《饲料分析与饲料质量检测技术》课程实验指导
《饲料分析与质检》课程实验
教学实验进度安排
时 间 组 别 实 验 内 容 饲料中真蛋白质的测定 蛋白质溶解度的测定 饲料中钙含量的测定 饲料中磷含量的测定 饲料中植酸磷的测定 油脂酸价的测定 油脂过氧化值的测定 饲料离体消化率的测定 动物蛋白质掺假的鉴别 （显微镜检测技术） 实验十 11-1 11-2 实验十一 实验十二 颗粒饲料稳定性、悬浮性测定 配合饲料 鱼粉质量的评判 鱼油品质的评判 待测样品 待测样品 2 6 4 2 样 品 鱼 粉 豆 粕 鱼 粉 豆 粕 豆 粕 鱼 油 鱼 油 鱼 粉 鱼 粉 学 时 3 2 3 2 2 2 3 2 4 10-27 实验一 10-28 实验二 实验三 实验四 10-29 实验五 实验六 10-30 实验七 实验八 实验九 10-31 实验十三 饲料分析与检测实验室的建制 实验地点：30教学楼102、215 注意：1、该实验为开放性实验（每天早中晚以及周末）； 2、每个实验完成后需要及时上交实验原始记录。
实验要求：操作规范，仔细观察，认真记录，准确测定，认真分
析实验数据。
2014-10-26
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《饲料分析与饲料质量检测技术》课程实验指导
实验一、饲料中真蛋白质的测定
一、实验目的
饲料中蛋白质含量是判定饲料营养价值的一项重要指标，饲料中粗蛋白质包括真蛋白质和非蛋白质两部分含氮物质，后者主要包括游离氨基酸、硝酸盐、氨等，故不能反映出饲料蛋白质对动物的真正营养价值。通过对饲料真蛋白的测定，评价饲料原料如鱼粉等是否掺入非蛋白氮，以保证原料的质量和配合饲料的营养质量。
真蛋白质，也叫纯蛋白质，是指由氨基酸合成的一类高分子化合物。 二、实验原理
蛋白质是含氮的有机化合物。蛋白质与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量可计算得样品之氮含量，再乘以一定的换算系数（6.25），即粗蛋白质含量。含氮量*6.25=蛋白含量
蛋白质在一定碱性条件下，能与重金属盐类发生盐析作用而析出沉淀，此沉淀物不溶于热水，而非蛋白氮则易溶于水。用热水洗沉淀，将水溶性含氮物洗去，剩下的沉淀物再用凯氏定氮法测定，得出真蛋白质的含量。
2 CH CH NHCOOH+13HSO
3
2
2
4 →
3
( NH)SO+6CO+12SO+16H O …….. 消化
42
4
2
2
2
(NH)SO+2NaOH → 2NH+2HO+NaSO
423
4
2
2
4
HBO+NH → NHHBO
3
3
4
2
3
…….蒸馏 …….滴定
NHHBO+HCl → NHCl+HBO
4
2
3
4
3
3
三、试剂及配制
（1）100g/L硫酸铜溶液：10g硫酸铜（CuSO4.5H2O）溶于100mL水中。 （2）25g/L氢氧化钠溶液：2.5g氢氧化钠溶于100mL水中。 （3）10g/L氯化钡溶液：1g氯化钡（BaCl2.H2O）溶于100mL水中。 （4）2mol/L盐酸溶液
（5）硼酸吸收液：10g/L硼酸溶液 1000ml，加入1g/L甲基红乙醇溶液7ml，与1g/L溴甲酚绿乙醇溶液 10 ml， 40 g/LNaOH溶液0.5ml，混合。
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（6）混合指示液：1g/L甲基红乙醇溶液与5g/L溴甲酚绿乙醇溶液，等体积混合。 溴甲酚绿，0.5%乙醇溶液配置： 溴甲酚绿0.125g+25ml乙醇。 甲基红，1%乙醇溶液配置：甲基红0.025g+25ml乙醇。
（7） 盐酸标准溶液：邻苯二甲酸氢钾法标定，按GB/T601制备。 0.02mol/L盐酸标准溶液：1.67ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。 0.1mol/L盐酸标准溶液：8.3ml盐酸，分析纯，注入1000ml蒸馏水中。 其他试剂同粗蛋白测定相同。 四、测定步骤
试样的处理：准确称取试样1g（精确到0.1mg），置于200ml烧杯中，加蒸馏水50ml煮沸，加入100g/L硫酸铜溶液20ml和25g/L氢氧化钠溶液20ml，边加边搅拌，放置1h以上或静置过夜，沉淀物以中速定性滤纸过滤，用60-80℃热水反复洗涤沉淀5-6次，直至滤液无SO42- 为止（取10g/L氯化钡溶液5滴和2mol/L盐酸1滴检查滤液，至不生成白色沉淀为止）。将沉淀与滤纸包好，放在65℃烘箱干燥2h。
试液的消化：将烘干的试样连同滤纸一起放入凯氏烧瓶中, 加入硫酸铜0.4g,无水硫酸钾6g, 与试样混匀，再加浓硫酸10ml和2粒玻璃珠，在电炉上消化直至溶液呈透明的蓝绿色。以下操作同粗蛋白质的测定。
空白的测定：除不加试样外，其余操作同粗蛋白质的测定。
五、结果计算
真蛋白（%）= (V1-V2)×C×0.0140×6.25×100m×V′/V
式中：V1—滴定试样时所需标准溶液的体积，ml； V2—滴定空白时所需标准溶液的体积，ml；
C—盐酸标准溶液的浓度，mol/L； V—试样分解液的总体积，ml；
V′—试样分解液蒸馏用体积，ml；
0.0140—每毫克当量氮的克数（1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数）； m：样品的质量（体积），g（ml）； 6.25—氮换算成蛋白质的平均系数。
蛋白质中氮的含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为 5.30。
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实验二、饲料钙的测定（乙二胺四乙酸二钠法）
一、实验目的：
通过对饲料中钙含量的测定，保证饲料原料和配合饲料的营养质量 二、实验原理：
将试样中有机物破杯，钙变成溶于水的离子，用三乙醇胺、乙二胺、盐酸羟胺和淀粉溶液消除干扰离子的影响，在碱性溶液中以钙黄绿素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液络合滴定钙，可快速测定钙的含量。
三、实验试剂 实验用水应符合GB/6682 中三级用水规格，使用试剂除特殊规定外均为分析纯。 盐酸羟胺。 三乙醇胺。 乙二胺。
盐酸水溶液，1+3。
氢氧化钾溶液(200g/L)：称取20g 氢氧化钾溶于100mL 水中。
淀粉溶液(10g/L)：称取1g 可溶性淀粉入200mL 烧杯中，加5mL 水润湿，加95mL 沸水搅拌，煮沸，冷却备用(现用现配)。 孔雀石绿水溶液( 1g/L)。
钙黄绿素-甲基百里香草酚蓝指示剂：0.10g 钙黄绿素与0.10g 甲基麝香草酚蓝与0.03g 百里香酚酞、5g 氯化钾研细混匀，贮存于磨口瓶中备用。
钙标准溶液(0.001g/mL)：称取2.497g 至105℃～110℃干燥3h 的基准物碳酸钙，溶于40mL 盐酸水溶液(1+3)中，加热赶除二氧化碳，冷却，用水移至1000mL 容量瓶中，稀释至刻度。
乙二胺四乙酸二钠(EDTA)标准滴定溶液：称取3.8gEDTA 入200mL 烧杯中，加200mL水，加热溶解冷却后转至1000mL 容量瓶中，用水稀释刻度。 四、测定步骤
称取试样2g～5g 于坩埚中，精确至0.0002g，在电炉上小心炭化，再放入高温炉于550 ℃下灼烧3h(或测定粗灰分后连续进行)，在坩埚中加入10mL 盐酸溶液和浓硝
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酸数滴，小心煮沸，将此溶液转入100mL 容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
准确移取试料分解液5mL～25mL(含钙量2mg～25mg)。加50mL 水，加10mL 淀粉溶液、2mL 三乙醇胺、1mL 乙二胺、1 滴孔雀石绿，滴加氢氧化钾溶液至无色，再过量10mL， 加0.1g 盐酸羟胺(每加一种试剂都须摇匀)，加钙黄绿素少许，在黑色背景下立即用EDTA 标准滴定溶液滴定至绿色荧火消失呈现紫红色为滴定终点。同时做空白实验。
附：高锰酸钾法
草酸铵定量沉淀，用高锰酸钾法间接测定钙的含量。实验步骤包括甲基红指示剂和高锰酸钾标准溶液的配制、标定，饲料的选取和制备，将得到的饲料样本称取3-5g于坩埚中，采用干法将其分解，得到分解液；准确移取分解液10-20ml于烧杯中，加蒸馏水100ml，指示剂2滴，滴加氨水至溶液成橙色。再加盐酸使溶液变成红色，小心煮沸。缓慢加入草酸铵10ml，放置过夜，生成沉淀；滤纸过滤沉淀，将得到的沉淀连同滤纸一起转入原烧杯，加硫酸10ml，蒸馏水50ml，加热，用高锰酸钾标准液滴定，同时进行空白测定。 五、结果计算
X=100T×V0×V2/ (V1×m) 式中：X——以质量分数表示的钙含量，%;
T——EDTA 标准滴定溶液对钙的滴定度，g/mL; V0——试样分解液的总体积，mL;
V1——分取试样分解液的体积，mL;
V2——试样实际消耗EDTA 标准滴定溶液的体积，mL
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