量下降 (7)腐乳、果醋 析出豆腐中的水分，使豆腐块变硬，同时抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质 卤汤
第二讲
微生物的培养与利用
知识点一 微生物的实验室培养 1．培养基的成分和分类
(1)
??固体培养基：含凝固剂
(2)分类?
??液体培养基：不含凝固剂
2．连线无菌技术的类型、方法及对象
3．纯化大肠杆菌
(1)制备固体培养基的流程：
计算
称量溶化
灭菌倒平板 ??平板划线法
(2)纯化方法?
?稀释涂布平板法?
知识点二 土壤中分解尿素细菌的分离和计数
(1)菌种筛选：使用尿素是唯一氮源的选择培养基培养。
(2)统计菌落数目：常用方法有稀释涂布平板法、显微镜直接计数法。
(3)细菌分离与计数的实验流程：土壤取样→配制培养基→微生物的培养与观察→细菌的计数。
知识点三 分解纤维素的微生物的分离
1．纤维素酶
(1)组成：一种复合酶，它至少包括三种组分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。 (2)作用：纤维素――→纤维二糖――→葡萄糖。 C酶苷酶
X
C1酶葡萄糖
2．筛选方法
(1)方法：刚果红染色法，即通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 (2)培养基：以纤维素为唯一碳源的选择培养基。 3．实验流程
土壤取样：富含纤维素的环境
选择培养：用选择培养基培养，以增加纤维素分解菌的数量 梯度稀释
涂布平板：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上
挑选产生透明圈的菌落：产生纤维素酶的菌落周围出现透明圈
一、理解运用能力 判断下列叙述的正误。
(1)根据物理状态的不同，培养基只有液体培养基和固体培养基两种类型(×) (2)培养基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分(√)
(3)在配制培养基时，除满足营养需求外，还应考虑pH、O2及特殊营养物质的需求(√) (4)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素(√)
(5)筛选分解尿素的细菌应以尿素作为培养基中的唯一氮源(√) (6)统计样品中的活菌一般用平板划线法(×)
(7)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，若指示剂变蓝，则说明筛选到分解尿素的细菌(×)
(8)刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物(√) (9)纤维素酶只包括三种组分：C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶(×)
(10)筛选分解纤维素的微生物的培养基中是以纤维素为唯一碳源的选择培养基(√) 二、图表分析能力
下表为筛选分解尿素细菌的培养基，据此回答问题：
KH2PO4 Na2HPO4 MgSO4·7H2O 1.4 g 2．1 g 0．2 g 葡萄糖 尿素 琼脂 10．0 g 1．0 g 15．0 g 将上述物质溶解后，用自来水定容到1 000 mL (1)在该培养基中尿素的作用是什么？琼脂的作用是什么？ 答案：尿素作唯一氮源，起选择作用；琼脂作为凝固剂，用于制备固体培养基。 (2)对筛选出的细菌要进行进一步的鉴定，如何鉴定？
答案：在培养基中再加入酚红指示剂，培养细菌后，pH升高，指示剂将变红。
[理清脉络]
考点一|培养基及微生物的纯化培养技术
1．培养基的种类 (1)按物理状态分类： 培养基种类 液体培养基 固体培养基 (2)按功能分类： 种类 制备方法 原理 依据某些微 选择培 养基 培养基中 加入某些 化学物质 生物对某些 物质的特殊 需求或抗性 而设计 用途 从众多微 生物中分 离所需的 微生物 举例 加入青霉 素分离得 到酵母菌 和霉菌 特点 不加凝固剂 加凝固剂 (如琼脂) 用途 工业生产 微生物分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏 培养基中 鉴别培 养基 加入某种 指示剂或 化学药品 2.微生物的纯化培养 方法 平板划线法 (1)接种环的灼烧： 产生特定的 颜色或其他 变化 鉴别不同 种类的微 生物 用伊红— 美蓝培养 基鉴别大 肠杆菌 稀释涂布平板法 (1)稀释操作时：每支试管及其中的9 mL水、移液管等均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰1～2 cm处 (2)涂布平板时： ①涂布器用体积分数为70%酒精消毒，取出时，让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃 ②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精 ③酒精灯与培养皿距离要合适，移液管管头不要接触任何物体 ①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物 ②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端 ③划线结束后：杀死残留菌种，避免注意事项 污染环境和感染操作者 (2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种 (3)划线时最后一区域不要与第一区域相连 (4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破 [典例1] (2014·扬州测试)下图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是( )
A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上
C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数
[解析] 在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。
[答案] C
1．消毒和灭菌的辨析
条件 结果 常用方法 煮沸消毒法 较为温和的消毒 物理或化学方法 仅杀死物体表面或内部的部分对人体有害的微生物 化学药剂 消毒法 灼烧灭菌法 强烈的理化因素 杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 干热灭菌法 高压蒸汽 灭菌法 2．并非所有生物所需的营养物质都相同 (1)微生物需要的营养成分有水、无机盐、碳源、氮源，有些微生物还需要特殊营养物质，如生长因子。
(2)在人和动物中，营养物质包括水、无机盐、糖类、脂质、蛋白质、维生素六类。 (3)在植物中，营养物质包括矿质元素、水、二氧化碳三类。 [针对练习]
高考命题常从以下角度设置陷阱
(1)从各种相近的选项中直接筛选消毒或灭菌的方法。 (2)给定操作对象，据此选择合适的消毒、灭菌方法。 1．除了高温加热以外，其他灭菌方法还有( ) A．紫外线照射 C．用保鲜膜密闭
B．真空包装 D．添加防腐剂
巴氏消毒法 应用范围 日常用品 不耐高温的液体 用酒精擦拭 双手，用氯 气消毒水源 接种工具 玻璃器皿、 金属工具 培养基及容 器的灭菌 灭菌 解析：选A 灭菌是使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物(包括芽孢和孢子)。真空包装、添加防腐剂、用保鲜膜密闭都只起到了抑菌作用，而紫外线照射使细菌的蛋白质变性，核酸受破坏，是灭菌方法。
2．细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( )
A．接种环、手、培养基
B．高压锅、手、接种环 D．接种环、手、高压锅
C．培养基、手、接种环
解析：选C 一般说来灭菌是指彻底杀灭微生物使其永远丧失生长繁殖的能力，对于培养基、操作器皿和接种环等都需要灭菌。消毒仅指杀死物体表面或内部一部分对人体有害的