消毒剂消毒效果及有效期确认
确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
8 表面试验
75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认（表面试验法）
目的:由于75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液要通过擦拭消毒，故选用不锈钢载片、镀锌片及玻璃裁片进行表面试验法，确定其消毒效力是否符合要求。
程序：（1）菌种选择：由于75%乙醇、0.2%新洁尔灭溶液中低效消毒剂，且不能杀灭芽孢，故表面试验用菌为金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌。
（2）工作菌液制备 取金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌分别接种于营养肉汤培养基中，于30～35℃培养18～24h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。取白色念珠菌接种于改良马丁液体培养基中，于23～28℃培养24～48h即得，培养后微生物浓度应不少于106cfu/ml。
（3）染菌不锈钢载片制备：将经灭菌的不锈钢载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×108~5×108CFU/ml的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片；染菌镀锌载片制备：将经灭菌的镀锌载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和白色念珠菌含菌量为1×108~5×108CFU/ml的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌镀锌载片；染菌玻璃载片制备：因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替
16
消毒剂消毒效果及有效期确认
玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×50mm），标注清晰。菌液滴染操作同染菌不锈钢载片制备。
（4）取样 试验组：将消毒剂擦拭在制备好的染菌载片上，消毒剂作用时间分别为5min、10min、15min，不锈钢载片、镀锌载片及玻璃载片每个作用时间分别制备2个。作用结束后，用接触碟取样（接触碟规格：?55mm，取样面积为25m2）。取金黄色葡萄球菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085）；取大肠埃希菌用大豆酪蛋白琼脂培养基接触碟（编号：BZW12085）； 取样白色念珠菌用玫瑰红钠琼脂培养基接触碟（编号：BZW15129）。接触碟取样方法：打开接触碟盖，使无菌培养基表面与取样面直接接触，均匀按压接触碟底板，确保全部琼脂表面与取样面表面均匀接触10秒左右，盖上碟盖。对照组：对照组的活菌浓度同工作菌液的制备。阴性对照：用接触碟在已灭菌的载片上（未染菌片的载片）按压取样，操作同上。每种载片及每种接触碟平行制备两份。 （5）培养：将取样金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的接触碟倒置于30～35℃培养3天计数；取样白色念珠菌的接触碟倒置于23～28℃培养5天计数计数。
（6）结果计算：计算试验组和对照组的活菌浓度 （CFU/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值:
杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（NO）－试验组活菌浓度对数值（NX） 可接受标准：杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位。
75%乙醇溶液、0.2%新洁尔灭溶液消毒效力的确认
序号 杀灭对数平均值（KL） 消毒剂 镀锌载片（min） 工作菌液 不锈钢载片（min） 玻璃载片（min） 名称 5 10 15 5 10 15 5 10 15 金黄色葡 萄球菌 大肠埃希75%乙醇 菌 白色 念珠菌 金黄色葡 萄球菌 0.2%新洁大肠埃希 菌 尔灭溶液 白色 念珠菌 ● 阴性对照无菌生长； ● 杀灭对数值 (KL)应不低于3个对数单位 1 2 可接受标准 确认结果评价： 17
消毒剂消毒效果及有效期确认
操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日 9 消毒效力现场考察试验
目的：确认消毒剂对相应设施的实际消毒效力。
操作：（1）生产车间岗位操作人员按照《洁净区卫生清洁程序》、《地漏的清洁消毒程序》、《10万级洁净区洁具清洁消毒程序》、《万级洁净区洁具清洁消毒程序》《地漏清洁程序》、进行清洁。
（2）生产车间岗位操作人员，使用放冷的注射用水，按照《清洁剂、消毒剂配制使用程序》进行75％乙醇溶液、0.2%的新洁尔灭溶液配制，现配现用。按照《洁净区卫生清洁程序》进行清洁消毒，分别清洁消毒10万级洁净区各房间的顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下水；10万级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布；万级区微生物限度室等房间顶棚、墙面、工作台面和墙面、地漏、水池下水，万级洁净区的工作鞋、清洁布、拖布等区域。
（3）消毒15分钟后，由QA人员到车间按照《接触碟法取样程序》进行洁净区表面微生物的采样；用浸泡或液封方式的采用无菌吸管取浸泡液或液封液1ml，连续逐日测定，共测定3次。记录测定结果。
可接受标准：所监测的洁净区的微生物均在公司环境质量控制范围内，各洁净区符合各自的洁净级别要求。
75%乙醇溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿
18
消毒剂消毒效果及有效期确认 洁净 级别 裁剪间 包装间 洁具间 无菌检查室 微生物限度室操作台 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
0.2%新洁尔面溶液消毒后环境监测表面微生物测定结果 单位：cfu/皿 监测区域 裁剪间 包装间 洁具间 无菌检查室 微生物限度室操作台 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
0.2%新洁尔灭溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿
洁净 监测区域 级别 裁剪间地漏 包装间地漏 10万级 第一次 第二次 第三次 19
监测区域 平均菌落数 第一次 第二次 第三次 可接受标准 是否合格 口是口否 10万级 ?50CFU/25cm 口是口否 2口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 ?1CFU/25cm2 万级 百级 口是口否 洁净 级别 平均菌落数 可接受标准 第一次 第二次 第三次 ?25CFU/25cm2 ?1CFU/25cm2 ?50CFU/25cm 2是否合格 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 口是口否 10万级 万级 百级 平均菌落数 可接受标准 是否合格 口是口否 口是口否 ?50CFU/25cm 2消毒剂消毒效果及有效期确认
洁具间水池下水 微生物限度室地漏 微生物限度室水池下水 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
75%溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿
监测区域 裁剪间地漏 包装间地漏 洁具间水池下水 微生物限度室地漏 微生物限度室水池下水 确认结果评价： 操作人： 日期： 年 月 日 复核人： 日期： 年 月 日
75%乙醇溶液消毒后微生物监测测定结果 单位：cfu/皿
平均菌落数 监测区域 工作鞋 清洁布 洁净级别 第一次 第二次 第三次 可接受标准 ?50CFU/25cm2 万级 口是口否 口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 洁净 级别 平均菌落数 第一次 第二次 第三次 可接受标准 是否合格 口是口否 ?50CFU/25cm2 口是口否 10万级 口是口否 口是口否 ?25CFU/25cm2 口是口否 万级 是否合格 口是口否 口是口否 10万级 20