异性为81,0%。
(4)亚硝酸盐+干化学白细胞检查+显微镜检查的组合,灵敏度和阴性预测值100%,此时的亚硝酸盐特异性和阳性预测值100%。
(5)亚硝酸盐+干化学白细胞检查+尿培养用于诊断产科病人的尿路感染,尿培养阳性证实亚硝酸盐和白细胞的敏感性分别为43%和77%,特异性为99%和96%,两个试验组合的敏感性和特异性为92%和95%。
(6)亚硝酸盐+干化学白细胞检查+蛋白质试剂带检测新生儿和婴儿尿路感染,阳性预测值很低,阴性预测值为99.4%,男、女性别之间无差异。由此认为,试剂带有助于婴儿尿路感染的诊断;可避免进行昂贵的培养。
综上所述,亚硝酸盐可作为尿路感染的过筛试验。但由于亚硝酸盐单一试验影响因素较多,如将亚硝酸盐十干化学白细胞检查组合观察,必要时用未离心尿标本直接涂片进行革兰氏染色油镜检查,可大大提高尿路感染诊断的可靠性。
第八节 尿白细胞、红细胞测定
近年来,干化学尿液自动化分析逐步在国内普及,但不少操作者由于对干化学缺乏严格的过筛标准旬质量控制措施,往往造成实验误差,甚至延误疾病的诊断。目前较为突出的是,只看干化学检查
的白细抱、红细胞结果,而忽视显微镜检查的倾向。由于干化学法检查与显微镜检查是两种不同的实验方法,很雄找出完全对应的关系,本节着重讨论检验工作中常见的一些问题。 .
一、千化学法测定的原理
尿红细胞测定试剂带膜块中的主要特性见表3—24。其测试原理是:尿液中的血红蛋白或其破坏释敦的游离血红蛋白均含有亚铁血红素,后者具有过氧化氢酶样活性,可使过氧化物分解释放出新生态氧能使无色的邻甲联苯胺(或四甲替联苯胺)变成蓝色的邻甲联苯胺(或四甲替联苯胺)物质(见图3—18)。
尿白细胞试剂带测定膜块中的主要成分(表3—25)是吲哚酚酯、重氮盐两种,其测定原理基于粒细胞胞浆内含有酯酶,此酶可作用于膜块中的吲哚酚酯,使其产生吲哚酚,后者与重氮盐反应形成紫色缩合物(图3—19),其颜色深浅与细胞的多少呈比例关系。
二、干化学法检查注意事项 (一)试剂带的批间差异
试剂带不同而引起同1份标本测定结果的差异。 (二)标本对结果的影响
尿液标本必须新鲜,留尿后尽量立即测定,以免红、白细胞破坏,导致干化学法与镜检法的人为实验误差。干化学法既可测定完整的细胞成分,又能测定因细胞破坏胞浆内涵物来辨别细胞的有无(通过特异或非特异性酯酶检测白细胞,通过血红蛋白的过氧化物酶样反
应检测红细胞),因此报告时要了解临床诊断,综合分析,排除相互结果的干扰。某些肾病患者的终尿,由于各种原因使细胞裂解,可导致仪器壬与目测法的差异。笔者认为,此类标本最好不使用干化学法。 (三)干扰物对红、白细胞测定的影响 1.对白细胞试验的干扰
干化学法检查尿内白细胞的原理,是基于粒细胞浆内含有酯酶,可作用于试剂带膜块中的吲哚酚酯,操作时应注意:①应了解此法只能测定粒细胞,不与淋巴细胞反应,在肾移植病人发生排异反应尿中二淋巴细胞为主时,会出现阴性结果,此类病人不应用干化学法检验,应该以显微镜检查法为准。②尿液污染甲醛,或高浓度胆红素,或使用某些药物(如呋喃咀啶)时,可产生假阳性;尿蛋白>5g/L,或尿液含有大剂量先锋IV、庆大霉素等药物时,可使结果偏低或出现假阴性。
2.对红细胞试验的干扰
尿液中含有对热不稳定酶、肌红蛋白或菌尿,可引起干化学法测定尿红细胞的假阳性;易使检测红纽胞出现假阳性的原因主要是热不稳定过氧化物酶的干扰。笔者对690例尿液进行了分析,其中113例化学阳性,镜检阴性,进一步用金标法抗Hb单克隆抗体检查也为阴性;但将尿液加热煮沸后再进行一化学检查,结果为阴性,说明假阳性是由于存在不耐热的过氧化物酶所致。尿液中大量维生素C的存苎,可竞争性抑制反应致使干化学法产生假阴性,应予警惕。为了探讨何种方式用药可对试验有干扰,笔舌使用了前述的方法(见第
四节),发现静脉滴注维生素C5h后才能达到不影响尿红细胞测定的水平。百此静脉滴注后,原则上在5h内不要留尿液标本进行检测;不同厂家的仪器和试剂带对维生素C的影碉程度也不同(表3—26)。仪器—1的试剂带中含有破坏维生素C的酶,尿内维生素C浓度高达1 000mg时,也不干扰红细胞的检测;仪器—2、仪器—3及配套试剂带则较差,维生素C浓度分别在200mg/L和omg/L时即有干扰。为了避免这个问题,目前国外有多种抵抗维生素C干扰的试剂带,或使用可同时检测维生素C的试剂带,在检测尿液病理成分的同时监测尿维生素C的浓度。
(四)细胞破坏造成的“假阴性”现象
所述“假阳性”、“假阴性”现象,是以显微镜检查为基础的。由于干化学法是检测细胞胞浆内涵物来Q别细胞的有无(通过特异或非特异性酯酶检测白细胞,通过血红蛋白的过氧化物酶样反应检测红细墅,,在实际工作中可能存在下列问题:①由于尿液在膀胱贮存时间过长或标本放置时间延长,导致白细眶破坏,酯酶释放到尿液中,造成干化学法阳性、镜检阴性的所谓“假阳性”现象。②肾病患者的红细胞在肾蛀或泌尿道破坏,或尿比重过低、尿pH偏高,均易造成红细胞破坏,血红蛋白放出并出现尿中,造成‘谓红细胞干化学检查的“假阳性”现象。因此在干化学法结果与显微镜下所见出现矛盾时,要结合临床综合分析,甚至要动态观察,切不可一概否定干化学法结果。
(五)镜检法与干化学法的相应关系
有作者报道了干化学与镜检两种方法检查尿红细胞实验结果的对应关系,发现这两种方法虽然结Q没有明显的对应关系,但每一等级尿分析仪结果对应镜检红细胞计数有较好的百分比范围,特别是干《学“neg”档,<3/HP占100%,红细胞≤10///1,镜检正常占99.82%,3~5/HP占0.18%。鉴于此种现象.笔者认为在排除上述病理或其他干扰因素存在下,仪器结果为“红细胞≤10/Pl”时,可以省略显微镜喧查,而其他档次(25~l、50/P1、150~1和250/P1)均有较大的交叉,必须镜检。
由于尿液分析仪白细胞检测与显微镜下计数实验原理截然不同,报告方式是两种不同的概念,很难找出两者的对应关系,迄今还没有一种直接的换算方式。屡有文献报道了计算板计数与仪器结果的内在联系,Alwall报道每高倍视野白细胞数大约是仪器法报告(白细胞数/FAl)数的11%;Loosyt等指出,白细胞/Pl是白细胞/高倍视野的10.8倍,笔者的实验结果是8,7倍,因此仪器法白细胞检查只是一个筛选实验,决不可代替显微镜检查。 三、千化学过筛的标准
所谓过筛,就是在仪器、试剂带质量合格,检验人员相对稳定的条件下制定一个标准,达到此标准可视为尿沉渣成分在正常范围内,免除进一步显微镜检查。一般认为,镜检结果白细胞数在o~5/HP、红细胞数在0~3/HP和透明管型在0~1/LP的范围内,为尿沉渣参考范围。如果一个标本经过两种方法
检查,干化学结果符合过筛标准,镜检结果在正常范围,说明过筛是