食品微生物学实验指导(新国标)(3)

态，出芽酵母菌的形态，菌体内的液泡及内含物.将光圈调小还可看到酵母菌体外的荚膜物质。 ③绘制出你所看到的酵母菌形态结构图，要注明放大倍数及各部分的名称。 五、实验结果记录： 1、酵母菌形态的观察结果记录： 绘出你所看到的标本图，并注明菌名、各部位名称及放大倍数。 2、记录酵母菌液体接种结果及结论。 六、实验结果分析及问题讨论： 实验四 微生物的死活鉴别及固体培养接种技术 一、实验目的和要求： 1、掌握鉴别酵母菌死活的染色原理和操作方法。 2、掌握无菌操作技术及微生物固体接种培养技术。 3、学会观察接种培养的结果。 二、实验原理： 用稀释美兰染液可进行酵母菌死活的鉴别。美兰是一种弱氧化剂，氧化态时为兰色，还原态时呈无色。被染成兰色的为死菌，无色的为活菌。这是因为活细胞新陈代谢旺盛，具有还原能力，染液进入细胞后即被还原成无色，而死细胞无还原能力。但染液浓度过高或染色时间过久，超出了活细胞的承受能力，会使菌体死亡，从而影响实验结果的。 三、实验材料和器材： 1、菌种：马铃薯琼脂斜面培养18～24小时的酵母菌 2、培养基及试剂：马铃薯液体培养基、马铃薯固体培养基、二甲苯、95％乙醇、0.1%美兰染液、苯酚等 3、器材及耗材：双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、盖玻片、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓、浆糊等 四、实验方法及步骤： 第10页 共38页 1、固体斜面接种方法（见下图）：在酒精灯下无菌操作，将 接种环伸入待接试管斜面的基部，缓慢地走之字图形地接种，然后放入28℃恒温培养箱中培养24～48小时。 2、酵母菌固体接种培养结果观察:：（包括菌落形状,色泽，质地，气味，透明度等）。 3、酵母菌的死活鉴别：先滴一滴0.1%美兰染液于干净的载玻片中央，无菌操作取一环酵母菌与0.1%美兰染液混合均匀，染色30秒～1分钟盖上盖玻片，用滤纸吸掉多余的染色液，镜检。 五、实验结果记录： 1、记录酵母菌死活鉴别结果并解释原因。 2、记录酵母菌固体接种结果。 六、实验结果分析及问题讨论： 实验五利用血球计数板的微生物计数法 一、实验目的和要求： 学习利用血球计数板对微生物进行计数的原理和方法。 二、实验原理： 利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法是将单细胞微生物的菌悬液或孢子悬液，注入血球计数板与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下在进行计第11页 共38页 数的。由于计数室的容积是一定的，所以可根据显微镜下观察的微生物的数量计算出单位体积内的微生物总数。 血球计数扳的构造 a.平面图(中间平台分为两半，各刻有一个方格网) b.侧面图(中间平台与盖玻片之间有高度为0.1mm的间隙) 血球计数板计数网的分区和分格 血球计数板的计数室如下图所示，其中央为计数室，通常有两种规格25×16型或16×25型.常用的为25×16型，其长和宽各为1mm，盖上盖玻片后，其间的距离为0.1mm，因此计数室的容积为0.1立方毫米。 细胞数（CFU/mL）=50000×A×B 式中：A－5个中方格中细胞总数 B－菌液的稀释倍数 第12页 共38页 三、实验材料和器材: 1、菌种: 固体斜面培养18～24小时酵母菌 2、培养基及试剂:马铃薯固体培养基、二甲苯、95％乙醇、苯酚等 3、器材及耗材:双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、血球计数板、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、盖玻片、载玻片、打 第13页 共38页 火机、棉花、滴瓶、圆塑料篓、长塑料篓、血红蛋白吸管、10mL塑料离心管等 四、实验方法及步骤: 1、酵母菌菌悬液的计数和酵母菌菌悬液中出芽率的计数: ①取一块干净的血球计数板,在显微镜下用低倍镜找到中 央计数室。上升镜筒,将盖玻片盖在计数室上。 ②用吸管吸取酵母菌菌悬液(先将菌液摇匀一下),将滴管在血球计数板和盖玻片之间的缝隙间靠一下,菌悬液即被吸入计数室内,用手轻压盖玻片,以免溶液过多而改变了计数室的体积,用滤纸吸取多余的菌液,静止一会,让菌体自然沉降并且稳定下来。 ③计数:分别统计五个中方格的酵母菌的数量和出芽的酵母菌数量.应取计数室对角线上的五个中方格或取计数室右上,右下,左上,左下,中央的五个中方格.压线的菌以取上不取下,取左不取右的菌计数. ④计完后取下盖玻片,用蒸馏水洗净血球计数板,用滤纸吸干净水份后,盖上干净的盖玻片,再滴菌液,于显微镜下重复计数三次。 五、实验结果记录及计算: 1、计数。 测定次数 中 方 菌 格 编 数 号 第一次 第二次 1 2 3 4 5 酵母菌 出 芽 酵母菌 出 芽 酵母菌 出 芽 酵母菌 出 芽 酵母菌 出 芽 五个中 酵母菌 方格的总菌数 出 芽 2、计算:每毫升菌液中含酵母菌的CFU（采用两位有效数字，及10的指数表示）。 第14页 共38页