食品微生物学实验指导(新国标)(4)

4、计算:每毫升菌液中含出芽的酵母菌的个数（同上）及出芽率。 六、实验结果分析及问题讨论： 实验六 微生物大小的测量 一、实验目的和要求： 了解测微尺的构造和原理，学习接目测微尺的校正方法及微生物大小的测定。 二、实验原理： 微生物细胞的大小是微生物形态特征之一。也是分类鉴定的依据之一。其大小的测量是在显微镜下用接目测微尺来测量。由于在目镜中观测到的是显微镜放大后的物像，又因为放大倍数不同时，目镜测微尺每格实际代表的长度也随之变化，因此目镜测微尺在使用前必须用标准物镜尺进行校正。 接目测微尺是一块圆形玻璃片,其中央尺等分成100格。 物镜测微尺又称标准尺，是一块中央刻有精确刻度的载玻片，放在载物台上使用的，专用于校正接目测微尺。常用的是0.01mm物镜测微尺。是将长1毫米的直线等分成100个小格，每格长度即为0.01mm(10微米)。 三、实验材料和器皿： 1、菌种：固体斜面培养18～24小时酵母菌。 2、培养基及试剂:马铃薯固体培养基、二甲苯、95％乙醇等 3、器材及耗材:双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、物镜物镜测微尺、目镜测微尺、接种环、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、盖玻片、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓等 四、实验方法及步骤： 1、校正目镜测微尺：将目镜头上的透镜旋下，把目镜测微尺裝入镜筒内，在显微镜里看到目镜测微尺的刻度。将物镜测微尺放在载物台上，有盖玻片的一面朝上，切勿放反了。调整光线后，先在低倍镜下找到物镜测微尺的尺子。然后转高倍镜观察到两把尺子，调节目镜测微尺，使两把尺的刻度线平行。再调节物镜测微尺，使目镜测微尺的一条刻度线与物镜测微尺上的一条刻度线重合，再寻找另一重合线，分别数出物镜测微第15页 共38页 尺及目镜测微尺的格数。以此计算在此放大倍数下目镜测微尺每一小格所代表的实际长度。例如：物镜测微尺的10格内含有目镜测微尺共45格，此物镜测微尺内有10小格，所以目镜测微尺每小格代表的实际长度＝10格×10微米÷45格＝2.2微米。 2、测量微生物菌体的大小：将物镜测微尺取下，把自制的酵母菌水浸片放于载物台上，通过旋转目镜筒的方法测出酵母菌菌体的长和宽，测量5个酵母菌菌体（先数格数，后计算）。 五、实验结果记录及计算： 1、校正目镜测微尺数据记录： 放大倍数： 目镜测微尺的格数： 物镜测微尺的格数： 目镜测微尺每小格代表的实际长度（微米）＝ 2、结果记录：放大倍数： 酵母菌编号 酵母菌占目镜测微尺的格数 计 算（微米） 长 1 宽 2 3 4 5 3、总结： 酵母菌的平均长度为 （微米）。平均宽度为 （微米）。 最大的酵母菌的长为 （微米）。其宽度为 （微米）。 最小的酵母菌的长为 （微米）。其宽度为 （微米）。 长 宽 长 宽 长 宽 长 宽 六、实验结果分析及问题讨论： 实验七 霉菌的湿室载片培养及根霉、曲霉、毛霉、青霉的形态观察 第16页 共38页 一、实验目的和要求： 1、学习湿室载片培养的操作方法。 2、掌握根霉、毛霉、曲霉、青霉的形态结构及制片方法。 3、观察根霉、毛霉、曲霉、青霉的细胞结构 二、实验原理： 霉菌的结构在制片过程中易被破坏，因而影响观察，所以采用湿室载片培养法进行培养，此法便于将生长完好的霉菌菌落载片直接置于显微镜的低倍镜下观察。 霉菌的菌丝较粗大，细胞容易收缩变形，因此采用乳酸石炭酸美兰溶液作为介质进行制片。此溶液具有不使细胞变形，可杀菌防腐，不易干燥，能保持较长时间，又有一定的染色能力。 通过观察掌握根霉的菌丝是无隔膜的，并且生有特殊的匍匐菌丝和假根，气生菌丝成簇生长，一般不分枝，顶端长有孢子囊。在高倍镜下仔细观察孢子囊的结构分为孢子囊梗，囊托，囊轴，囊衣，和孢子。根霉主要用于酿酒和生产各种有机酸。 毛霉采用湿室载片培养法。其菌丝比根霉要细些，也是无隔膜的。菌丝的分枝有两个类型：一种为单轴式，即无分枝。另一种为假轴状分枝。菌丝顶端都生有球形的孢子囊，囊壁上常有针状的草酸钙结晶，囊壁很薄，孢子成熟飞出后留下的残迹称为囊领。囊内有囊轴，形状不一。囊轴与孢子梗之间无囊托。毛霉的营养菌丝生长到一定时期能形成厚垣孢子，是一种休眠体。 青霉的菌丝是有隔膜，为多细胞多核的霉菌。菌丝的首端形成扫帚状分枝，顶部着生分生孢子，分生孢子的结构由孢子梗、副枝、梗基、小梗、和孢子组成。青霉除用于食品工业外，还主要用于医药工业中。 曲霉的菌丝与根霉、毛霉不同。营养菌丝具有隔膜，是多核多细胞的。营养菌丝的足细胞向上长出成束的气生菌丝，其顶端生有的孢子称为分生孢子。分生孢子的结构为：无隔膜的分生孢子梗、顶囊、初生梗、次生梗和孢子。幼年的分生孢子结构在高倍镜下可清楚地看见。 三、实验材料和器皿： 1、菌种：根霉、毛霉、青霉、曲霉斜面培养菌种。 2、培养基及试剂：马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）、大米麦麸固体培养基、葡萄糖豆芽汁固体培养基、二甲苯、95％乙醇、苯酚、乳酸石碳酸美蓝染液、琼脂粉等。 3、器材及耗材:双目显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、洁净工作台、紫外线灯管、紫外线灭菌手推车、接种环、湿室第17页 共38页 载片培养装置、试管、酒精灯、滤纸、擦镜纸、盖玻片、载玻片、打火机、棉花、滴瓶、长塑料篓等 四、实验方法及步骤： 1、湿式载片培养准备工作（5套/人）： （1）准备：在培养皿底部先放一张滤纸，滤纸上放二块载玻片，盖好盖，用纸包扎好，经160℃干热灭菌3小时后。冷却后备用。 干热灭菌法： 主要是指热空气灭菌，即把待灭菌的物体均匀地放在恒温干燥箱内，加热至160℃-170℃维持2小时即可达到灭菌目的（有水的物质，不可用此法）。 将包扎好的待灭菌物（培养皿，吸管，试管）放入干燥箱内，（注意不能放得太挤，以免妨碍空气流通，不得使器皿于与烘箱的内层地板直接接触）。关上门，接通电源，待温度上升至160℃-170℃时（注意勿使温度过高,超过170℃，器皿外的包扎纸、棉花会被烤焦燃烧），借调节器的自动控制，保持此温度2个小时，灭菌结束后，关闭电源，待温度降至60℃以下方可开门(否则玻璃器皿会因骤冷而爆裂和包扎材料起火燃烧)，取出无菌器皿，待用。 如果是为了烘干玻璃器皿，温度为120℃持续30min即可。 用此法灭菌时，绝不能用油、蜡纸包扎物品。 （2）接种：在无菌操作条件下，先用滴管取加热溶解了的培养基滴加在载玻片上，冷却片刻使培养基凝固后，再用滴管吸取霉菌悬液滴至培养基上，然后用无菌水把培养皿内的滤纸打湿，以保持培养皿内有一定的湿度，盖上盖子，在培养皿的底座侧面贴上标签，写好班次和学号。 （3）培养：将接种的培养皿置于培养箱中于28℃恒温培养2－3天。 2、观察： （1）肉眼观察：打开培养皿盖，观察霉菌的菌落形态，气味，质地如何。、 （2）低倍镜观察：取出载玻片，用滤纸将载玻片底部的水擦拭干净，直接放在载物台上，用低倍镜仔细观察霉菌的整体形态绘图如下（并注明放大倍数）： （3）高倍镜观察：另取一块干净的载玻片，于其中央滴一滴乳酸石炭酸美兰染液，从菌落的边缘取少量带有孢子的菌丝放入染液中，轻轻挑开菌丝，盖上盖玻片，轻压一下除去气泡，用滤纸吸去多余的染液，用高倍镜观察根霉的菌丝结构和孢子结构绘图如下（并注明放大倍数）： 五、实验结果记录： 第18页 共38页 一）根霉菌 1、肉眼观察结果： 2、绘出低倍镜观察根霉的整体形态图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 3、绘出高倍镜观察根霉的菌丝结构和孢子结构图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 二）毛霉菌 1、肉眼观察毛霉的菌丝呈 色。特征是 。 2、绘出低倍镜观察毛霉的整体形态图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 3、绘出高倍镜观察毛霉的形态结构图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 三）青霉菌 1、肉眼观察青霉的菌落形态：菌丝为 。孢子为 。 2、绘出低倍镜观察青霉的整体形态图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 3绘出高倍镜观察青霉的形态结构图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 四）曲霉菌 1、肉眼观察曲霉的菌落：生长初期为 。生长后期为 。 2、绘出低倍镜观察曲霉的整体形态图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 3、绘出高倍镜观察曲霉的形态结构图、并注明菌名、菌各部位名称及放大倍数。 六、实验结果分析及问题讨论： 实验八 放线菌的插片培养及形态观察 一、实验目的和要求： 1、学习放线菌的湿室插片培养的方法。 2、熟悉放线菌的形态结构及应用。 二、实验原理： 放线菌是一类单细胞丝状的原核微生物。由菌丝和孢子组成。菌丝分为营养菌丝和气生菌丝两部分。气生菌丝的顶端分第19页 共38页