第一个甲基出现在所有真核细胞mRNA中，由尿苷酸7’-甲基转移酶催化为“0”号，第二个是在第二个核苷酸2-OH上由2-δ-甲基是转移酶加一个甲基。“1”号，真核生物以之为主，第二位为腺嘌嘧时，N6甲基化。在1号基础上，第三位2’-OH上甲基化称“2”帽。 作用：a.为核糖体识别mRNA提供信号
b．增加mRNA稳定性
c．某些RNA病毒的正链RNA合成有关
②.3’加尾：多数真核生物（酵母外）mRNA3’有poly（A）尾巴：组蛋白无
poly（A）
poly（A）并非加于3’末端上，首先由一360KD内切酶与其他蛋白识别切割位点上游13-20碱基的AAUAAA与下游的GUGUGUG（少数例外），切除一段序列后，由RNA末端腺苷酸转移酶催化，以ATP为前体，在3’端加上poly（A）AAUAAA保守性很强，过程很复杂。
Poly（A）是mRNA由细胞核进入细胞质中的必需形式，大大提高了mRNA在细胞质中稳定性。
③.内含子的剪接、编辑与化学修饰
RNA的编辑是指某些RNA特别是mRNA的一种加工方式，它导致了DNA所编码的遗传信息的改变，因为经过编辑的mRNA序列发生了不同于模板DNA的变化。 a.核基因mRNA的剪接。
⑴5’（左剪接点）GT-AG（右剪接点3’）内含子3端约302上b处有一
高度保守A
供体位点 受体位点 分支位点（高等生物无A时取靠近A的类似序列）。 ⑵snRNA与剪接体
snRNA：核内小核糖核蛋白
真核生物细胞的细胞核与细胞浆中，存在着很多小分子RNA，长度在100-300个b，在酵母中可达到1000个b，细胞核中的小分子称为snRNA，位于胞质中的称为scRNA，它们均以核蛋白形式存在，分别称为snRNP和scRNP，一个snRNP
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一般含有一个RNA分子和10个左右蛋白质分子
参与剪接的成分形成一个剪接体系，称为剪接体（snRNA参与） snRNp
⑶剪接机制：在剪接体参与下
转酯反应：UACUAAC的A向5’点发动攻击，开成酯键，游离的外显子3’端攻击受体切割位点换出一个套索结构
b.第一类内元的剪接，自剪切：中部核心结构 内部可形成明显二级结构，以之提供自剪活性位点
四膜虫rRNA内含子：体外进行无需能量，需要一价离子，二价离子，鸟苷酸辅助因子（GTP、GDP、GMP）只要求3’-OH，第一次G3-OH攻击5产生G3’-内含子与外显子3’-OH，外显子3’-OH，外显子3-OH攻击别一外显子并与之连接，入出线性内含子（可环化）
c.第二类内元的剪切：自剪切
最早发现于线粒体：剪切机制与真核mRNA相似，但无需外来因素协助 d.酵母tRNA剪接
分两步进行：第一步由核酸内切酶切断磷酸二酯键，该反应属非典型核酸酶反应不需ATP。第二步由RNA连接酶将断裂端连接形成tRNA分子，需ATP参与。由于切开的两个tRNA半分子每个5’为-OH，3’为2’-3’环形磷酸基因，需加入ATP使2’-3’磷酸变为’2-磷酸基团与3’-OH，5’-OH需磷酸化为磷酸基团，连接后还需去除2’磷酸，剪切才能完成 六．hnRNA
真核生物细胞核中有一类核RNA，十分不稳定，平均长度比mRNA要长，序列的复杂程度非常高，称为hnRNA。hnRNA以与蛋白质结合的状态存在，形成hnRNA，体外研究表明hnRNA的形状为一个球体和一个与之相连的纤维状结构。应该是mRNA的前体
①在真核生物细胞核中存在，代谢十分活跃，平均大小2?107，大小十分不均一，细胞质中mRNA的平均相对分子质量仅为1.5?106
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②hnRNA很不稳定,半衰期仅5-15min,真核mRNA寿命较长
③以放射性同位素作脉冲标记表明，75%被标记的RNA是hnRNA，大部分位于核内，只有1%进入细胞质
④hnRNA占细胞全部RNA的3%，表明其无法累积
⑤hnRNA也有poly（A），以标记表明，45-95%poly（A）RNA在核内，150min后20%poly（A）RNA被运到细胞质中
遗传密码子：1。密码子的简并性，简并密码子的特征→第三位
AUG、GUG、UAA、UAG、UGA
2．密码的偏奇性
3．摆动学说：在密码子与反密码子的配对中，前两对严格遵守碱
基配对原则，第三对有一定的自由度，可以“摆动”，因而使某些tRNA可以识别1个以上的密码子
tRNA 受体臂上3’末端未配对，最后三个永远是：3ACC最后一个碱基的3’或2’自由羟基（-OH）可以被氨酰化
tRNA的稀有碱基有70余种，每个tRNA到少含有2个稀有碱基，最多可有19个，多数位于非配对区，特别是反密码子3’端邻近位置出现频率最高，对于维持反密码子环稳定及密码子与反密码子配对是很重要的
核糖体必须包括至少5个活性中心：mRNA结合部位，结合或接受AA-tRNA部位（A位），结合或接受肽基tRNA的部位，肽基转移部位（P位），形成肽键的部位（转肽酶中心）
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小亚基：负责对序列特异的识别过程，如起始部分的识别，密码子与反密码子的相互作用等，mRNA结合位点即在此亚基上
大亚基：负责氨基酸及tRNA携带的功能，如肽键的形成、AA-tRNA、肽基-tRNA的结合等，所以A位、P位、转肽酶中心等主要在大亚基上
第六章 原核生物基因表达调控
一．乳糖操纵元
1961年Jacob、Monod提出
分解代谢的基本思路：外界有要分解的东西就开，无就关 1．基本结构
lacI 1040 多肽 四聚体 阻碍子 四聚体 膜蛋白 二聚体 3.8* P O 82 LacE 3510 1.25* lacy 780 3.0* lacA 825 3.0* lacI：阻遏蛋白，可与O区结合，O区以前称操纵基因，现称操纵子
lacZ：β-半乳糖苷酶，将乳糖水解成葡萄糖和半乳糖，还可水解其它β-半乳糖苷
lacY：透过酶，运输乳糖进入细胞
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lacA：乙酰基转移酶，将乙酰基转移到β-半乳糖苷上，形成乙酰半乳糖，在乳糖的利用中非必要成分，Z基因的分解产物往往不能被进一步代谢，易积累产生毒害 2．负调控 ①基本过程
②安慰性诱导物：乳糖↓，含硫乳糖类似物，异丙基巯基半乳糖苷（IPTG）和巯甲基半乳糖苷（TMG），在酶活性分析中常用生色底物O-硝基半乳糖苷（ONPG）。 ③本底水平表达： a.第一个如何进入
b.真正诱导物是异构乳糖，如何生成？（ONPG） 非诱导状态下少量lacmRNA合成，每代大约1-5个mRNA分子 ④Z：Y：A=1:0.5:0.2
与实际应用相区配：a.核糖体脱离 b.A此Z易于降解
⑤P区与O区 P→I基因结束到mRNA转录起始位点，共长82bp（-82） O→ －7—+28
P－ O重叠从而形成竞争，整个调节区划15bp，约为DNA螺旋12圈 ⑥I、O、Z的突变（局部二倍体）
I+O-Z+/I+OcZ+ I-、Z-、Oc 永久表达、永久失活、诱导表达 3．正调控
①葡萄糖抑制表达的可能机理：a.阴止了诱导物所引起的阻谒物失活 b.除去负调控外，还有其它基因共同调控lac
表达
②cAMP与CAP
cAMP：是在腺苷酸环化酶的作用下产生的（ATP），可受葡萄糖分解中一些产
物调节
CAP：分解代谢物激活蛋白 /CRP：环腺苷酸受体蛋白 E.coli由Crp基因编码
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