食品微生物学实验指导(新国标)(8)

稀释倍数，即为每g （mL ）样品中大肠菌群数（CFU/mL（g））。 稀释倍数 项目 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 产气管（+） 未产气管（—） 该稀释度产气总管数 3、计算被污染的样品中大肠菌群数（CFU/mL（g））： 4、革兰氏染色镜检结果记录： 5、本次实验结论： 六、实验结果分析及问题讨论 实验十一 微生物菌种的分离纯化、培养、鉴定及保藏 此实验为设计实验，请大家设计实验方案，并请各小组上讲台介绍各自的设计方案。具体要求如下： 一）以分离污水中的大肠菌群为目标菌 二）所用培养基： 乳糖胆盐液体培养基、伊红美蓝琼脂（EMB）、营养琼脂培养基。 三）写出需要完成本实验所需的各类器材。 四）染色剂： 革兰氏一(草酸铵结晶紫) 革兰氏二(路哥氏碘液) 革兰氏三（95%乙醇） 革兰氏四（蕃红） 五）分离方法： 平板表面涂布法、平板划线法 六）通过以上条件初步分离得到大肠菌群 七）菌种保藏方法： 斜面低温保藏法、液体石腊保藏法 八）实验报告： 按学校要求书写 第35页 共38页 附录：微生物菌种保藏技术 一、实验目的和要求： 学习掌握菌种保的原理和方法。 二、实验原理： 菌种保藏是将微生物的菌种经长时间的保存，不污染其它杂菌，及可保持其形态特征和生理性状，减少变异，防止衰老，以便于将来使用。 保藏菌种一般是选用它的休眠休，如孢子；芽孢等等，并且要创造一个低温；干燥；缺氧；避光和缺少营养的环境条件，以利于休眠体能长期地处于休眠状态。对于不产孢子的微生物，应使其新陈代谢处于最低状态，又不会死亡，从而达到长期保存的目的。 三、材料和器材： 1、菌种：分离的目标菌。 2、培养基：营养琼脂固体斜面培养基。 3、器材：接种环 安培瓶 试管 干燥器 冰箱等。 4、试剂：医用液体石腊（比重0.83～0.89）。 四、实验方法及步骤： （一）斜面低温保藏法： 此法为最常用的一种。一般霉菌；放线菌和有芽孢的细菌可保存2～4个月，酵母菌可保存2个月，无芽孢的细菌最好每周移接一次。操作过程如下： 1、接种：将要保藏的菌种接入斜面培养基上，试管上贴好标签，写上菌种名称，时间。 2、培养：各类菌按其所需温度和时间进行培养。 3、保藏：选取生长健壮的菌种，于其试管带棉塞的上半部用灭菌的牛皮纸包扎好，以防棉塞受潮感染杂菌。置于4℃冰箱中保藏。 （二）液体石腊保藏法： 此法可用不分解石腊的菌种保藏。保存时间是半年至一年。放线菌；霉菌和产芽孢菌可保藏二年。液体石腊可防止培养基水分的蒸发，而引起的菌种死亡。同时可阻止氧气进入，防止好氧菌的生长。从而延长菌种保藏的时间。但需注意的是试管必须直立放置，并且不便携带。操作过程如下： 1、液体石腊的灭菌：将液体石腊装入锥形瓶中，量不超出锥形瓶体积的1/3，塞上棉塞，包扎好后，进行高压蒸汽灭菌二次（120℃30分钟）。再在110～120℃干燥箱中蒸发掉蒸汽第36页 共38页 灭菌时带入的水分。此时石腊透明清亮状。经检验确定无菌后备用。 2、菌种培养：将所需的菌种经培养后，选取健状的保藏。 3、加石腊油：用无菌管吸取石腊油加入菌种试管中，以高出菌种斜面顶点1cm为宜。少了会因培养基露出油面，而使培养基变干造成菌死亡。 4、收藏：试管上部用牛皮纸包扎好，垂直立于冰箱中4℃。 5、恢复使用：当要使用菌种时。倾出石腊油。此石腊油可再灭菌重复使用。接种培养。由于菌体外粘有油。第一次的菌生长缓慢，性状恢复不是很好。所以要再移植一次才能得到良好的菌种。 五、实验结果记录： 六、实验结果分析及问题讨论： 第37页 共38页