（4）用9、10管的数据修正各管的A420，计算各底物浓度[S]和反应速度V（?moles/nim ），画出三条V～[S]关系曲线，计算1/V和1/[S]，画出Lineweaver-Burk双倒数关系图。
（5）根据Lineweaver-Burk关系图评价抑制方式，并计算Km、Vmax由斜率计算棉子糖和果糖的KI，然后分别计算表观Km’。
（注：若室温较低，本实验可用恒温水浴恒温于25℃或30℃）。
附录：
试剂配制方法：
1. 1M乙酸：取5.8ml冰乙酸（17M）加H2O稀释至100ml。
2. 0.5M NaOH：称2g NaOH 溶于100 ml H2O。
3. 0.5M HCl: 取4.2 ml浓HCl（12M）加入H2O中，稀释到100 ml（注意必须是酸缓慢倒入水中，决不可反之）。
4. 0.02M pH7.3 Tris -HCl缓冲液：
先配0.1M Tris Buffer贮液：称1.21g Tris（三羟甲基氨基甲烷MW 121.1）加70 ml H2O溶解，再滴加4M HCl约21 ml，调pH=7.3，再加H2O至100ml。取此贮液50ml，加H2O 至250 ml。
5. 4M HCl：取166.7ml浓HCl (12M)，加H2O至500ml。 6. 0.02mol/L pH7.3 Tris -HCl缓冲液（含0.2mol/L浓度NaCl）：
称0.584g NaCl(MW 58.4）用0.02mol/L pH7.3的Tris -HCl缓冲溶液溶解，并定容到50ml。
7. 0.2mol/L Sucrose：称3.423g Sucrose(MW 342.3)加H2O溶解，定容到50 ml，分装在10个小试管中冰冻保存。
8. 0.2mol/L pH4.9乙酸缓冲液。
称2.461g无水乙酸钠（MW 82.03）溶于150 ml H2O，加约40~50 ml 0.2M乙酸，调pH=4.9，存于4℃冰箱，瓶口用薄膜封口。
9. 0.5mol/L Sucrose：称8.558g Sucrose，加H2O溶解，定容到50 ml，分装于小试管中，冰冻保存。
10. 5mmol/L Sucrose：取0.5mol/L Sucrose, 冲稀100倍。
11. 4mmol/L Glucose：取40ml 10mmol/L Glucose，加H2O 稀释至100ml，或称0.072g Glucose(MW 180.2)，加H2O溶解定容至100 ml。
12. 4mmol/L Fructose ：称0.072g Fructose(MW 180.2)加H2O溶解，定容至 100 ml。 13. 4mmol/L Sucrose：称0.137g Sucrose，加H2O溶解定容到100 ml，现用现配。 14. 0.2mol/L 柠檬酸C6H8O7·H2O（MW 210.14）：称4.203g溶于100 ml H2O。 15. 0.2mol/L乙酸：取1.18 ml冰乙酸（17M）或3.3 3ml 36% 乙酸（6M）加H2O至100 ml。
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16. 0.2mol/L乙酸钠：称1.641g无水乙酸钠溶于 100 ml H2O。
17. 0.2mol/L磷酸二氢钠NaH2PO4·2H2O(MW 156.01)：称3.120g溶于100 ml H2O。 18. 0.2mol/L磷酸氢二钠Na2HPO4·12 H2O(MW 358.14)：称7.163g溶于100 ml H2O。 19. Nelson's试剂：
（1）Nelson's A：称25.0g无水Na2CO3，25.0g酒石酸钾钠，20.0g NaHCO3 ，200.0g无水Na2SO4，缓慢溶于H2O，稀释至1000 ml。
（2）Nelson's B：称15.0g CuSO4·5H2O溶于H2O，加2滴浓H2SO4，用H2O稀释至100 ml，使用时，取50ml Nelson's A，加入2ml Nelson's B，此溶液易出结晶，可保存在高于20℃处，若出现结晶，可用温热水浴溶化之。 20. 砷试剂（偶氮砷钼酸盐试剂）（教师配）：
称50.0g钼酸铵，溶于900 ml H2O，搅拌下缓慢加入42 ml浓H2SO4，再称6.0g砷酸钠或砷酸氢二钠，溶于50 ml H2O，混合这两份溶液，加H2O至1000 ml，37℃保温24~48小时，室温暗处存于棕色塑料瓶。
21. 4mol/L尿素（脲）：称12 .01g (NH2)2CO (MW 60.06)，溶于30 ml H2O，加H2O稀释至50 ml。
22. 0.5mol/L棉子糖Raffinose： 称2.97g棉子糖（密三糖）（MW 594.53），溶于6 ml H2O，稍加热助溶，加H2O稀释至10 ml，当日新配，不可存于冰箱，否则易结晶析出。 23. 0.5mol/L果糖Fructose：称0.9g Fructose C6H12O6(MW 180.16)溶于H2O，稀释至10 ml，当日新配。
24. 0.1mol/L磷酸钠缓冲液：称15.6g NaH2PO4·2H2O溶于800 ml H2O，用10% NaOH调pH=7.0，加H2O至1000 ml，配G—O试剂用。
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