Agilent1260型高效液相色谱仪验证报告 VR-SB-3020 基线漂移和基线噪声的测定：
检查漂移和噪声不超过规定忽略的水平。 a 检查之前的准备
项目 使用检测器与计算机工作站相连。 以1.0mL/min的流速输送甲醇。 b 检测过程 项目 打开各模块的电源开关,仪器应能通过初始化。 当状态指示灯为关（而电源指示灯亮时），模块处于预运行状态，做好开始分析的准备。 开启工作站，设定波长为254nm。流速1.0mL/min 使其走基线2小时。在走基线的第二个小时期间测量基线的最大波动，以此值作为基线漂移值。 使其走基线10分钟。使用此结果数据测量最大噪声值，并且以此值作为噪声值。在测量噪声时，不考虑所有基线漂移数据。 7.3.4.5 自动进样器进样精密度控制检查 a 检查之前的准备
项目 使用自动进样器与计算机工作站相连。 以1.0mL/min的流速输送甲醇。 准备好萘+甲醇溶液 b参数设定 设备 泵单元 柱温箱 时间程序 UV检测器 流动相 计算机工作站 参数 流速：1.0mL/min、最大压强:20.0MPa 柱箱温度：40℃ 5.00min停止 波长：273nm、灵敏度：2（1V/AU） 甲醇 设定停止时间为5.00min、进样为6次 验证结果见（附件7高效液相色谱仪运行确认记录）只有运行确认符合要求后，才能进行下一步的性能确认 7.4 性能确认 7.4.1 性能确认的目的
确认Agilent1260型高效液相色谱仪是否符合检验和GMP管理的要求。 7.4.2 所需设备
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Agilent1260型高效液相色谱仪验证报告 VR-SB-3020
项目 流动相 色谱柱 样品 水 异丙醇 7.4.3 验证过程 7.4.3.1系统准备 项目 检查LC系统的所有连接。 检查LC系统的管路。 清洗系统管路。方法如下： 在管路清洗之前，务必从系统中卸下色谱柱，并且在原色谱柱的位置安装一个1.6C螺丝-螺丝单元。 首先使用异丙醇清洗管路，然后使用水清洗。每种溶剂以2mL/min的流速清洗10min。 清洗完成后，向储液瓶中加入流动相（乙腈：水=4:1(v/v)),重新将色谱柱安装在系统中。 7.4.3.2 验证过程中设备的参数 设备 泵单元 柱温箱 时间程序 UV检测器 计算机工作站 7.4.3.3 验证方法 项目 打开泵开关及检测器开关，通过自检。 打开计算机工作站，设定参数值。 在泵单元模块上设定流速为1.00mL/min。 在柱箱单元模块上设定柱箱温度为40℃。 按泵单元模块上的开始键，柱温箱单元模块上的开始键，泵单元模块上的开始键运行，柱箱温度开始上升。 此时观察检测器池出口管是否有液体流出，并且检查所有管路连接处是否有漏液。 设定检测器参数。 监测基线。 当基线平稳后，在进样器单元模块上设置20ul的进样体积，然后启动进样程序，进入流动相，观察是否有色谱峰出现。 第 12 页 共 15 页
备注 乙腈：水=4:1（体积比） 乙腈溶剂为HPLC级 4.6mm×长150mm的色谱柱 准备：称量10mg吡啶，置于100mL容量瓶中，加入乙腈溶液至刻度。 取上述溶液1mL至10mL容量瓶中，用乙腈溶液定容。 HPLC级 HPLC级 参数 流速：1mL/min、最大压力:20.0MPa 柱箱温度：40℃ 7.00min停止 波长：254nm、灵敏度：2（1V/AU） 停止时间：7min、进样次数：5次 Agilent1260型高效液相色谱仪验证报告 VR-SB-3020
进试验样品，进行分析。至少重复该操作5次。 根据5次成功分析结果，计算保留时间，峰面积和峰高的变异系数（C.V.’s） 7.4.3.4 可接受标准 标准 7.4.3.5 计算公式 RSD(C.V.)=(SD/X)×100
保留时间 ≤0.5% 峰面积 ≤1.0% 峰高 ≤1.0% SD??(Xi?X)i?1n2n?1
X=(X1+X2+……Xn-1+Xn)/n 式中：n：分析次数；
X1…Xn：各个峰的保留时间（面积/峰高）；
X：平均值；
SD：标准偏差； C.V.：变异系数。
验证结果见（附件8高效液相色谱仪性能确认记录）：高效液相色谱仪性能确认记录。 8. 偏差处理：
偏差处理情况
是否有偏差： □有(记录见附表9) □无 备注：在相应的“□”内“?” 9. 方案修改记录： 方案修改记录
是否有修改： □有(记录见附表10) □无 备注：在相应的“□”内“?” 10. 风险的接受与评价 验证小组按验证方案中风险评定的内容进行验证，对存在的质量风险按提出的措施进行预防和纠正。经验证小组确认，对判断为高级别的风险采取的控制措施经检查确认符合要求，则其相应的风险可降至为可接受风险。
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序号 风险 因素 流速准确度和精密泵 2 3 4 度不符合要求 梯度不准确 柱温箱 温度不准确 进样器 进样体积不准确 1.保留时间漂移 2.峰面积不准确 导致检测结果不准确 检测结果不准确，保留时间漂移 检测结果不准确 检测结果不准确 1.平衡时间延长 基线噪5 音和基线漂移 基线噪音大，基线漂移 2.检测限降低导致小的杂质不能被检出，检测结果不准确 3.错把基线波动当杂质，或杂质当基线波动 6 第 14 页 共 15 页
风险 可能影响效应 现有控制措施 S P D RP风险N 级别 是否符合标准 1 定期校验流速（1.0ml/min） 2 3 3 18 低 □是 □否 定期校验梯度准确度和线性 定期校验柱温箱温度 1定期检定进样器准确度 2.每月清洁一次仪器管路 3 2 3 18 低 2 3 2 12 低 3 3 2 18 低 □是 □否 □是 □否 □是 □否 1.每月清洗一次仪器 2.安装流动相在线过滤器 3.流动相离线脱气 3 3 1 9 低 □是 □否 进样精密度 进样精密度不够 检测结果不准确 定期进行进样精密度测试 3 2 2 12 低 □是 □否 Agilent1260型高效液相色谱仪验证报告 VR-SB-3020 11. 验证结果及评价
评价人： 日期： 年 月 日 12. 验证周期
12.1 设备重大维修后，必须验证；
12.2 设备性能达不到检验要求时，必须验证； 12.3 正常情况每两年验证一次。 13. 最终批准
批准人： 14. 附件
14.1 附件1：人员培训签到表 14.2 附件2：URS符合性评估表 14.3 附件3：GMP符合性评估表
14.4 附件4：职业健康、安全与环保符合性评估表 14.5 附件5：仪器仪表检定或校准检查记录 14.6 附件6：柱温箱验证表
14.7 附件7：高效液相色谱仪运行确认记录 14.8 附件8：高效液相色谱仪性能确认记录 14.9 附件9：偏差调查处理报告 14.10 附件10：方案修改记录
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