（3）平板划线培养分离法 ：将灭菌融化的培养基倒入无菌平皿中，冷却成平板，用灭菌接种环蘸取一环待测样品，在平板表面进行分区划线，每次划线都要灼烧灭菌，随着每一次划线，样品中的微生物逐渐减少，最后在平板上会生长出分散的单菌落，这种单菌落一般是由一个细胞或一孢子繁殖而成，故可获得纯培养。
2、细菌群体数量的测量方法，应用范围及优缺点
（1）、显微直接计数法 :一般适用于测定单细胞微生物和丝状真菌孢子的数量，不能区别活菌数和死菌数。 （2）、比浊法；在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度(optical density, 即O.D.) 表示菌量。波长一般选定在450~650nm.
实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。
(3）、稀释平板法 （cfu）：包括倾注平板法 (混合平板法) 、涂布平板法
稀释到适量浓度 倾注或涂布平板 培养 菌落计数
一般用菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示原样品中的细胞数。 (4)、膜过滤培养法：当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样 品通过膜过滤器，然后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形 成的菌落进行统计。
(5)、MPN法：对未知样品进行十倍稀释，然后根据估算取三个连续的稀释度平行接种多支试管，对这些平行试管的微生物生长情况进行统计，长菌的为阳性，未长菌的为阴性，然后根据数学统计计算出样品中的微生物数目。主要适用于只能进行液体培养的微生物，或采用液体鉴别培养基进行直接鉴定并计数的微生物。
3、生长曲线(Growth Curve)：
（1）定义：细菌接种到定量的液体培养基中，定时取样测定细胞数量，以培养时间为横座标，以菌数为纵座标作图，得到的一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线。
（2）一条典型的生长曲线至少可以分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期 四个生长时期
延滞期(Lag phase)：将少量菌种接入新鲜培养基后，在开始一段时间内菌数不立即增加，或增加很少，生
长速度接近于零。特点： 分裂迟缓、代谢活跃。 在生产实践中缩短迟缓期的常用手段：
1)利用对数生长期的细胞作为种子；2)尽量使接种前后所使用的培养基组成不要相差太大；
3)适当扩大接种量；4)通过遗传学方法改变种的遗传特性使迟缓期缩短；
对数生长期(Log phase)：又称指数生长期(Exponential phase)以最大的速率生长和分裂，细菌数量呈对数
增加，细菌内各成分按比例有规律地增加，表现为平衡生长。
对数生长期的细菌个体形态、化学组成和生理特性等均较一致，代谢旺盛、生长迅速、代时稳定。所以是研究微生物基本代谢的良好材料。它也常在生产上用作种子，使微生物发酵的迟缓期缩短，提高经济效益。
代时：在细菌个体生长里，每个细菌分裂繁殖一代所需的时间为代时(世代时间，Generation time)，代时通
常以G表示。
稳定生长期(Stationary phase)：稳定生长期又称恒定期或最高生长期，此时培养液中活细菌数
最高并维持稳定。特点：新繁殖的细胞数与死亡的细胞数相等，菌体产量达到最大。
生产上常通过补充营养物质（补料）或取走代谢产物、调节pH、调节温度、对好氧菌增加通气、搅拌或振荡等措施延长稳定生长期，以获得更多的菌体物质或积累更多的代谢产物。
衰亡期(Decline或Death phase)：营养物质耗尽和有毒代谢产物的大量积累，细菌死亡速率超过新生速率，
整个群体呈现出负增长。 4、同步培养
定义：使群体中的细胞处于比较一致的，生长发育均处于同一阶段上，即大多数细胞能同时进行生长或分裂的培养方法。
同步细胞群体在任何一时刻都处在细胞周期的同一相，彼此间形态、生化特征都很一致，因而是细胞学、生理学和生物化学等研究的良好材料。
方法：环境条件诱导：温度、培养基成份控制、其它（如光照和黑暗交替培养）
方法：离心方法、过滤分离法(硝酸纤维素滤膜洗脱法) 5、连续培养(Continous culture ）
定义：在微生物的整个培养期间，通过一定的方式使微生物能以恒定的比生长速率生长并能持续生长下去的一种培养方法。
控制连续培养的方法：1）恒浊连续培养：不断调节流速而使细菌培养液浊度保持恒定。
测定所培养微生物的光密度值，自动调节新鲜培养基流入和培养物流出培养室的流速。使培养物维持在某一恒定浊度。
2）恒化连续培养：保持恒定的流速，保持恒定生长率。
使培养液流速保持不变，并使微生物在恒定的生长速率下，即使菌体以始终低于其最高生长速率的条件下进行生长繁殖。通常通过控制培养基中某一营养成分的浓度，使其成为生长的限制因子。
6、环境条件对微生物生长和代谢的影响 （1）温度：温度对微生物的影响具体表现在：
? 影响酶活性，温度变化影响酶促反应速率，最终影响细胞合成。
? 影响细胞膜的流动性，温度高，流动性大，有利于物质的运输，温度低，流动性降低，不利于物质
运输，因此，温度变化影响营养物质的吸收与代谢产物的分泌。 ? 影响物质的溶解度，对生长有影响。
低温影响：当环境温度低于微生物的最适生长温度时，微生物的生长繁殖停止，当微生物的原生质结构并未破坏时，不会很快造成死亡并能在较长时间内保持活力，当温度提高时，可以恢复正常的生命活动。 当温度过低，造成微生物细胞冻结时，形成冰晶，从而对细胞造成机械性损伤，从而造成微生物死亡。 高温影响：高温使蛋白质、核酸等重要生物大分子发生不可逆变性、破坏，以及破坏细胞膜上的类脂成分，膜受热出现小孔，破坏细胞结构导致微生物死亡。
高温杀菌 1）干热灭菌法：焚烧、烧灼、干烤
2）湿热灭菌法：煮沸、巴氏消毒法、 高压蒸汽法
湿热对一般营养体和孢子的杀灭条件： 多数细菌和真菌的营养细胞：在60℃左右处理5-10分钟；
酵母菌和真菌的孢子：用80℃以上温度处理； 细菌的芽孢：121℃处理10分钟以上；
3）其它湿热灭菌方式：1）巴斯德消毒： 60-85℃处理15秒至30分钟
2）煮沸消毒 、3）间歇灭菌
4）瞬间加压灭菌（超高温灭菌， UHT）
135-150℃，5-15秒，工业上发酵培养基；135-150℃，2-6秒，牛奶或其它液态食品
低温保种：实践中，采用低温保藏食品，防止杂菌生长；以及低温保藏菌种。
(2)辐射：辐射灭菌(Radiation Sterilization)是利用电磁辐射产生的电磁波杀死大多数物质上的微生物的一种
有效方法。用于灭菌的电磁波有紫外线(UV)、X-射线和γ-射线等
可见光（400-760nm）：杀菌效果不明显；紫外线（200-400nm）：杀菌效果明显，但穿透能力不强，只能用于表面灭菌。
（3）氧气：据微生物对氧气的敏感性：好氧微生物、厌氧微生物、兼性需氧
氧气对微生物的毒害机制：产生活性氧（超氧负离子、过氧化氢、羟基自由基）
（4）pH值 ：
影响膜表面电荷的性质及膜的通透性，进而影响对物质的吸收能力。改变酶活、酶促反应的速率及代谢途径。环境pH值还影响培养基中营养物质的离子化程度，从而影响营养物质吸收，或有毒物质的毒性。 各种微生物都有其生长的最低、最适和最高pH值。低于最低、或超过最高生长pH值时，微生物生长受抑制或导致死亡。 （5）.渗透压
? 微生物对渗透压有一定适应能力。高渗溶液 - 质壁分离，低渗溶液 - 细胞膨胀破裂。 ? 普通微生物一般在 0.85-0.90 ℅的食盐溶液（即生理盐水）中生长。 ? 根据微生物对高渗透压耐性的不同，将其分为：嗜盐微生物、耐盐微生物 。 ? 一般细菌在浓盐液或浓糖液中不能生长、繁殖，所以糖或盐可以保存食品。 6、控制微生物的化学因素：
（1）灭菌（sterilization）采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。
（2）消毒（disinfection）是一种采用较温和的理化因素，仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的病原菌，而对被消毒的物体基本无害的措施。
（3）防腐（antisepsis）是利用某种理化因素完全抑制霉腐微生物的生长繁殖，从而达到防止食品等发生 （4）化疗（chemotherapy）即化学治疗。利用具有高度选择毒力（对病原菌具有高度毒力而对宿主无显著毒性）的化学物质来抑制宿主体内病原微生物的生长繁殖，借以达到治疗该传染病的一种措施。
7、石炭酸系数：在一定时间内被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度和达到同效的石炭酸的最高稀释度的比率。一般规定处理时间为10分钟，而供试菌定为伤寒沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。
8、化学消毒剂的类型与杀菌原理：
第七章 微生物遗传和变异
1.遗传和变异的物质基础
1）遗传型：生物的全部遗传因子及基因
表型（表现型）：具有一定遗传型的个体，在特定环境条件下通过生长发育所表现出来的形态等生物学
特征的总和。
2）基因：是一段特定的DNA碱基序列，是遗传的功能单位
基因组（genome）： 一个物种的单倍体的所有染色体及其所包含的遗传信息的总称
3）染色体：主要遗传成分，携带基本代谢的全部基因，通常呈共价闭合环状，一般只有一条，在细胞中
以紧密缠绕成的较致密的拟核(nucliod)，其上结合有类组蛋白蛋白质和少量RNA分子。
4）质粒：一种独立于染色体外，能进行自主复制的细胞质遗传因子。
通常以共价闭合环状的超螺旋双链DNA分子存在于细胞中；质粒分子的大小范围从1kb左右到