《饲料分析与饲料质量检测技术》课程实验指导
实验三、饲料磷的测定
一、实验目的：
通过对饲料中总磷的测定，保证饲料原料和配合饲料的营养质量。 二、实验原理：
将试样中的有机物破坏，使磷游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的磷钼黄〔（NH4）3PO4VO3.16MoO3〕，在波长420nm下进行比色测定。 三、实验试剂：
钒钼酸铵显色剂：称取偏钒酸铵1.25克，加浓硝酸250毫升。另取钼酸铵25克，加蒸馏水400ml加热溶解，冷却后，将此溶液倒入上溶液，加蒸馏水定容至1000ml，避光保存。
磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1小时，在干燥器中冷却后称0.2195克，溶于蒸馏水中，转入1000ml容量瓶中，加浓硝酸3ml，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即成50ug/ml的磷标准溶液。 四、 实验步骤
1、试样分解（干法）：主要适用于含有有机物的饲料和原料。称取2～5g试样放入已坩埚中，准确至0.0002g，在电炉上炭化至无烟为止，再放入高温炉中，在550℃±20℃温度下灼烧3小时，取出冷却，在坩埚中加入10mL 盐酸溶液和浓硝酸数滴，小心煮沸10分钟，将此溶液转入100mL 容量瓶中，冷却至室温，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，为试样分解液。
2、标准曲线的绘制：准确移取磷标液（50ug/ml）0、1.0、2.0、5.0、10.0、15.0 mL于50 mL容量瓶中，各加钒钼酸铵显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置10分钟以上，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 3、试样的测定：准确移取试样分解液1～10 ml（含磷量50～750微克）于50 ml容量瓶中，加入钒钼酸铵显色剂10 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，放置10分钟以上，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测得试样分解液的吸光度。用标准曲线查得试样分解液的含磷量。
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五、结果计算
磷含量（％）＝(a×10-6)/m × V/V1
a：由标准曲线查得的试样分解液磷含量，ug/50 mL； V：试样分解液的总体积，mL； m：试样的质量，g
V1：试样测定时移取试样分解液的体积，mL。
附 饲料中植酸磷的测定（三氯乙酸法） 1、原理
试祥用30g/L三氯乙酸作浸提液提取植酸盐，然后加入铁盐使植酸 盐生成植酸铁沉淀, 与氢氧化钠反应转化为可溶性植酸鈉和棕色氢氧化铁沉淀，用钼黄法直接测定植酸磷含量。 2、试剂
（1）30g/L三氯乙酸溶液
（2） 三氯化铁溶液（1ml相当于 2mg铁）：称取三氯化铁（FeCl3.6H2O）0.97g,用30g/L三氯乙酸溶液溶解至100ml，混匀。 （3）60g/L氢氧化钠溶液
（4）浓硝酸：煮沸去除游离NO2,使其成为无色。 （5）硝酸溶液：1+1，V+V,用浓硝酸（4）配制。 （6）硝酸溶液：1+3，V+V,用浓硝酸（4）配制。 （7）混合酸：硝酸+高氯酸=2+1，V+V
（8）显色剂：Ａ、100g/L钼酸铵三溶液：称取钼酸铵10克，加入少量水，加热至50~60℃溶解。冷却后，用水稀释至100ml，混匀。
B、3g/L偏钒酸铵溶液：称取偏钒酸铵0.3克，溶于50 ml水中，再
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50 ml硝酸溶液（1+3，V+V）溶解，混匀。
使用时，将溶液A缓慢倒入B中，边加边搅拌，然后再加入浓硝酸（煮沸去除NO2）18ml，混匀.
（9）磷标准溶液：将磷酸二氢钾在105℃干燥1小时，在干燥器中冷却后称0.4349克，溶于蒸馏水中，转入1000ml容量瓶中， 用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即成100ug/ml的磷标准溶液。 3、 步骤
(1)、标准曲线的绘制：准确移取磷标液（100ug/ml）0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 、5.0、6.0、7.0 mL于50 mL容量瓶中，用水稀释至20 mL，各加4 mL硝酸溶液（1+1,V+V）和显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定各溶液的吸光度。以磷含量为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 （2）、试样的测定
A：称取试样3～6g于干燥的250 mL具塞三角瓶中，准确加入30g/L三氯乙酸溶液50 mL，浸泡2h，机械振荡浸提30min，进行过滤。
B：准确吸取上层清液10 ml于50 ml离心管中，迅速加入4 ml三氯化铁溶液（1ml相当于 2mgFe2+）,置于沸水浴中加热45min，冷却后3000r/min离心10min，除去上层清液，加入30g/L三氯乙酸溶液20~25 mL，进行洗涤（沉淀必须搅散），水浴加热煮沸10 min，冷却后3000r/min离心10min，除去上层清液，如此重复2次，再用20~25 mL水洗涤1次。
C: 洗涤后的沉淀加入3~5 mL水及60g/L氢氧化钠溶液3 Ml,摇匀，用水稀释至30 mL左右，置沸水中煮沸30min，趁热用中速定量滤纸过滤，滤液用100mL容量瓶盛接，再用热水60~70 mL分数次洗涤沉淀。滤液冷
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却至室温后定容至刻度。
D: 准确吸取5~10mL滤液于100 mL凯氏烧瓶中，加入混合酸3mL,于电炉上低温消化至冒白烟，使于0.5mL左右溶液为止（切记蒸干）。
E：冷却后用30mL水，分数次洗入50mL容量瓶中。然后，加入3 mL硝酸溶液（1+1,V+V）和显色剂10 mL，用水稀释至刻度，摇匀，放置20分钟，以0 mL溶液为参比，用10mm比色池，在420纳米波长下，用分光光度计测定吸光度。 4、结果计算
植酸磷含量（％）＝a×50×10-6/m
a：由标准曲线查得的含磷含量，ug/50 mL； 50：为试样溶液的稀释倍数； m：试样的质量，g
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实验四、饲料中水溶性氯化物的测定
一、实验目的
掌握用莫尔法测定饲料中盐分（氯）含量的原理和方法。 二、实验原理
在中性溶液中，Ag+ 能分别与C1- 与CrO42-形成溶解度较小的AgCl白色沉淀和溶解度相对较大的砖红色Ag2CrO4沉淀。因此，在滴入AgNO3标准溶液的过程中；只要溶液中有适量的K2CrO4，首先析出的是溶解度较小的AgCl沉淀，而当快达到等当点，Ag+浓度随溶液中C1的减少而迅速增加，当增加到Ag2CrO4沉淀所需要的Ag浓度随溶液中c1-的减少时，便析出Ag2CrO4沉淀，使溶液呈浅砖红色，其反应式如下： 等当点前：Ag++C1- = AgCl↓(白色) 等当点时：2Ag++CrO42- = Ag2CrO4↓(砖红色) 三、实验设备
瓷坩埚(25～30ml)，玻棒，试管，滴定管（棕色），漏斗，容量瓶(250m1)，吸管(1m1)，电炉，移液管（10ml）。 四、实验试剂
(1) 硝酸银标准溶液，c(AgNO3)=0.02mol/L，称取3.4g 硝酸银溶于1000mL 水中，贮于棕色瓶内。
(2) 铬酸钾指示剂：称取10g铬酸钾，溶于100mL水中。 五、实验步骤
称取试样5-10g,准确至0.001g,于400mL烧杯中，准确加蒸馏水200ml,搅拌15min，放置15min,准确移取上清夜20ml于150mL三角瓶中,加蒸馏水50ml,10%铬酸钾指示剂1ml,用硝酸银溶液滴定,呈现砖红色,且30s不褪色,为终点.
空白试剂 除用蒸馏水10ml代替样本液外，其他同样本液测定。 六、结果计算
试样中氯化物含量用氯元素的质量分数来表示： NaCl=(V-V0)×C×200×0.05845/(m×20) 式中：m--样品质量，g;
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