4.注意事项：
? KIA管最好用棉花塞,若用螺旋帽或硅胶塞，将盖子拧松一些,使有足够的氧气促进反应;
? MIU需用橡皮胶塞盖紧，因尿素酶反应需避开氧气。经4～6小时培养可先观察MIU管尿素酶反应，若为红色多为变形杆菌；再经36±1℃过夜培养后观察反应结果。
? 当KIA出现A／A反应时，应检查KIA管是否塞得过紧，若太紧应将塞子松一下后，放2-3小时再观察一次。
? 初筛中KIA底层不产气不一定分解葡萄糖不产气，应用带倒管的单糖管复核。
? KIA斜面不产酸不一定是乳糖阴性，应用单糖管观察14天才能确定阴性或迟发酵。
? ONPG(半乳糖苷酶)试验阳性是迅速判定乳糖迟发酵的可靠方法；乳糖阴性的菌株，除耶氏菌ONPG为阳性外，其余均为阴性。 ? 若KIA斜面为黄色(酸性)，则不宜做氧化酶试验(因氧化酶可被酸性pH所抑制，出现假阴性反应),此种情况应将培养物转种至不含糖的培养基上,待生长后再做氧化酶试验。
? 有时MIU培养基表层呈红色，应检查穿刺线是否插到底，若已穿刺到底，培养基一半以上变红则判阳性。若穿刺到底仅表层变红，可能是细菌在有氧条件下分解蛋白胨产碱变色，暂不能判为阳性，应继续培养观察。
五、血清鉴定
? 用生化初筛符合志贺菌反应的KIA管斜面菌苔，做志贺菌玻片凝集血清凝集；
? 阳性者在营养琼脂平板上分纯，挑单个菌落穿刺保存到半固体保存管
? 详细记录试验结果并填写菌种登记表。 (一)方法与步骤：
1.挑取KIA生化反应符合痢疾菌的培养物，首先用四种多价血清做玻片凝集反应(4种多价包括：A群1、2型；B群和D群)。凝集者则用B群多价、D群和A1、A2、血清分别凝集，阳性者再选用相应的群多价或单价因子血清做凝集。若多价血清不凝集，可能为C群或A群的3～12型，应进行C群的四种多价和A群另三种多价血清做玻片凝集。
2.福氏多价血清凝集的菌株,可先用群3,4、6和7三种因子血清检查,根据因子血清凝集反应再依次选用可能的型因子血清做凝集。 在群因子血清中凝集反应 可能的血清型 3，4 + + + - - - 6 - + - + + - 7 - - + + - + 1a，2a，2b，4a，5a，6，y 1b，3b，4b 2b 3a 3c 1c，2b，4c，5b，x - - - 4，6 3.最近几年出现的新的血清型抗原式，目前世界上并没有统一；分离较多的国家多沿用此抗原式。部分我们国家近年出现的。 抗原式 Ⅳ:- Ⅳ:7 Ⅲ:6 Ⅰ:7 Ⅱ:3,4；7
4.若四种多价血清凝集,与相应的群血清均不凝集,且菌落较粗糙，应考虑宋内Ⅱ相(R相)菌。可用宋内菌Ⅱ相（粗糙型）血清做凝集反应。 5.每次均需要做盐水凝集对照试验；尤其当发现较脆或较粘稠的菌落时，盐水对照可排除自凝菌。
6.属于本地区未报道或极少见的志贺菌型，应慎重报告并送上一级实验室或国家级实验室复核确认。 (二) 特别处理：
①一般通过血清学试验，可鉴定到群、型或亚型，但遇到不典型志贺菌（与相应的血清不凝集或凝集不完全）时，可做如下处理： ? 取可疑菌划线接种于营养琼脂平板，36℃18小时培育后,挑取数个菌落做玻片凝集,如不凝继续传代，也可用琼脂斜面与肉汤替换传代，一般经5～10代后，有些菌恢复其凝集力，否则可排
血清型 4 4c 3c 1c 2b 除志贺菌。
②有些新鲜分离的培养物(A、C、D群各血清型及B群的2a型、6型)生化符合志贺菌反应，但与志贺菌属诊断血清不发生凝集，应考虑可能存在K抗原而阻止分型血清与菌体O抗原发生凝集，处理方法如下：
? 取待检菌纯培养菌一满接种环于0.5～1ml生理盐水中制成浓厚菌液，置于100℃水浴中煮沸30分钟，冷至室温后再用诊断血清进行玻片凝集。 (三) 交叉凝集反应：
1. A3与动力+/-、产气量少大肠菌存在交叉凝集；
2. F1、F1c、F4、F4b与动力+/-、产气量少的大肠菌存在交叉凝集； 3. F4a与深红沙雷菌存在交叉凝集；
4. F4c、x变种与蜂房哈夫尼亚菌属存在交叉凝集； 5. C17与克雷伯菌属存在交叉凝集；
6. 宋内I相菌株与类志贺邻单胞菌存在交叉凝集，注意用氧化酶试
验加以鉴别。
表6 福氏志贺菌型和亚型的型抗原和群抗原鉴别表
型和亚型 1a 1b 1c 2a 2b 3a 3b 型抗原 Ⅰ Ⅰ Ⅰ Ⅱ Ⅱ Ⅲ Ⅲ 群因子血清凝集 3，4 ＋ ＋ － ＋ －（＋） － ＋ 6 － ＋ － － － ＋ ＋ 7，8 － － ＋ － ＋ ＋ － 3c 4 4a 4b 4c 5a 5b 6 x变种 y变种
Ⅲ Ⅳ Ⅳ Ⅳ Ⅳ Ⅴ Ⅴ Ⅵ － － － － ＋ ＋ － ＋ － （＋） － ＋ ＋ － － ＋ － － － － － － － － － － ＋ － ＋ － ＋ － 注：＋凝集；－不凝集；（ ）个别菌株系阴性反应。
六、鉴别试验
? 虽然经血清学证实、初步生化鉴定符合可基本定为志贺菌,但因部分志贺菌型与EIEC部分血清型有密切的抗原关系，而且EIEC同样具有侵袭力(可使豚鼠角膜试验阳性),因此需做相关鉴别试验。
表7 志贺菌属与具有相关抗原的EIEC生化鉴别表
鉴别菌型／鉴别试验 EIEC O112ac:K66 志贺2型（A2） 鲍氏1型（C1） 鲍氏15型（C15） 鉴别菌型／鉴别试验 EIEC O124:K72 志贺3型（A3） 鲍氏17型（C17） 鉴别菌型／鉴别试验 甘露糖 + - + + 甘露糖 + - + 甘露糖 吲哚 + + - + 吲哚 + - + 吲哚 蔗糖 +/- - - - 醋酸盐 (+) - - 鸟氨酸 乳糖 -/+ - - - 产气 +/- - - 产气 动力 - - - - 动力 +/- - - 动力