《饲料分析与饲料质量检测技术》课程实验指导
实验七 油脂TBA值的测定
一、原理
油脂受到光、热、空气中氧的作用，发生酸败反应，分解出醛、酸之类的化合物。丙二醛就是分解产物的一种，它能与TBA（硫代巴比妥酸）作用生成粉红色化合物，在532nm波长处有吸收高峰，利用此性质即能测出丙二醛含量，从而推导出油脂酸败的程度。 二、试剂
2.1TBA水溶液：准确称取TBA0.288g溶于水中，并稀释至100ml（如TBA不易溶解，可加热至全溶澄清，然后稀释至100ml），相当于0.02M；
2.2三氯乙酸混合液：准确称取三氯乙酸（分析纯）7.5g及0.1gEDTA，用水溶解，稀释至100ml； 2.3氯仿（分析纯）；
2.4丙二醛标准溶液：称取0.315g1，1，3，3-四乙氧基丙烷，溶解后稀释至1000ml，此溶液每ml相当于丙二醛100μg，置于冰箱内保存。准确吸取10ml，稀释至100ml，此溶液每ml相当于丙二醛10μg，备用。 三、操作步骤 （1）标准曲线的绘制
准确吸取每相当于丙二醛10μg的标准溶液0.0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6ml置于纳氏比色管中，加水至总体积为5ml，加入5mlTBA溶液，然后按样品测定步骤进行，测得光密度绘制标准曲线。 （2）样品测定：
准确称取融化均匀的油脂样品30g，置于100ml有盖三角瓶内，加入20ml三氯乙酸混合液，振摇半小时（保持油脂融溶状态，如冷结即在70℃水浴上略微加热使之融化后继续振摇）用双层滤纸过滤，除去油脂。滤液重复用双层滤纸过滤一次。 准确移取上述滤液5ml置于25ml比色管内，加入5mlTBA溶液，混匀，加塞，置于90℃水浴内保温40min，取出，冷却1h，移入小试管内，离心5min，上清液倾入25ml纳氏比色管中，加入5ml氯仿，摇匀，静置，分层，吸出上清液于532nm波长比色，
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对照标准曲线得到微克数（同时作空白试验）。4 四、计算
丙二醛含量（mg/kg）= C×10×20/5m 式中C—从标准曲线查得丙二醛的微克数(ug)
m---样品质量（g）
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实验八 挥发性盐基氮（TVB-N）测定
反映水产品腐败程度的指标 1. 原理
挥发性盐基氮是指动物性食品中由于酶和细菌的作用，在腐败过程中，使蛋白质分解而产生氨以及胺类等碱性含氮物质，此类物质具有挥发性，可在37℃碱性溶液中释出，挥发后吸收于吸收液中，用标准酸滴定，计算含量。 2. 试剂 (1)1％氧化镁。
(2) 吸收液：2％硼酸溶液。
(3)甲基红-溴甲酚绿混合指示剂：0.2％甲基红乙醇溶液1份与0.2％溴甲酚绿乙醇溶液5份混合。
(4)0.01N盐酸标准溶液。 3. 仪器
(1)半微量定氮器。
(2)微量滴定管：最小分度0.01ml。 4.操作方法
(1) 样品处理：(鱼品用水冲洗待干后，沿鱼脊椎切开约5cm，再切开两端使两块背肌分别向两侧翻开，取肌肉于研钵中研碎)，称取样品(鱼品或鱼粉）10g于锥形瓶中，加水100ml（V总），振摇、浸渍30min后过滤、滤液待测。
(2) 测定：将盛有吸收液20ml并加有混合指示剂5～6滴，锥形瓶置于冷凝管下端，并使冷凝管下端插入吸收液的液面下。精密吸取上述样品滤液10ml（V取）于蒸馏器反应室内，加1％氧化镁10ml，迅速夹紧进样液的胶管，并在进样液的漏斗内加水防漏气，进行蒸馏，由冷凝管出现第一滴冷凝水开始计算，蒸馏5～7min停止。吸收液用 0.01N盐酸标准溶液滴定。终点呈红色。同时做平行试验与试剂空白试验。 2.1.5 计算
TVB－N（mg／100g）＝｛（V1－V2）× N×14／〔W×（V取/V总）〕×100
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式中：TVB-N─挥发性盐基氮，mg／100g； V1─被测样液消耗盐酸标准溶液的体积，ml； V2─试剂空白消耗盐酸标准溶液的体积，ml； N─盐酸标准溶液的当量浓度； W─样品重量，g；
14─1N盐酸标准溶液1ml相当氮的毫克数。
挥发性盐基氮是反映水产品腐败程度的指标，这项指标越高，水产品腐败越严重，新鲜程度越低。
采用自动凯氏定氮仪代替半微量定氮法
用碳酸钾溶液代替氧化镁混悬液，经比较两者无显著性差异，采用仪器法操作简单，快速，且数据准确可靠；采用碳酸钾溶液作碱性试剂避免了反应室内壁上吸附着许多氧化镁颗粒，造成洗涤困难。
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实验九 植物蛋白质溶解度的测定
一、实验目的：
通过对植物蛋白质溶解度的测定，来评价植物蛋白质的质量。 二、原理
蛋白质溶解度：在一定的氢氧化钾溶液中溶解的蛋白质质量占试样中总蛋白质量的百分数。通常采用氮溶解指数（NSI）和蛋白质分散指数（(PDI)来表示。 用一定浓度的氢氧化钾溶液提取试样中的可溶性蛋白质，在催化剂作用下用浓硫酸将提取液中可溶性蛋白质的氮转化为硫酸铵。加入强碱进行蒸馏使氨逸出，用硼酸吸收后，再用盐酸滴定测出试样中可溶性蛋白质含量；同时，测定原始试样中粗蛋白质含量，计算出试样的蛋白溶解度。 三、试剂
1. 0.2%的氢氧化钾（KOH）溶液，相当于0.042当量，pH为12.5； 2. 其它试剂为凯氏定氮所需的试剂；
3. 称取2.360克KOH于溶量瓶中，加水溶解并稀释至1000毫升。 四、实验步骤
1.称取1.5g大豆饼粕(过60目筛)于250ml烧杯中，加入75ml的0.2%KOH的纯度。 2.在搅拌20min后，将50ml液体转移至离心管，以2700r/min离心10min。 3.吸15ml上清液，用凯氏定氮法测定其中的蛋白质含量，其量相当于0.3g的原样本。
五、计算方法
蛋白质溶解度（%）=0.3g样本中的粗蛋白质/原样本的粗蛋白质含量
注：当比较不同豆粕样品时，它们的粒度应一致的，样品在0.2%KOH溶液中搅拌的时间也应一致。
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实验十 饲料干物质离体消化率测定
一、实验目的：
通过对饲料干物质离体消化率的测定，判别饲料原料如鱼粉等的掺假。 二、消化酶液的制备
肠道消化酶提取方法：常规解剖取出鱼的肠道和肝胰脏，去除脂肪和肠道内容物后，分别称取肠道和肝胰脏，按照肝胰脏、肠道重量的10倍量取pH7.4、0.2mol/L的磷酸缓冲液，用玻璃匀浆器进行匀浆(冰浴中)。匀浆液在3500r/min冷冻离心20min，取上清液作为粗酶提取液，冰箱冷冻保存备用。 三、实验步骤
? 分别取过80目标准筛的饲料样品0.2000g于20ml带塞试管中，加入pH7.4、0.2mol/L的磷酸缓冲液15ml，分别加入消化酶液5ml。
? 在28 ℃的生化培养箱（或水浴锅）中培养、摇床以50次/min振摇进行酶解。 ? 水解时间控制6~8小时。过滤（滤纸先在105 ℃下烘干、衡重后称重），并用28 ℃水洗2~3次，得滤渣。
? 滤渣在105℃下烘干、衡重后分别称重。
? 也可将滤渣(连同滤纸)和饲料样品（在相同温度下烘干）按照粗蛋白质测定方法测定蛋白质含量。 四、计算方法
干物质消化率=（消化前饲料干物质重-消化后饲料干物质重）/消化前饲料干物质重
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