图12. 使用预测性实验方法（上图）和非预测性实验方法（下图）所测定的原型制剂（F-1、F-2和F-3）和参照药品的体外释放特性比较 使用所建立的体内体外相互关系（y = 1.1114x - 0.1382）对原型制剂F-2和F-3的药物释放数据进行卷积，以预测平均血药浓度-时间曲线。在进行下一项生物等效性研究之前，为了评估药代动力学参数的变异性，进行了虚拟的实验模拟。在模拟中，对以前固定的模型参数预先定义每个参数的分布。在每个模拟实验中，从预先定义的分布中生成一个随机数，用作模型参数。因此，在一个虚拟的人群中，对F-2和F-3的体内性能进行了评估。原型制剂F-2的平均血药浓度-时间曲线以及平均血药浓度的90%置信区间，见图13所示。这些模拟实验为原型制剂F-2与参照药品极有可能具有等效性提供了佐证。
图13. 使用实验处方（F-2）的药物释放数据所生成的预测性虚拟实验
将原型制剂F-2和F-3与参照药品进行比较，进行了另一项生物等效性研究。是在12例健康受试者中进行的随机、单剂量、三交叉研究。表7显示了与参照药品相比的原型制剂F-1、F-2和F-3的药代动力学参数的几何平均数比值。其中，原型制剂F-1和F-3的Cmax比值不符合生物等效性限度（0.8–1.25）要求，而原型制剂F-2的所有比值均可接受。
表7. 原型制剂和参照药品的生物等效性研究中的药代动力学参数比值小结 原型制剂/参照药品比值 原型制剂F-1 原型制剂F-2 原型制剂F-3 AUC0-2 1.1 0.97 0.81 AUC2-24 1.21 0.98 0.95 AUC0-∞ 1.10 0.96 0.95 Cmax 1.32 1.03 0.75 参照药品与这两个原型制剂F-2和F-3的血药浓度曲线的比较，参见图14所示。
图14. 原型实验处方（F-2和F-3）和参照药品经口服给药后的血药浓度比较
利用在这两项生物等效性研究中所获得的三种原型制剂F-1、F-2和F-3的药代动力学数据，以及使用预测性溶出度测试方法所获得的体外药物释放数据，最终建立了的体内体外相互关系（y = 1.1131x – 0.1242, R2 = 0.87）。可以使用这一最终体内体外相互关系对原型制剂和参照药品处方的体外数据进行卷积。这一体内体外相互关系也可以预测到采用USP 3型溶出仪所获得的原型制剂F-1和F-3的药物释放数据，从而预测到研究的失败。此外，该体内体外相互关系能够用于建立申报批和商业批之间的关联性。 1.4.3 关键生物等效性研究
请读者注意：为了确保以中试规模和商业化大生产规模（成比例放大批次）生产的药品批次与参照药品生物等效，有几种方法可供选择。对每种方法的讨论如下： 1. 体内体外相关性（IVIVC）
为了确保商业批次的持续生物等效性，建立体内体外相关性是更可靠的方法之一。该体内体外相关性能有效控制在批准后对关键物料属性（CMAs）和关键工艺参数（CPPs）的变更，进而确保了稳定的产品质量和生物等效性。但是，体内体外相关性很难建立。
2. 预测性体外实验方法（体内体外相互关系（IVIVR））
使用QbD原则所设计和开发的产品，应能建立一个预测性的体外溶出度实验方法。虽然体内体外相互关系的可靠性比体内体外相关性的低，但是，建立一个体内体外相互关系，与对产品和工艺的理解相结合，可足以确保产品的质量。这种体外实验方法对评估批准后的变更也非常有用。
3. 商业化大生产批次的生物等效性研究
众所周知，以申报批规模开发的ER缓释产品，并不是总能成比例放大到商业化大生产规模下生产，并保证产品与参照药品具有生物等效性。进行进食和空腹的生物等效性研究，对确保商业批次产品与参照药品的生物等效可能是必要的。确定所有关键物料属性和关键工艺参数，并对它们进行充分的控制，这些控制之一是一种具有区分能力的体外实验方法。尽管商业批产品的生物等效性研究能确保药品的生物等效，而一个具有区分能力的体外实验方法将确保产品在生命周期内的质量（批准后变更）。
根据药物开发中所获得的产品和工艺理解以及所建立的体内体外相互关系，按照原型制剂F-2处方为基础生产了申报批（批号：ZAb041911），进而进行了由36名健康志愿者参加的随机、单剂量、双交叉的空腹生物等效性研究。结果显示该申报批与参照药品具有生物等效性。对于Cmax、AUC0-2、AUC2- 24和AUC0-∞，90%置信区间符合80~125%的生物等效性限度要求，见表8所示。空腹条件下的血药浓度曲线见图15所示。同时进行了进食条件下的生物等效性研究，结果合格（未给出数据）。与参照药品相似，食物对所设计的仿制药品的药代动力学参数没有显示出任何影响。
表8.空腹生物等效性研究，编号：1234
示例缓释片，批号：ZAb041911；原料药：Z；剂量：10 mg
参数 AUC0-2 AUC2-24 AUC0-∞ Cmax Tmax
实验处方制剂
参照药品
实验处方/参照药品 LSGM比值 1.02 0.98 1.01 0.96 --
90%置信区间 94-108 92-105 96-107 88-105 --
最小二乘法几何均值（LSGM） 332.40 3308.88 3316.86 238.86 6
329.31 3340.12 3345.88 243.92 7
图15. 实验药品与参照药品的血药浓度曲线
2.1 药品组分 o 2.1.1 原料药 ? ? ? ? ? ? ? 2.1.1.1 物理性质 2.1.1.2 化学性质 2.1.1.3 生物特性 2.1.1.4 原料药属性的风险评估 2.1.2.1 速释颗粒的辅料 2.1.2.2 缓释包衣微丸中的辅料 2.1.2.3 示例缓释片-10 mg的辅料 o 2.1.2 辅料 2.1 药品组分 2.1.1 原料药 2.1.1.1 物理性质 物理描述：
外观：白色或类白色结晶粉末 颗粒形态：不规则晶体
粒径：（根据10批示例速释片所使用的原料药的粒径范围 – 使用Malvern Insitec X 测定） d10 – 实测 3–8 μm d50 – 实测20–25 μm d90 – 实测32–38 μm 固态晶型：
Z是原料药的游离态（即不是盐型）
Z只有一种已知晶型。ANDA aaaaaa（附录I）中提交了X射线衍射（XRD）和差示扫描量热法（DSC）的数据。到目前为止，文献中还未报道有其它晶型。在各种不同温度下，用不同极性的溶剂，进行了大量的结晶实验，也证实这一点。
原料药Z还可以以一种非晶态形式存在。在机械压力条件下，以及模拟固体口服剂型生产条件下（如制粒、干燥和压片），对原料药Z可能的晶型变化进行了评估。在示例速释片的生产过程中，晶型没有改变。 在强力破坏条件下Z的晶型和非晶态的物理稳定性将在2.1.1.2化学性质一节中讨论。 熔点：246–251 ℃ 不同pH值下的水溶性：
如表9和图16所示，在整个生理pH范围，Z晶型的水溶性很高而且稳定。Z的溶解性和渗透性符合BCS I级化合物分类。非晶态的溶解性约为晶态的10倍。 表9：Z（结晶）在生理 pH下的溶解性 pH 1.2-1.4 4.5 6.8 7.5 Z的溶解性（mg/mL） 124.0 124.0 124.0 123.7 介质 0.1 N 盐酸 乙酸钠缓冲液 磷酸盐缓冲液 磷酸盐缓冲液 图16. 作为pH值函数的原料药Z的水溶性
吸湿性：不吸湿
密度（松密度、振实密度和真实密度）与流动性： ~0.22 g/cc（松密度）， ~0.41 g/cc（振实密度）和~0.68 g/cc（真实密度）。 休止角：75度，可压缩性指数：46，这表明流动性很差。用于密度测量的批次的粒度分布如下：d10 - 5 μm；d50 - 20 μm；d90 - 35 μm。 2.1.1.2 化学性质 pKa：7.0
固态（结晶和非晶态）与在溶液中的化学稳定性：
通过对原料药Z进行强力破坏实验，我们对分子内在稳定性有了深入了解，并可以确定可能的降解产物，还能有助于建立揭示稳定性的分析方法。 ANDA aaaaaa的3.2.S.4.3节（附录I），更全面和详细地阐述了强力降解研究。表10归纳了强力破坏实验的结果。 表10. 强力破坏条件下原料药Z的稳定性
强力破坏条件
含量
杂质
固体形态
结晶
(% w/w) 99.6
99.3 99.5 99.2 99.1
99.6 99.5 99.6
(% w/w) 未检测到
未处理的 溶液中
1% 溶液（纯化水，室温，14天）
酸（0.1% 溶液，1.0 N HCl，室温，14天） 碱（0.1% 溶液，1.0 N NaOH，室温，14天） 过氧化物（0.1% 溶液，3% H2O2，室温，7天）
未检测到 未检测到 未检测到 未检测到
未检测到 未检测到 未检测到
不适用 不适用 不适用 不适用
结晶物料湿热（敞口容器，相对湿度90% ，40℃，7 天） 干热（105 ℃，96 小时） 光稳定性（按照ICH Q1B 选项1）
结晶 结晶 结晶