浓硝酸，于通风橱中（因有氧化氮生成）置试管于沸水浴内加热1小时，含乳糖、半乳糖的试管产生粘酸沉淀，这将在溶液自然冷却并使用玻棒摩擦试管壁后静放一周后来观察，是粘度酸再加2ml水也不溶。 6. 奶油的转化
将冰箱中的奶油取出，在室温下稍放置一段时间使其温度达到约8~10oC，然后用搅棒不断搅打奶油，搅打时要不断观察奶油的变化，记录出水以前奶油的表现性状，继续搅打到出水后，将水用滤纸轻轻吸去，再搅打一阵后，记录奶油此时的表现性状。 五、思考题
1. 酪蛋白的等电点为pH4.6,本实验分离酪蛋白的方法是等电点沉淀法,根据该原理,你估计分离到酪蛋白溶解度高吗?若不高如何改进? 2. 生奶油在搅打中为什么会出水?
3. 生产中用乙醇促进乳糖结晶显然是不经济的,你能找出更好的方法吗?
实验九 多酚 氧化酶活性的测定
一 目的
多酚 氧化酶是引起果蔬褐变的主要酶之一，学习它的活性测定对于果蔬加工采取合理的护色措施具有指导意义。 二 原理
邻苯二酚在该酶催化下受O2作用生成邻苯二酚能够被搞坏血酸还原，如搞坏血酸充足，少量邻苯二酚可反复不断地氧化还原。由于该酶最适pH为6，因此这一过程在pH6时最快。
把分析对象配成pH6左右的样液，在搞坏血酸和邻苯二酚存在时，于20C下振荡2分钟，这时抗坏血酸被氧化。精确的经过2分钟后加入偏磷酸以终止反应。用碘酸钾进行滴定，测得剩余的抗坏血酸。由得到的数据求出被氧化的抗菌素坏轿酸量，并计算出酶活性以1克分析物质1分钟内氧化抗坏血酸的微克分子数表示之。所有上友谊赛过程的主要式如下：
三 材料和设备 苹果；马铃薯。
研钵；烧杯；50毫升量瓶；250毫升三角瓶；秒表；滴定管；温度计。 四 试剂
1 0.2%邻苯二酚溶液:用粗天平称0.2克邻苯二酚,溶解于蒸馏水,稀释到100毫升,(准备用的前1—2天配制).贮于棕色玻璃瓶中,放在冷谅处。
2 0.01N碘酸钾溶液；用分析天平精确称取0。3566克KIO3予先在102C烘2小时，在干燥皿中冷却备用），用蒸馏水溶解1升的容量瓶中，加5毫升1N的NaOH溶液（此时加碱是为了使KIO3和KI在该试剂中暂不反应）和蔼克KI，
溶解，用蒸馏水稀释到刻度，混匀，保存于棕色瓶中。
3 pH6.4的磷酸缓冲液,称取KH2PO4盐5.44克溶解到无碳酸的水中,加10毫升1N的NaOH溶液,用无碳酸的水稀释至200毫升,保存于玻璃瓶中.
4 0.04抗坏血酸溶液:用粗天平称取0.35克抗坏血酸溶解到蒸馏水中,用水稀释至100毫升, 混匀.溶液只能用一天.
5 5%的偏磷酸溶液:50克偏磷酸(经验式HPO3)溶解到蒸馏水中,稀释至1升后混匀,保存于磨口玻璃讧中。 6 0.5%可溶性淀粉。 五 操作程序
称2克新鲜的植物材料，加蒸馏水于瓷研钵中研细， 转移 到100ML容量瓶，混匀。充分振荡勿使沉淀下沉，吸10毫升这种悬浮液，倒入150毫升三角瓶中。加入1毫升pH6.4的磷酸缓冲液，再加入5毫升0。04的抗坏血酸溶液，混匀。加入5毫升0。2%的邻苯二酚溶液，同时开始计时并充分振荡。为使空气中的氧气不断进入溶液一直要均匀地振荡2分钟。经精确作用2分钟，加入5毫升5%的偏磷酸溶液以停止反应（整个实验都应在20C下进行。即各种试剂 样液都予先放到20C环境中，做时也在20C环境下做，加入偏听偏信磷酸量还可根据自己的摸索而定）。加入1毫升0。5%的淀粉溶液，用0。01N碘酸钾溶液滴定抗菌素坏血酸的剩余物直到兰色不消失为止。
同时进行对照滴定。为此吸取10毫升悬浮液注入另一只三角瓶中，加5毫升偏磷酸，再加入1毫升pH6。4磷酸缓冲液，5毫升0。4N抗坏血酸，再加淀粉液，也用0。01NKIO3 六 计算多酚氧化酶活性
A=(100*5（a-b）)/10*n*2=25(a-b)/n
式中：A------多酚氧化酶活性（1克分析物质，20C下，一分钟氧化抗坏血酸的微克分子数）：
100---分析材料悬浮液的总体积；（毫升）； n---分析材料的重量（克）
10----测定酶活性所取的悬浮液体积； 2---反应时间（分）；
a----用于滴定对照的0。01KIO3溶液体积（毫升）； b----用于样品滴定的0。01NKIO3溶液体积（毫升）；
5-----0。01N抗坏血酸溶液每ML换算为微克分子数抗坏血酸的系数（0。00088/0。000176） 七 问题
你能列出几种破坏多酚氧化酶活性的方法吗？
实验十 从鸡蛋清中制备溶菌酶
一、原理
溶菌酶是糖苷水解酶，由129个氨基酸残基组成，在蛋清中其会计师丰富，从一个鸡蛋中可获得20MG左右的冻干酶。在蛋清中除溶菌酶以外还胡其它许多 蛋白质，但溶菌酶有两面三刀个显著的特点：一是具有很高的等电点，PI=11。0，二是其分子量低，MR=14。6*103， 借此可以将它从蛋清中很容易地分离出来。
溶菌酶之所以溶菌，是因为它能催化革兰氏阳性细菌的细胞壁肽聚糖水解，见下图：
测定溶菌酶活力时，可用某些细菌细胞壁作底物，以单位时间内被它水解的细胞壁的量表示酶活力的大小。 二、试剂
鸡蛋，微球菌（M。lysodeikticus）
0．1mol/L Nacl的0。1mol/L FIy-NaOH 缓冲液 pH10.0 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液，pH6.24 CM-纤维素 Lowry 试剂
小层析柱（1*15cm） 三、操作步骤
1、从鸡蛋清中分离溶菌酶
蛋清用纱布过滤后，取20ml用0。1mol/L甘氨酸-NaOH缓冲液(pH10.0)稀释5倍。
（1）将1或2只鸡蛋的蛋清置于小烧杯中（轻调皮蛋壳成一小孔，从中放出蛋清即可）（蛋清的pH不得低于pH8.0,否则不能用），慢慢搅拌几分钟，然后用纱布过滤以去除卵带或碎蛋壳， 量出蛋清体积并记录。
（2）对一只蛋来说分离溶菌酶酶已足够，层析术的使用可以参考有关实验中的说明。
2、溶菌酶的分析
(1) 蛋白质会计师的测定，可按Lowry法进行，为了分离过程中的监测方便也可