注册分类：化药六类 CTD资料
线性范围 进样精密度试验 重复性试验 中间精密度试验 回收率试验 *********在2.02～20.51mg/ml范围内线性良好 6次进样RSD为0.60%，说明仪器的精密度良好 6份样品含量RSD为0.12%，本方法重复性良好 中间精密度良好 回收率为100.7%，说明该方法准确度良好
3.2.P.5.3.1样品信息
表3.2.P.5.3-5 方法验证用样品信息
制剂 自制 自制 自制 原研 批 号 批 量 试制日期 试制地点
3.2.P.5.3.2性状
取本品，自然光下目测，结果见表3.2.P.5.3-6。
表3.2.P.5.3-6性状检查结果
批 号 性 状 100405 类白色片 100406 类白色片 100407 类白色片 ********* 类白色片 参照***将本品的性状拟定为：本品为类白色或淡黄色片。 3.2.P.5.3.3鉴别
照含量测定项下的色谱条件，分别量取供试品溶液以及对照品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图；结果见表3.2.P.5.3-8及图3.2.P.5.3-16。
表3.2.P.5.3-8 样品保留时间对照表
样品 保留时间 3.2.P.5.3.4检查 1、 有关物质
1.1 仪器、试药及色谱条件
仪器：岛津LC-20AT，SPD-20A液相色谱仪 色谱工作站：LC-solution
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对照品 16.446 100405 16.434 100406 16.423 100407 16.405 117315 16.394 注册分类：化药六类 CTD资料
色谱柱：XB-NH2（4.6*250mm，5μm）,月旭材料科技（上海）有限公司 检测波长：210nm 流速：2.0mL/min 柱温：35℃
试剂：乙腈：美国Tedia试剂公司，色谱纯；
磷酸氢二钠、磷酸二氢钾：国药集团化学试剂有限公司，分析纯；
1.2流动相的选择 （1）
乙腈：磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钾600mg,磷酸氢二钠279mg，加水100ml溶解并稀释至1000ml）（72：28） （2）
乙腈：磷酸盐缓冲溶液（取磷酸二氢钾600mg,磷酸氢二钠350mg，加水900ml溶解并稀释至1000ml）（75：25） 1.3检测波长的选择
参考*********原料和*********片新药转正标准有关物质项下的色谱条件，将有关物质测定检测波长定为210nm。 1.4 辅料干扰试验
称取辅料空白样品（除不含*********主药外，其余均与样品成份一致）450mg，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理2分钟，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果辅料在10分钟之前出峰，不干扰本品的有关物质检测。（见图3.2.P.5.3-3） 1.5 杂质定位
取*********杂质A、B、C、D混合对照品适量，精密称定，加水溶解并稀释制成每1ml中约含1mg的溶液，精密量取10?l注入色谱仪，记录色谱图，结果见图3.2.P.5.3-4-1。 1 .6 系统适用性试验
取相对保留时间试验项下供试品溶液，精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，理论板数按*********峰计算不得低于2500，*********峰与相邻杂质A峰的分离度应符合要求。结果见图3.2.P.5.3-5。
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由图3.2.P.5.3-5可知，*********主峰保留时间为23.953min，按*********峰相对保留时间为1.0计算，杂质A的相对保留时间为0.91。在系统适用性的色谱图中，*********的理论板数为23487，*********与杂质A达到基线分离。 1.7破坏性试验
（2）酸破坏
取本品细粉适量（约相当于*********0.250g），置25ml具塞试管中，加1mol/L盐酸溶液5ml，静置30分钟，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
（3）碱破坏
取本品细粉适量（约相当于*********0.250g），置25ml具塞试管中，加1mol/L氢氧化钠溶液5ml，静置30分钟，加1mol/L盐酸溶液5ml，再用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
（4）光破坏
取细粉适量（约相当于*********0.250g），置照度为4500lx的光照箱中放置24小时，照未破坏供试品溶液项下操作。
（5）高温破坏
取本品细粉适量（约相当于*********0.250g），置25ml具塞试管中，加水适量，置水浴中加热2h，放冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
（6）氧化破坏
取本品细粉适量（约相当于*********0.250g），置25ml具塞试管中，加水适
量，0.9%H2O2 0.5ml，使润湿，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
另取0.5ml H2O2，置25ml具塞试管中，加水稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
精密量取上述供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍，结果见图3.2.P.5.3-6。
破坏试验结果表明：
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1.8 检测限
精密称取*********对照品250mg，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释到刻度，摇匀，精密量取续滤液1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度摇匀，作为对照品溶液贮备液。取上述*********对照品溶液适量，按1：10比例逐步稀释，结果见表3.2.P.5.3-12，图3.2.P.5.3-7。
表3.2.P.5.3-12 检测限测定结果
成分 检测限（ng） ********* 103 A 51.29 B 53.56 C 48.55 D 47.90 E 85.91 F 77.90 G 79.45 H 55.97 1.9溶液稳定性试验
按照供试品溶液制备的方法配制供试品溶液和对照溶液。测定法：分别在0、2、4、6、8、12小时，精密量取取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，记录主峰面积和各杂质含量。结果见表表3.2.P.5.3-13。
表3.2.P.5.3-13 溶液稳定性试验结果
结果显示，供试品水溶液在室温下12h内基本稳定，且在稳定性时间内主成分峰面积的RSD< 2.0%。 1.10耐受性试验
在上述色谱条件下，分别将流动相流速浮动10%左右、流动相比例浮动2%左右，考察系统耐受性，结果见表3.2.P.5.3-14。
表3.2.P.5.3-14 系统耐受性试验结果
测 定 条 件 比例±2% 流速±10% 保留时间（min） 拖尾因子 理论板数 分离度 有关物质（%） 结论：以上试验结果表明，当测定条件发生细小的变动时，测定结果能通过设计的系统适用性试验。说明该方法本身对于可变试验因素的抗干扰能力较强，可以用于本品的有关物质测定。
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1.11测定法
通过上述试验，拟定本品有关物质测定方法如下： ******************* 1.12 样品测定
用上述方法分别对三批样品（100405、100406、400407）及上市样品进行有关物质检查（见图3.2.P.5.3-8）。结果见表3.2.P.5.3-15。
表3.2.P.5.3-15有关物质检查结果
批 号 杂 质 A B C D 最大未知单杂（%） 总杂（%） 结 论 限度（%） 1.2 100405 0.33 符合规定 100406 0.35 符合规定 100407 0.09 符合规定 ********* 0.30 符合规定 2、含量均匀度 取本品及上市样品，按上述方法测定含量，结果见表表3.2.P.5.3-16。
表3.2.P.5.3-16 含量均匀度测定结果
批 号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 100511 100.8 102.0 102.8 101.4 101.4 101.7 100.0 101.4 99.20 101.1 101.2 2.91 符合规定 100513 101.6 101.4 101.6 102.0 100.7 100.5 99.98 101.1 101.0 101.0 101.1 2.07 符合规定 100515 102.6 101.7 101.4 100.6 102.1 102.7 100.9 100.9 101.8 101.8 101.7 3.07 符合规定 上市样品 101.9 101.6 101.4 101.6 101.8 101.2 102.1 101.4 101.7 101.7 101.6 2.24 符合规定 X平均 A+1.80S<15.0 结 论
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