酵为醋酸？__________，说明原因：____________________________________________。
为鉴定蓝莓果醋是否酿制成功，除可以通过观察菌膜、尝、嗅之外，还可以通过检测____________________作进一步的鉴定。
解析：(1)果胶酶可将蓝莓果汁中的果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸，使浑浊的果汁变得澄清。根据题干信息，蓝莓花青素在中性或碱性溶液中不稳定，故应用酸性溶液提取，考虑到食品添加剂的安全性问题，适宜选用柠檬酸＋乙醇作为提取剂；花青素在60 ℃以下热稳定性较好，真空干燥可使水的沸点降低，从而避免温度过高导致花青素分解。(2)酿制蓝莓酒时先通气有利于酵母菌大量繁殖。通常不需对蓝莓进行严格的消毒处理，是因为绝大多数微生物无法适应缺氧、呈酸性这一环境，生长受抑制。在糖源不足的情况下，醋酸菌在有氧条件下可以将果酒发酵成果醋。醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30～35 ℃，所以酿制成功的蓝莓果酒如果暴露在空气中会导致醋酸菌大量生长而逐渐出现醋酸味。(3)如果果汁中已含有醋酸菌，在果酒发酵旺盛时，醋酸菌不能将果汁中的糖发酵为醋酸，因为果酒发酵是在缺氧环境中进行的，而醋酸菌是好氧菌，果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长。果醋是否酿制成功可以通过观察菌膜、尝、嗅，还可以检测发酵前后的pH。
答案：(1)半乳糖醛酸 D 避免干燥时温度过高导致花青素分解 (2)让酵母菌在有氧条件下大量繁殖 绝大多数微生物无法适应这一环境而受抑制 缺少 醋酸菌是好氧细菌，最适生长温度为30～35 ℃(夏天温度较高)，导致醋酸菌大量生长产生醋酸 (3)不能 果酒发酵时的缺氧环境能抑制醋酸菌生长 发酵前后的pH
第二讲微生物的培养和利用
[感性认知] [理性归纳]
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1.据某微生物培养基的配方表回答下列问题 编号 成分 ① (NH4)2SO4 ② KH2PO4 ⑤ H2O 100 mL (2)无菌技术： 1.图解微生物实验室培养的三个方面(1)培养基： ③ FeSO4 ④ CaCl2 含量 0.4 g 4.0 g 0.5 g 0.5 g (1)此培养基按物理性质划分属于液体培养基，因为没有凝固剂(如琼脂)；按功能划分属于选择培养基，因为没有碳源，只有自养型微生物才能生长(利用空气中的CO2)。 (2)此培养基含有的微生物的营养成分包括水、无机盐和氮源三类，若加入氨基酸，则它可充当的营养成分包括碳源、氮源和生长因子。 (3)若要观察微生物的菌落特征，培养基中应添加的成分(3)大肠杆菌的纯化培养： (一) 是凝固剂(琼脂)。 微生物的实验室培养 (1)请用文字和箭头写出正确的倒平板操作流程：丙→乙→甲→丁。 (2)甲、乙、丙中的灭菌方法是灼烧灭菌。 (3)丁中的操作需要等待平板冷却凝固才能进行。 3.下面是采用纯化微生物培养的两种接种方法，接种后培养的效果图，请完成下列问题 (4)若用该培养基来分离尿素分解菌，应除去表中①成分(填表中序号)，应加入尿素和不含氮元素的有机物。 2.下图是倒平板的操作，请据图填空 2.谨记易错的三个内容 (1)培养基中营养物质的确定方法： ①自养型微生物所需的主要营养物质是无机物，碳源可来自大气中的CO2，氮源可由含氮无机盐提供。 ②异养型微生物所需的营养物质主要是有机物，即碳源必须由含碳有机物提供，氮源也主要由有机物提供，部分异养型微生物也可以利用无机氮源。 (2)选择无菌技术的原则： ①考虑无菌技术的效果：灭菌的效果比消毒要好。 (1)获得图A效果和图B效果的接种方法分别是稀释涂布平板法、平板划线法。 (2)某同学在纯化土壤中的细菌时，发现培养基上的菌②考虑操作对象的承受能力：活体生物材料、操作者的手等只能采用消毒，而不能用灭菌。 (3)纯化大肠杆菌的两种方法的异 17
落连成一片，最可能的原因是什么？应当怎样操作才可避免此种现象。 答案：最可能的原因是菌液浓度过高或划线时在划下一区域前未将接种环灭菌。采取的措施是增大稀释倍数或每次划新区域前先将接种环灭菌。 同： ①相同点：平板划线法和稀释涂布平板法都能获得单细胞菌落。 ②不同点：平板划线法不能对微生物计数，而稀释涂布平板法能对微生物计数。 [感性认知] [理性归纳]
4.连线以下几种选择培养基和鉴别培养基及其应用 3.掌握微生物分离与计数的两个实例 (1)土壤中分解尿素细菌的分离： (二) 微生物的分离与计数 5.判断下列叙述的正误 (1)选择培养基可以鉴定某种微生物的种类(×) (2)从物理性质的角度看，选择培养基多属于固体培养基(√) (3)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√) (4)筛选能分解尿素的细菌所利用的培养基中，尿素是唯一的氮源(√) (2)纤维素分解菌的筛选： 18
(5)分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的pH降低(×) (6)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌(×) (7)纤维素是构成植物细胞壁的主要成分，在4.辨析三个易错点 (1)纤维素分解菌的选择培养基中并不只有纤维素一种碳源。 (2)纤维素分解菌的选择培养基上生长的并不只是纤维素分解菌。 (3)纤维素分解菌菌落周围的透明圈的大小与纤维素分解纤维素酶的作用下，纤维素可以水解成葡萄糖菌分解纤维素的能力呈正相关。 (√) (8)在筛选能分解纤维素的细菌的实验中，选择培养的目的是增大样品中目的菌株的浓度(√) (9)刚果红可以与纤维素形成透明复合物，所以可通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌(×) (10)刚果红染色法只能在培养微生物的时候加入(×)
培养基及微生物的纯化培养技术 命题点1 培养基的成分、功能及制备 1．下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( ) A．操作顺序为计算→称量→溶化→倒平板→灭菌 B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板 D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置
解析：选A 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算→称量→溶化→灭菌→倒平板，其顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。待培养基冷却到50 ℃左右，并且处于溶化状态时开始倒平板，平板冷却凝固后才能倒置。
2．(2016·全国丙卷)某同学用新鲜的泡菜滤液为实验材料分离纯化乳酸菌。分离纯化所用固体培养基中因含有碳酸钙而不透明，乳酸菌产生的乳酸能溶解培养基中的碳酸钙。回答下列问题：
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(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用__________对泡菜滤液进行梯度稀释，进行梯度稀释的理由是____________________________________________________________。
(2)推测在分离纯化所用的培养基中加入碳酸钙的作用有______________________和____________________。分离纯化时应挑选出________________的菌落作为候选菌。
(3)乳酸菌在－20 ℃长期保存时，菌液中常需要加入一定量的________________(填“蒸馏水”“甘油”或“碳酸钙”)。
解析：(1)分离纯化乳酸菌时，首先需要用无菌水对泡菜滤液进行梯度稀释，这样既可避免杂菌污染，又可将乳酸菌分散成单个细胞，以便在培养基表面形成单个菌落。(2)乳酸的积累影响乳酸菌的增殖，加入碳酸钙可以中和乳酸菌代谢(无氧呼吸)过程中产生的乳酸，另外，乳酸和碳酸钙反应，进而导致碳酸钙分解形成透明圈，有利于乳酸菌的鉴别和分离。(3)对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。在3 mL的甘油瓶中，装入1 mL甘油后灭菌。将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。
答案：(1)无菌水 泡菜滤液中菌的浓度高，直接培养很难分离得到单菌落 (2)鉴别乳酸菌 中和产生的乳酸(或酸) 具有透明圈 (3)甘油
拓展·归纳|选择培养基四种常见制备方法或实例 方法一 加入某些特定物质 原理 依据某些微生物对某些物质的抗性，在培养基中加入某些物质，以“抑制”不需要的微生物，“促进”所需要的微生物生长 培养基中加入高浓度食盐时可抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球举例 菌的生长，从而可将该菌分离出来 在培养基中加入青霉素时可抑制细菌、放线菌的生长，从而分离得到酵母菌和霉菌 方法二 改变培养基营养成分 培养基中缺乏氮源时 培养基中若缺乏有机碳源 可分离自生固氮微生物，非自生固氮微生物因缺乏氮源而无法生存 则异养微生物无法生存，而自养微生物可利用空气中的CO2制造有机物生存 方法三 利用“特定成分”分离 当石油是唯一碳源时 可抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，从而分离出能消除石油污染的微生物 方法四 通过某些“特殊环境”分离 在高盐可分离耐盐菌，其他菌在盐浓度高时易失水而不能生存 20