分离到的癌基因有几十种，其中很大一部分有癌基因产物 2、细胞癌基因
能与病毒癌基因杂交→有一部分是病毒癌中没有的，近百种 ①病毒癌基因与细胞癌基因相比较，通常失去了两端的某些序列 ②病毒癌基因缺乏内含子，而细胞癌基因中有，其外显子序列与细胞癌同
源性强（mRNA=cDNA）
③病毒癌基因与细胞癌基因的外显子有细微的差别（所以其具有转化能力） 原癌基因产物：维持细胞增长、分化
⑴生长因子有其类似物。⑵信号传递蛋白→引起细胞递增。⑶蛋白激酶。 ⑷细胞生长核因子（DNA结合蛋白） 激活癌基因的因素：
⑴原癌基因突变 ⑵获强启动子 ⑶甲基化程度下降 ⑷拷贝数增加 ⑸基
因易位或重排
3．抑癌基因：功能不太明晰 ①参与细胞黏合
②细胞周期负调控因子：终止细胞生长，促进细胞衰老、死亡
将单一抑癌因子导入癌细胞中未必能终止癌变
4．增变基因：
负责维持染色体组完整性和信息传递的保真度，该类基因的突变导致DNA错误率上升。
11
第五章 转录
一．编码链与模板链、反义链
上游，下游 转录起始位点：+1 二．RNA聚合酶
1．E．coli的RNA聚合酶：
大部分原核生物的RNA聚合酶的结构十分类似
E．coli中一个细胞中大约有7000个RNA聚合酶分子，其中一般有2500-5000
个在参与RNA合成，速度在37℃下约为40b/s（有多种说法）
①核心酶：α2ββ
，，
+δ称为全酶
a．各亚基的作用：
⑴β亚基：可能具有与底物（NTP）及新生成的RNA链结合的能力
利福霉素可阻断新生成的RNA链转移至RNA酶的结合位点，阻断新生RNA链的第3或4个核苷酸增加
链霉溶菌素可抑制延伸反应，二者均是与β结合的 ⑵β亚基：可能与模板结合
肝素可与β亚基结合而抑制转录，并且可以与β亚基竞争DNA的结合位点
⑶α亚基：可能参与全酶组装与全酶识别启动子，还可能与一些转录因子结合
大肠杆菌T5和T7噬菌体RNA聚合酶仅一条多肽链，表明一条链即可完成合成，E .coli的多条链可能与功能复杂性有关（识别1000个以上转录单位的启动子）→真核生物的更复杂。 b．核心酶与DNA结合
松驰型结合，结合常数 2/mol半衰期60min，属DNA磷酸基因与蛋白质碱性基因间非特异吸附
③δ因子：α2ββ+δ＝全酶
12
a．作用：负责模块链的选择和转录的起录，是酶的别构效应物，使酶专
一性识别模板上的启动子 →加入δ因子后使RNA聚合酶与DNA上非特异结合下降了几百-几千倍，使结合半衰期小于1s，使酶与启动子区结合常数提高几百倍，半衰期达数小时甚至数十小时。
例：核心酶在T7噬菌体DNA上有约1300个结合位点，平均结合常数
2 X 10 ，加入δ后，两大类，大部分在10-10间，仅8个在10
b．δ因子的替换
E．coli中，δ因子与转录因子协同可识别不同启动子
通常情况下，E.coli中用δ70（rpoD编码），rpoH编码δ32热休克
蛋白，rpoN编码δ54缺氮使用。 分子伴侣：概念及其特征
在枯草杆菌中有约10种δ分子，δ因子的更替意味着生活史的更替，
δ55主要出现在营养细胞中，δ29主要出现于孢子形成阶段
噬菌体SPO1感染：早期基因 4-5min后中期，8-12min后晚期基因 早期基因有与寄主相同启动子，由宿主α2ββδ43转录，中期基因
转录28编码δ因子（gp28）以修饰宿主RNA聚合酶，中期基因33、34（gp33、gp34）代替gp28
2．真核生物的RNA聚合酶
对鹅膏蕈 定位 转录产物 相对活性 （xun）碱敏感性 RNA polⅠ RNA polⅡ RNA polⅢ 核仁 核质 核质 tRNA 核RNA tRNA 50%-70% 20%-40% 10% 不敏感 敏感 不同种类的敏感性不同 分子量均很大为500KD以上，由8-14亚基组成（不能正确选择启动子） 线粒体与叶绿体中还存特殊的RNA聚合酶
11
8
912
-10
14
13
三．启动子
指DNA分子上被RNA聚合酶识别并结合形成起始转录复合物的区域，它还包括
一些调节蛋白因子的结合区
1．确定启动子区域的方法
①足迹法：内切酶切割末端标记的DNA分子 ②修饰法：结合部位不被修饰 2．原核生物的启动子
①转录起始位点 〉90%以下的为嘌呤，绝大多数为A
②-10区（Pribnow框）：TATAAT， RNA聚合酶的牢固结合位点，解链区 ③-35区 TTGACA（Sextama框）：δ因子识别位置，初始结合位置 ④-10—-35区距离：17b 3．真核生物启动子：
①RNA聚合酶Ⅰ的启动子：只转录rRNA，核心启动子（-45--+20），上游调
控元件（UCE -180—-107） ②RNA聚合酶Ⅱ的启动子：最复杂
a．帽子位点，转录起始位点，大多为A（非模块链） b．TATA框 （Hogness框）：-30处 TATAA（T）AA（T） c．CAAT框 -75bp GGC（T）CAATCT 影响最大 d．GCbox：-90Ｂ左右 GGGCGG 每启动子可有多个拷贝
③DNA聚合酶Ⅲ的启动子：（5SrRNA、tRNA、SnRNA） 5SrRNA、tRNA：内部启动子 4.转录起始
①原核生物，RNA聚合酶与启动子结合后，与DNA形成封闭型启动子复合物，然后-10区左右的DNA发生熔解，形成12-17b的单链区，形成开放型启动子复合物，二者均为二元复合物。这时RNA聚合酶大约与75bp的DNA（-55-+20）相互接触，在开放型启动子起始复合物中，RNA聚合酶上的起始位点和延伸位点被相应的NTP占据，在β亚基的催化下形成第一个磷酸二酯键，从而形成
14
三元复合物，δ因子解离下来，形成复合物，此时核心酶约与55bp（-35-+20）的DNA相互接触
②真核生物RNA酶需其他辅助因子作用才能起始转录
对Ⅱ：通用启动子指RNA聚合酶Ⅱ可起始转录的最短的启动子序列，可在任何细胞内表达而无组织特异性，能使这类启动子起始转录所需的辅助因子称为基础转录因子
四．转录的终止（原核生物） 1．不依赖ρ因子的终止
终止位点上游存在一个富含GC碱基的二重对称区，由其产生的RNA很易形成发夹结构。随后有-4—8个A，转录为U，A-U不稳定，终止效率取快于发卡与U的长度
2．依赖ρ因子的终止
5 ρ：有依赖于RNA的ATPase活性，RNA长度要大于50nt。 2?10六聚体蛋白，
3．抗终止作用
①破坏茎—环结构 ②蛋白质抗终止→基因表达调控的一种方式 五．原核生物与真核生物mRNA特征比较
1．原核生物mRNA特点（原核生物rRNA、tRNA要进行转录后加工，而mRNA则不）
①半衰期短：一般认为转录开始1min后，降解就开始了
②以多顺反子形式存在：第一蛋白合成后，核糖体分解（但往往第一对第二有调控作用，打开mRNA二级结构）
③无5’帽子、3’尾，有SD序列与16SrRNA3’端反向互补 16SrRNA该与SD配对区自身可形成二级结构（解释）
2、核生物mRNA的特点
①5’加帽，反应快速，5’终端是一个在mRNA转录后加上去的甲基化鸟嘌呤。加“G”是由腺苷酸转移酶完成的，GTP与原mRNA上5’三磷酸腺苷缩合，
15