时，按下FREEZE 按钮停止曝光过程。按下UV 按钮关掉紫外光(如果开门时UV 灯打开，它会自动关闭 。
图像的输出
1、保存图像(*.1sc：FILE →SAVE 。确保选择正确的路径。文件默认的名字包括日期、时间和用户。可以改变文件名。
2、打印文件：FILE →PRINT →VIDEO PRINT，也可以直接点击屏幕上的PRINT 按钮。
3、转为*.TIFF格式：FILE →EXPORT TO TIFF IMAGE→EXPORT ，选择正确的路径。
4、关闭QUANTITY ONE程序：FILE →EXIT 。
5、取出胶放在染色盒内。用软麻布擦掉台板表面多余的液体，用水或70％的异丙醇洗干净。 试剂储存液的配制
1、
121.1 g Tris base溶于650-700 ml纯水中，加入80 ml 6 N HCl*，在室温下调pH 至8.0，加水终体积至1000 ml，高压灭菌。
或者157.6 g Tris-HCl 溶于800 ml 纯水中，在室温下调pH 至8.0，加水终体积至1000 ml ，高压灭菌。
2、10 N NaOH*
400 g NaOH小心溶于800 ml纯水中，冷却到室温，加灭菌的纯水使终体积至1000 ml。 3、0.5 M EDTA, pH 8.0*
溶于800 ml纯水中，加入50ml 10N NaOH调pH 至8.0，加水终体 积至1000 ml，分成数份，高压灭菌。
4、20% Sodium Dodecyl Sulfate (SDS*十二烷基硫酸钠－用于E. coli O157:H7, Salmonella and Shigella sonnei, PFGE